抗NGLY-1抗体及使用方法技术

在一些实施方案中，本文提供了抗N‑聚糖酶1抗体及其使用方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗NGLY-1抗体及使用方法相关申请本申请根据35U.S.C.119(e)要求2018年5月23日提交的美国临时申请号62/675,715和2018年7月12日提交的美国临时申请号62/697,058的利益，上述两项申请各自通过引用整体纳入本申请。
技术介绍
Ngly1R539X等位基因在小鼠N-聚糖酶1(NGly-1)基因中有一个(1)碱基对替换，其编码无义突变，从而导致过早终止密码子。该突变对应于在患者群体中确定为IV型先天性糖基化障碍(也称为Alacrimia-choreoathesis-肝功能障碍综合征和NGLY1缺陷)的致病变体的R524X突变。
技术实现思路
在一些实施方案中，本文提供了一种与小鼠NGly-1和人NGLY-1特异性地结合的抗体。在一些实施方案中，该抗体包含重链，该重链包含：(a)包含SEQIDNO:3的序列的CDR1，(b)包含SEQIDNO:4的序列的CDR2，和(c)包含SEQIDNO:5的序列的CDR3。在一些实施方案中，抗NGly-1抗体包含轻链，该轻链包含：(a)包含SEQIDNO:14的序列的CDR1，(b)包含SEQIDNO:15的序列的CDR2，和(c)包含SEQIDNO:16的序列的CDR3。本文还提供了包含特异性地结合NGly-1和NGLY-1的抗体的组合物和试剂盒。本文进一步提供了包括使细胞与特异性地结合NGly-1和NGLY-1的抗体接触的方法。这类方法可用于例如诊断具有NGLY1缺陷的受试者。还提供了包含本文所述抗体的诊断试剂盒。本专利技术还提供了使用与NGly-1和NGLY-1特异性结合的抗体治疗癌症的方法。本文提供的抗体可与人NGLY-1蛋白或小鼠NGly-1蛋白特异性结合。为简单起见，应当理解，提及“特异性地结合NGly-1的抗体”或“抗Ngly-1抗体”包括可特异性地结合小鼠NGly-1蛋白和可特异性地结合人NGLY-1蛋白的抗体。附图说明图1显示了NGly-1氨基酸序列283至299(SEQIDNO:45)的抗原指数图(上)、亲水性图(中)和表面概率图(下)。图2显示了NGly-1氨基酸序列442至460(SEQIDNO:46)的抗原指数图(上)、亲水性图(中)和表面概率图(下)。图3显示了全长NGLyc-1与选择的两个候选肽的结构。图4显示了证明本公开的单克隆抗体的抗NGly-1特异性的数据。组织使用C57BL/6J(WT)和JR27060Ngly-1null纯合组织(HOM)从胚胎16.5天脑和心脏收集。图5显示了证明本公开的小鼠抗NGly-1单克隆抗体与人NGLY-1交叉反应的数据。泳道1：F47E6小鼠C57BL/6J(WT)；泳道2：F47E127060小鼠Ngly-1null突变体；泳道3：人iPSC细胞：DGW-A1(NGLY1双重突变体)-源自受影响的患者；泳道4：人iPSC细胞：39B9-1(校正的NGLY-1双重突变体的一个等位基因)；泳道5：人H9野生型ES细胞。图6显示了证明公开可得的抗NGly-1抗体之一检测与天然小鼠NGly-1蛋白大小非常相似的交叉反应蛋白的数据，表明该抗体对NGly-1不是特异性的。所使用的组织从B57BL/6J(JR00664)和纯合Ngly1null(JR27060)胚胎(16.5天龄)分离。图7显示了证明商业上可得的抗NGly-1抗体(SIGMA)对NGly-1不具有特异性的数据。预期大小的主要条带见图A的泳道2、6、9、10、13和图B的泳道1。图A-泳道1：JR00664心脏总提取物；泳道2：JR00664心脏线粒体部分；泳道3：JR00664心脏细胞溶质部分；泳道4：JR00664肾总提取物；泳道5：JR00664肾线粒体部分；泳道6：JR00664肾细胞溶质部分；泳道7：JR00664肝总提取物；泳道8：JR27962肝线粒体部分；泳道9：JR00664肝线粒体部分；泳道10：JR00664肝细胞溶质部分；泳道11：JR00664骨骼肌线粒体部分；泳道12：JR00664骨骼肌线粒体部分；泳道13：JR00664骨骼肌细胞溶质部分。图B-泳道1：C2C12小鼠肌细胞系；泳道2：2H11小鼠内皮细胞系；泳道3：mK4人胚胎肾细胞系；泳道4：NIH3T3小鼠成纤维细胞系；泳道5：JR00664脑总提取物；泳道6：无裂解物对照。组织从JR00664C57BL/6J小鼠品系和JR27962C57BL/6J-Ngly1em9Lutzy/J(Ngly缺陷的)小鼠品系获得。图8A和8B显示了证明使用另一种商业上可得的抗NGly-1抗体(ABCAM)在小鼠C57BL/6J组织中检测62kDa多肽的数据。这是比使用本公开的抗NGly-1单克隆抗体观察到的更小的蛋白质。此外，使用该商业上可得的抗NGly-1抗体检测到针对2-3kDa的小多肽的强烈交叉反应性，并且在脑组织中未检测到62kDa蛋白质的表达。这表明，利用这种商业上可得的抗体检测的蛋白质可能不是小鼠NGly-1。图8B：泳道1：JR00664脑总提取物；v2：JR00664脑线粒体部分；泳道3：JR00664脑细胞溶质部分；泳道4：JR00664肝总提取物；泳道5：JR27962(Het)肝总提取物；泳道6：JR00664肝线粒体部分；泳道7：JR00664肝细胞溶质部分；泳道8：NIH3T3细胞系(小鼠)。图9显示了证明又一种商业上可得的抗NGlyc-1抗体(ENCOR)产生高背景，并且检测的主要蛋白质显著小于预期的数据。从针对来自已知Ngly-1蛋白null品系的裂解物筛选抗体显示了多个条带保留。因此，这种商业上可得的抗体是非特异性的。该抗体针对人NGLY-1的N末端300个氨基酸制备。泳道1：JR00664C57BL/6JE16.5胚胎脑；泳道2：JR27060Ngly1null小鼠E16.5胚胎脑；泳道3：JR28975Ngly1null小鼠E16.5胚胎脑。具体实施方式NGLY1缺陷是一种缺乏NGLY1正常表达或功能的罕见的影响儿童的遗传性障碍。这些儿童表现出整体发育迟缓、肌肉张力的丧失、周围神经病变、癫痫发作、不良反射、语言障碍、泪液产生不足、角膜瘢痕、慢性便秘和/或肝功能障碍。NGLY1的蛋白质产物编码一种称为N-聚糖酶1的酶，也称为PNGase，其催化从糖蛋白的天冬酰胺侧链去除N-连接的寡糖。胞质PNGase活性首先在酿酒酵母中报告(Suzuki等，2000)，随后发现其在许多物种(包括果蝇、秀丽隐杆线虫、小鼠和人)中是进化保守的。本公开的一些方面提供了一种与NGly-1特异性结合并包含重链和轻链的抗体，其中该重链包含(a)包含SEQIDNO:3的序列的CDR1，(b)包含SEQIDNO:4的序列的CDR2，和(c)包含SEQIDNO:5的序列的CDR3，和/或该轻链包含(a)包含SEQIDNO:14的序列的CDR1，(b)包含SEQIDNO:15的序列的CDR2，和(c)包含SEQIDNO:16的序列的CDR3。抗体本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种特异性结合N-聚糖酶1并包含重链和轻链的抗体，其中/n所述重链包含：/n(a)包含SEQ ID NO:3的序列的CDR1，/n(b)包含SEQ ID NO:4的序列的CDR2，和/n(c)包含SEQ ID NO:5的序列的CDR3，和/或/n所述轻链包含：/n(a)包含SEQ ID NO:14的序列的CDR1，/n(b)包含SEQ ID NO:15的序列的CDR2，和/n(c)包含SEQ ID NO:16的序列的CDR3。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180523 US 62/675,715;20180712 US 62/697,0581.一种特异性结合N-聚糖酶1并包含重链和轻链的抗体，其中
所述重链包含：
(a)包含SEQIDNO:3的序列的CDR1，
(b)包含SEQIDNO:4的序列的CDR2，和
(c)包含SEQIDNO:5的序列的CDR3，和/或
所述轻链包含：
(a)包含SEQIDNO:14的序列的CDR1，
(b)包含SEQIDNO:15的序列的CDR2，和
(c)包含SEQIDNO:16的序列的CDR3。


2.根据权利要求1所述的抗体，其中所述重链包含：与SEQIDNO:6的序列至少90％或至少95％相同的框架区；与SEQIDNO:7的序列至少90％或至少95％相同的框架区；与SEQIDNO:8的序列至少90％或至少95％相同的框架区；和/或与SEQIDNO:9的序列至少90％或至少95％相同的框架区。


3.根据权利要求1或2所述的抗体，其中所述重链包含与SEQIDNO:10的序列至少90％或至少95％相同的可变区。


4.根据权利要求1-3中任一项所述的抗体，其中所述重链包含与SEQIDNO:11的序列至少90％或至少95％相同的恒定区。


5.根据权利要求1-4中任一项所述的抗体，其中所述重链包含SEQIDNO:1的序列。


6.根据权利要求1-5中任一项所述的抗体，其中所述轻链包含：与SEQIDNO:17的序列至少90％相同的框架区；与SEQIDNO:18的序列至少90％相同的框架区；与SEQIDNO:19的序列至少90％相同的框架区；和/或与SEQIDNO:20的序列至少90％相同的框架区。


7.根据权利要求1-6中任一项所述的抗体，其中所述轻链包含与SEQIDNO:21的序列至少90％或至少95％相同的可变区。


8.根据权利要求1-7中任一项所述的抗体，其中所述轻链包含与SEQIDNO:22的序列至少90％或至少95％相同的恒定区。


9.根据权利要求1-8中任一项所述的抗体，其中所述轻链包含SEQIDNO:12的序列。


10.一种特异性地结合N-聚糖酶1并包含重链的抗体，该重链包含：
(a)包含SEQIDNO:3序列的CDR1，
(b)包含SEQIDNO:4的序列的CDR2，和
(c)包含SEQIDNO:5的序列的CDR3。


11.根据权利要求10所述的抗体，其中所述重链包含：与SEQIDNO:6的序列至少90％或至少95％相同的框架区；与SEQIDNO:7的序列至少90％或至少95％相同的框架区；与SEQIDNO:8的序列至少90％或至少95％相同的框架区；和/或与SEQIDNO:9的序列至少90％或至少95％相同的框架区。


12.根据权利要求10或11所述的抗体，其中所述重链包含与SEQIDNO:10的序列至少90％或至少95％相同的可变区。


13.根据权利要求10-12中任一项所述的抗体，其中所述重链包含与SEQIDNO:11的序列至少90％或至少95％相同的恒定区。


14.根据权利要求10-13中任一项所述的抗体，其中所述重链包含SEQIDNO:1的序列。


15.一种特异性地结合N-聚糖酶1并包含轻链的抗体，该轻链包含：
(a)包含SEQIDNO:14的序列的CDR1，
(b)包含SEQIDNO:15的序列的CDR2，和
(c)包含SEQIDNO:16的序列的CDR3。


16.根据权利要求15所述的抗体，其中所述轻链包含：与SEQIDNO:17的序列至少90％相同的框架区；与SEQIDNO:18的序列至少90％相同的框架区；与SEQIDNO:19的序列至少90％相同的框架区；和/或与SEQIDNO:20的序列至少90％相同的框架区。


17.根据权利要求15或16所述的抗体，其中所述轻链包含与SEQIDNO:21的序列至少90％或至少95％相同的可变区。


18.根据权利要求15-17中任一项所述的抗体，其中所述轻链包含与SEQIDNO:22的序列至少90％或至少95％相同的恒定区。


19.根据权利要求15-18中任一项所述的抗体，其中所述轻链包含SEQIDNO:12的序列。


20.根据权利要求1-19中任一项所述的抗体，其中所述抗体与N-聚糖酶1之间的平衡解离常数(KD)为100pM至500pM。


21.根据权利要求20所述的抗体，其中所述抗体与N-聚糖酶1之间的KD为200pM至300pM。


22.根据权利要求1-21中任一项所述的抗体，进一步包含可检测标记。


23.根据权利要求22所述的抗体，其中所述可检测标记选自酶、放射性同位素、荧光团和重金属。


24.一种包含权利要求1-23中任一项的抗体的组合物。


25.一种组合物，其包含(a)与NGLY-1蛋白特异性地结合的抗体，其中所述抗NGLY-1抗体和NGLY-1蛋白之间的平衡解离常数(KD)为100pM至500pM，和(b)至少一种用于检测所述抗体的试剂。


26.一种组合物，其包含能够与人NGLY-1蛋白特异性地结合并能够与小鼠Ngly-1蛋白特异性地结合的抗体。


27.根据权利要求26所述的组合物，其中所述抗体和蛋白质之间的平衡解离常数(KD)为100pM至500pM。


28.根据权利要求24-27中任一项所述的组合物，其中所述组合物是进一步包含药学上可接受的载体的药物组合物。

【专利技术属性】
技术研发人员：A·索耶，A·朱贝里，C·M·鲁茨，
申请(专利权)人：杰克逊实验室，
类型：发明
国别省市：美国;US