铁皮石斛多糖在制备靶向肿瘤相关巨噬细胞治疗肿瘤药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及铁皮石斛多糖在制备靶向肿瘤相关巨噬细胞治疗肿瘤药物中的应用，属于植物药物技术领域。本发明专利技术通过体外结合体内实验，首次发现了铁皮石斛多糖可以靶向识别肿瘤相关巨噬细胞膜表面TLR2受体，通过TLR2受体介导促使TAMs由M2型向M1型极化，进而促进CD8

Application of Dendrobium officinale polysaccharide in the preparation of tumor targeted macrophages

【技术实现步骤摘要】
铁皮石斛多糖在制备靶向肿瘤相关巨噬细胞治疗肿瘤药物中的应用
本专利技术属于植物药物
，具体涉及铁皮石斛多糖在制备靶向识别肿瘤相关巨噬细胞治疗肿瘤药物中的应用。
技术介绍
肿瘤是机体在各种致瘤因素作用下，局部组织的细胞在基因水平上失去对其生长的调控，导致克隆性异常增生而形成的新生物，常表现局部肿块。近年来，肿瘤的发病率和死亡率逐渐上升，已成为人类健康的主要威胁之一。据2019年全球癌症统计报告显示，全球每年新增病例1810万例，死亡病例960万例，其中我国是癌症高发的国家，目前我国每年新增病例约占全球的21％，死亡病例约占24％。全球新发癌症发病率最高的依次为：肺癌(11.6％)、乳腺癌(11.6％)、结直肠癌(10.2％)、前列腺癌(7.1％)、胃癌(5.7％)；全球死亡率最高的癌症依次为：肺癌(18.4％)、结直肠癌(9.2％)、胃癌(8.2％)、肝癌(8.2％)、乳腺癌(6.6％)。肿瘤的治疗一直是困扰医学界的难题，目前肿瘤的治疗多采用手术加化疗、放疗相结合的治疗方法，但效果不理想，传统抗肿瘤药物的毒副作用大，在杀伤患者体内肿瘤细胞的同时，也破坏机体正常细胞和免疫细胞，导致多种组织及器官受损，预后恢复较差，恶性进展迅速。因此，亟待研发新的、靶向性强的癌症治疗方法和药物，以提高癌症患者的生存质量和生存时间，寻找安全、高效、特异、低毒的天然抗肿瘤新药逐渐成为中外科研工作者的目标。在肿瘤微环境(TME，Tumormicroencironment)中的肿瘤部位招募的固有性和适应性免疫细胞中巨噬细胞最为丰富，并称其为肿瘤相关巨噬细胞(TAMs，Tumor-associatedmacrophage)，约占细胞总数的30-50％。TAMs是众多细胞因子的重要来源，在肿瘤进展中发挥核心的关键调控作用。多项临床硏究表明，肿瘤中的TAMs的数量和密度与多种肿瘤患者的临床不良预后呈正相关。TAMs是具有高度可塑性和异质性的一个多样化的细胞群体，可根据不同的环境刺激而相应地改变自身表型分化成为具有不同表型标志物和功能特征的细胞亚群，主要分为经典激活的M1型巨噬细胞和替代激活的M2型巨噬细胞两种极化类型。M1型巨噬细胞可由IFN-γ或LPS诱导产生，其主要特点是通过高表达和分泌iNOS、IL-12、IL-23、TNF-α、IL-13、CXCL-9等免疫激活因子调节Th1细胞免疫应答，发挥抗肿瘤免疫监视功能；M2型巨噬细胞可由IL-4、IL-13、M-CSF和糖皮质激素等诱导产生，其主要特点是通过高表达IL-10、TGF-β、Arg1、CD206、VEGF、CCL2、MMP9等免疫抑制因子调节Th2细胞的体液免疫应答，发挥促肿瘤免疫逃逸功能，从而促进组织重塑、血管生成和肿瘤发生。改变TAMs中M1/M2极化平衡可有效抑制肿瘤的发生发展，因此，TAMs正成为抗肿瘤治疗的新靶点。铁皮石斛(DendrobiumofficinaleKimuraetMigo)为兰科(Orchidaceae)石斛属多年生附生草本植物，作为2020年版《中国药典》收录且单列的正品石斛之一，是目前公认的药食同源植物，久服可厚肠胃、增强机体免疫力。现代研究表明，多糖是铁皮石斛中发挥功效的主要活性成分，铁皮石斛多糖在抗肿瘤、提高免疫力、抗氧化等方面都具有显著疗效，尤其是在抑制肿瘤方面，铁皮石斛多糖显示出潜在的治疗价值，具有良好的应用前景。目前有关铁皮石斛多糖抗肿瘤的研究多为体外细胞实验或动物实验，评价机制多数与肿瘤细胞抑制率和细胞凋亡相关，而对于多糖在体内发挥抗肿瘤作用的具体机制尚不明确。迄今尚未有关于铁皮石斛多糖均一组分靶向TAMs治疗肿瘤中的报道，显而易见，靶向TAMs的铁皮石斛多糖将为肿瘤治疗提供一种新策略。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种铁皮石斛多糖(DOP)在制备靶向TAMs治疗肿瘤药物中的应用，实现DOP在TME中通过特异性结合TLR2靶向调控TAMs由M2型向M1型转化发挥抗肿瘤作用。DOP在制备靶向TAMs治疗肿瘤药物上的应用。所述靶向TAMs的DOP，是通过特异性识别TAMs上的模式受体TLR2的药物。所述DOP是通过靶向识别TAMs表面上的Toll-like2受体(TLR2)介导其由M2型细胞向M1型细胞极化，进而促进细胞毒性T细胞(CD8+T)的肿瘤杀伤活性，抑制调节性T细胞(Tregs)产生的免疫逃逸，最终启动免疫激活效应抑制肿瘤生长。本专利技术利用不同肿瘤细胞系构建了移植型荷瘤鼠模型，对其口服灌胃不同剂量的DOP，分析DOP对荷瘤小鼠的治疗效果。本专利技术所提供的铁皮石斛(DendrobiumofficinaleKimuraetMigo)为兰科草本植物，是一种从铁皮石斛干燥茎中经免疫活性导向分离出的多糖，具有抗肿瘤活性。所述肿瘤细胞系分别为小鼠肝癌Hepa1-6细胞、Lewis肺癌LLC细胞、前胃癌MFC细胞、结直肠癌CT26细胞。本专利技术公开了DOP靶向启动TAMs发挥抗肿瘤免疫效应的调节机制，证明DOP口服用药途径可发挥抗肿瘤疗效，本专利技术对靶向TAMs的肿瘤治疗具有重要意义。本专利技术中，所述DOP是与TAMs表面的TLR2靶向结合。本专利技术中，所述DOP促进TAMs由M2型向M1型转化，并且这种转化是基于TLR2受体介导。本专利技术的有益效果体现在：本专利技术的DOP是经免疫活性导向分离筛选出的具有高免疫活性的结构均一多糖，其在不同荷瘤小鼠模型中均具有显著的抑瘤活性，表现出广谱的抗肿瘤作用。通过小动物活体成像仪证明了DOP经口服后可以进入血液到达TME。通过体外结合体内实验发现DOP可通过靶向识别TME中TAMs表面上的TLR2受体促进TAMs由M2型向M1型极化，进而促进CD8+T细胞的肿瘤杀伤活性，抑制Tregs细胞产生的免疫逃逸，最终启动免疫激活效应抑制肿瘤生长。本专利技术以DOP靶向TAMs调控的抗肿瘤免疫响有望成为肿瘤治疗的重要技术手段。附图说明图1为DOP对肝癌Hepa1-6荷瘤小鼠的抑瘤作用图；图2为DOP对肺癌LLC、胃癌MFC、结直肠癌CT26荷瘤小鼠的抑瘤作用图；图3为DOP对肝癌Hepa1-6荷瘤小鼠TME中免疫细胞比例的影响图；图4为DOP对荷瘤小鼠的抗肿瘤免疫调节作用图；图5为DOP对CD8+T-/-荷瘤小鼠的抗肿瘤免疫调节作用图；图6为DOP对Tregs-/-荷瘤小鼠的抗肿瘤免疫调节作用图；图7为小动物活体荧光成像观察DOP在荷瘤小鼠体内的时间动态分布图；图8为DOP与细胞结合特征图；图9为DOP与TLR2受体结合的验证图；图10为TLR2受体的鉴定图；图11为TLR2对DOP调控TAMs极化的影响图；图12为TLR2对DOP调控CD8+T细胞和Tregs分化的影响图；具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步说明，但不限于此。实施例1：铁皮石斛多糖的制备铁皮石斛(DendrobiumofficinaleKi本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.铁皮石斛多糖在制备靶向肿瘤相关巨噬细胞治疗肿瘤药物中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.铁皮石斛多糖在制备靶向肿瘤相关巨噬细胞治疗肿瘤药物中的应用。


2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述铁皮石斛多糖通过靶向识别肿瘤相关巨噬...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗建平，王红燕，李强明，査学强，潘利华，
申请(专利权)人：合肥工业大学，
类型：发明
国别省市：安徽;34