一种用于甲基化扩增子测序的建库方法技术

本发明专利技术公开了一种用于甲基化扩增子测序的建库方法，涉及分子生物学技术领域，所述建库方法包括以下步骤：1)第一次PCR扩增；2)一次磁珠纯化；3)补平修复；4)接头连接；5)二次磁珠纯化；6)第二次PCR扩增；7)三次磁珠纯化。为了解决传统靶向甲基化测序中的测序文库的构建费用过高和周期过长的问题，本发明专利技术通过利用特异性引物对重亚硫酸盐转化过后的DNA进行多重PCR反应得到靶向的扩增子，然后利用连接反应将NGS测序用到的接头加至扩增子两端纯化回收形成测序文库，有利于实现靶向甲基化测序，减低了测序文库的构建费用和周期，具有广阔的市场前景。

【技术实现步骤摘要】
一种用于甲基化扩增子测序的建库方法
本专利技术涉及分子生物学
，具体是一种用于甲基化扩增子测序的建库方法。
技术介绍
随着高通量测序技术的发展，测序成本的降低，使测序技术逐渐成为基础生物学研究和医学检测的常规实验方法。DNA甲基化是一种人体内常见的表观遗传学修饰方式，其可以调控被修饰基因的表达情况，因此与肿瘤的发生有密切关系。通过检测肿瘤相关基因的甲基化状态可完成对肿瘤的早期筛查、辅助诊断、治疗以及预后。目前对DNA甲基化状态的检测主要是基于亚硫酸盐预处理，从而将DNA样本中的未被甲基化的胞嘧啶(C)转化为尿嘧啶(U)，而被甲基化的胞嘧啶(C)则无法被转化而保持原始状态，随后通过二代基因测序(Nextgenerationsequencing，NGS)技术对其甲基化状态进行检测。NGS技术通过全基因组的甲基化测序已经构建了大量常规物种的甲基化图谱，因此促进了人类表观遗传学，特别是DNA甲基化与人类肿瘤之间相关性的研究。但是，全基因组甲基化测序流程复杂，需求数据量大，周期长，费用高；同时，当前许多研究者仅对基因组中部分基因的特本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于甲基化扩增子测序的建库方法，其特征在于，它包括以下步骤：/n1)第一次PCR扩增：利用不依赖甲基化状态的扩增子引物，对重亚硫酸盐转化过后的DNA进行第一次PCR扩增，得到第一次PCR产物，完成对靶向区域的扩增和富集；/n2)一次磁珠纯化：对步骤1)中得到的第一次PCR产物进行磁珠纯化并且回收，得到第一次PCR回收产物；/n3)补平修复：将步骤2)中得到的第一次PCR回收产物末端补平修复加A，得扩增子；/n4)接头连接：利用连接反应，将NGS测序用到的接头加至步骤3)中得到的扩增子两端，得连接产物；/n5)二次磁珠纯化：对步骤4)中得到的连接产物进行磁珠纯化并回收扩增子连接产物；/n...

【技术特征摘要】
1.一种用于甲基化扩增子测序的建库方法，其特征在于，它包括以下步骤：
1)第一次PCR扩增：利用不依赖甲基化状态的扩增子引物，对重亚硫酸盐转化过后的DNA进行第一次PCR扩增，得到第一次PCR产物，完成对靶向区域的扩增和富集；
2)一次磁珠纯化：对步骤1)中得到的第一次PCR产物进行磁珠纯化并且回收，得到第一次PCR回收产物；
3)补平修复：将步骤2)中得到的第一次PCR回收产物末端补平修复加A，得扩增子；
4)接头连接：利用连接反应，将NGS测序用到的接头加至步骤3)中得到的扩增子两端，得连接产物；
5)二次磁珠纯化：对步骤4)中得到的连接产物进行磁珠纯化并回收扩增子连接产物；
6)第二次PCR扩增：按照常规方法对步骤5)中回收的扩增子连接产物进行第二次PCR扩增，从而将P5、P7序列加至文库两端,得到第二次PCR产物；
7)三次磁珠纯化：对步骤6)中得到的第二次PCR产物进行磁珠纯化并且回收，形成最终测序前的文库。

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【专利技术属性】
技术研发人员：王俊，李小花，刘朝煜，姚旭梅，
申请(专利权)人：深圳思凝一云科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44