稳定型钙离子螯合肽的制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了稳定型钙离子螯合肽的制备方法与应用，属于植物源生物活性肽技术领域。本发明专利技术以黑豆蛋白为原料，利用蛋白酶解技术建立钙离子螯合肽的制备工艺，后通过构建高效液相色谱(HPLC)指纹图谱分离得到水解液中活性较强的共有肽段组分。本发明专利技术方法所制备得到的钙离子螯合肽成分稳定、安全天然、得率高，有望发展成为一种新型的钙营养补充剂，且为黑豆蛋白的应用提供了新的思路和方向。

【技术实现步骤摘要】
稳定型钙离子螯合肽的制备方法与应用
本专利技术涉及稳定型钙离子螯合肽的制备方法与应用，属于植物源生物活性肽

技术介绍
钙是人体中含量最丰富的常量元素(1.5％～2.2％)，其在骨骼生长、凝血、神经传导、肌肉收缩等方面发挥着重要的作用。钙摄入不足会导致多种疾病，如骨质疏松症、佝偻病、软骨病等。日常饮食是摄入钙的主要途径，但在肠道的碱性环境下，离子形式的钙容易与磷酸盐等形成不溶性沉淀，从而降低了其吸收效率和生物利用度。钙摄入不足是我国人群普遍面临的问题，仅凭日常饮食结构的调整并不能有效地提高摄入水平，因此，钙营养强化剂的研究和推广显得尤为重要。近年来，食源性的钙离子螯合肽成为了钙营养补充剂的研究热点。与其他钙产品相比，钙离子螯合肽结构稳定、吸收率高、安全性好且价格低廉，是一种极具发展潜力的钙营养补充剂。酪蛋白磷酸肽是最早被报道研究的钙离子螯合肽，之后，从谷物、动物骨骼、海产品等多种来源的蛋白中都分离得到了具备钙离子螯合能力的活性肽。黑豆蛋白是一种优质的植物蛋白资源，其蛋白含量高(可达40％)，且其中两种利于金属离子螯合的氨基酸(天本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种制备稳定型钙离子螯合肽的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：/n(1)黑豆蛋白提取：利用碱溶酸沉法提取黑豆中的蛋白质；/n(2)物理场预处理：将步骤(1)中得到的蛋白粉进行物理场预处理，物理场预处理的方法包括热处理或超声处理；/n(3)黑豆蛋白水解液的制备：将步骤(2)中处理后的蛋白配制成质量分数为1％～10％的蛋白溶液，调节溶液pH值，然后加入蛋白酶，保温震荡反应，反应结束后水解液经水浴灭酶、冷却，调节溶液pH至中性后离心取上清液，上清液经滤膜过滤，即得到含钙离子螯合肽的黑豆蛋白水解液；/n(4)HPLC指纹图谱的构建：按照步骤(3)中制备黑豆蛋白水解液的方法，制备不同水解条件下...

【技术特征摘要】
1.一种制备稳定型钙离子螯合肽的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)黑豆蛋白提取：利用碱溶酸沉法提取黑豆中的蛋白质；
(2)物理场预处理：将步骤(1)中得到的蛋白粉进行物理场预处理，物理场预处理的方法包括热处理或超声处理；
(3)黑豆蛋白水解液的制备：将步骤(2)中处理后的蛋白配制成质量分数为1％～10％的蛋白溶液，调节溶液pH值，然后加入蛋白酶，保温震荡反应，反应结束后水解液经水浴灭酶、冷却，调节溶液pH至中性后离心取上清液，上清液经滤膜过滤，即得到含钙离子螯合肽的黑豆蛋白水解液；
(4)HPLC指纹图谱的构建：按照步骤(3)中制备黑豆蛋白水解液的方法，制备不同水解条件下的黑豆蛋白水解液，利用高效液相色谱技术对不同的黑豆蛋白水解液进行分离纯化，得到共有成分峰，收集各共有成分峰的物质，后经氮吹、脱盐、冷冻干燥的处理，即得到稳定型钙离子螯合肽。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述碱溶酸沉法具体为：黑豆粉脱脂后加入碱液搅拌1～2h，然后经离心收集上清液，向上清液中加入酸调节pH值至4～5以沉降蛋白质，后经离心取蛋白质沉淀，重悬、冻干得到黑豆蛋白。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述物理场预处理的方法包括：采用热处理手段微波、红外、烘箱，处理温度为100～150℃，处理时间为10～30min；采用超声处理，其处理功率为70～100Hz，处理时间为10～30min。


4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述蛋白酶为碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶、胰蛋白酶、胰酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶中的任意一种。


5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述蛋白酶为碱性蛋白酶时，水解温度为45～65℃，pH为8.0～10.0，水解时间为1～8小时；所述蛋白酶为菠萝蛋白酶时，水解温度为45～65℃，pH为6.0～8.0，水解时间为1～8小时；所述蛋白酶为无花果蛋白酶时，水解温度为50～70℃，p...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘元法，王曼，郑召君，翟颍红，徐勇将，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32