酪蛋白纯化方法和蛋白琥珀酸铁的制备方法技术

本发明专利技术属于生物医药领域，尤其涉及一种酪蛋白纯化方法和蛋白琥珀酸铁的制备方法。一种酪蛋白的纯化方法，该方法包括以下的步骤：1）采用酸性蛋白酶或中性蛋白酶适度水解酪蛋白；2）采用氨肽酶和羧肽酶结合的方式水解杂质蛋白和多肽；3）根据等电点沉淀法除去水解后产生的氨基酸、寡肽，并控制具有苦味氨基酸和寡肽的分子量。该方法纯化出来的酪蛋白利用率提高且苦味降低，既缓解了胃肠道不适和也能够快速释放铁。另外，经纯化后的酪蛋白应用于蛋白琥珀酸铁的制备方法中，将其酰化得到琥珀酰蛋白，通过控制合适的酰化程度得到合适的琥珀酰蛋白和三价铁结合的络合常数K，从而达到释放铁的有效剂量和控制成本的目的。

【技术实现步骤摘要】
酪蛋白纯化方法和蛋白琥珀酸铁的制备方法
本专利技术属于生物医药领域，尤其涉及一种酪蛋白纯化方法和蛋白琥珀酸铁的制备方法。
技术介绍
缺铁是一种广泛流行的世界性营养缺乏症，严重威胁着人类健康，正常人维持体内铁代谢平衡，每天需从外界摄取1~1.5mg的铁，孕妇和哺乳期妇女每天摄取铁的量需达到2~4mg，因此妊娠期妇女和哺乳期妇女更容易引发铁摄入不足。最具代表性的缺铁性疾病就是缺铁性贫血，据世界卫生组织（WHO）统计，全世界三分之一的人存在缺铁性贫血，不论发达国家还是发展中国家缺铁性贫血患者的比例都很高。具统计，缺铁性贫血男性发病率为10%，女性为20%，孕妇可达到40%，儿童发病率超过50%。补铁治疗起始于17世纪的英国，第一代以硫酸钠亚铁为代表的补铁制剂。包括碳酸亚铁、磷酸铁钠、氯化亚铁、焦磷酸铁、氨基磷酸铁等无机铁盐类制剂被开发为补铁剂。但这些无机盐类的补铁制剂使用铁离子直接补铁，存在严重的不良反应，且不易于吸收。第二代补铁剂是小分子有机酸铁盐，代表药品包括乳酸亚铁、琥珀酸亚铁、葡萄糖酸亚铁、富马酸亚铁（延胡索亚铁）等。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种酪蛋白的纯化方法，其特征在于，该方法包括以下的步骤：/n1）采用酸性或者中性蛋白酶水解酪蛋白，水解后的酪蛋白组成中αs1-酪蛋白含量小于40%，β-酪蛋白含量小于40%；/n2）采用氨肽酶和羧肽酶结合的方式水解杂质蛋白和多肽，具有苦味氨基酸和寡肽分子量范围控制在500～3000 Da；/n3）根据等电点沉淀法除去水解后产生的氨基酸和寡肽，经等电点沉淀法沉淀纯化后氨基酸和寡肽含量应降至0.5%以下；最终得到的酪蛋白重均分子量M

【技术特征摘要】
1.一种酪蛋白的纯化方法，其特征在于，该方法包括以下的步骤：
1）采用酸性或者中性蛋白酶水解酪蛋白，水解后的酪蛋白组成中αs1-酪蛋白含量小于40%，β-酪蛋白含量小于40%；
2）采用氨肽酶和羧肽酶结合的方式水解杂质蛋白和多肽，具有苦味氨基酸和寡肽分子量范围控制在500～3000Da；
3）根据等电点沉淀法除去水解后产生的氨基酸和寡肽，经等电点沉淀法沉淀纯化后氨基酸和寡肽含量应降至0.5%以下；最终得到的酪蛋白重均分子量MW应在10,000~30,000Da。


2.根据权利要求1所述的一种酪蛋白的纯化方法，其特征在于，步骤1）水解用的蛋白酶为α-凝乳蛋白酶。


3.根据权利要求1所述的一种酪蛋白的纯化方法，其特征在于，步骤1）水解后的酪蛋白组成中αs1-酪蛋白含量小于30%；β-酪蛋白含量小于30%；优选，酪蛋白αs1：αs2：β组成比例在3:3:3至4:1:4；优选，步骤3）中等电点沉淀法pH4.0-5.0，优选，经等电点沉淀法沉淀纯化后其含量应降至0.3%以下。


4.根据权利要求1所述的一种酪蛋白的纯化方法，其特征在于，最终得到的酪蛋白重均分子量MW应在12,500~25,000Da。


5.权利要求1-4任意一项权利要求所述的方法制备的酪蛋白。


6.一种蛋白琥珀酸铁的制备方法，其特征在于，该方法包括以下的步骤：
1）称取权利要求5所述的酪蛋白，加入碱使其溶解；
2）待蛋白完全溶解后...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙军，陆慧，沈子良，吴佳佳，寿宇捷，
申请(专利权)人：杭州汉库医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33