一种抗IgM单克隆抗体制造技术

本发明专利技术公开了一种抗IgM单克隆抗体，所述单克隆抗体包含分别如SEQ ID NO.26、28、30所示氨基酸序列的重链可变区CDR1、CDR2、CDR3；以及分别如SEQ ID NO.42、44、46所示氨基酸序列的轻链可变区CDR1、CDR2、CDR3。本发明专利技术同时公开了编码所述单克隆抗体的核酸分子、含有所述核酸分子的表达载体和宿主细胞。本发明专利技术的单克隆抗体具有较高的灵敏性和特异性。

【技术实现步骤摘要】
一种抗IgM单克隆抗体
本专利技术属于细胞免疫学、基因工程领域，涉及一种抗IgM单克隆抗体。
技术介绍
酶联免疫吸附实验(EnzymeLinkedImmunosorbentAssay,ELISA)是一类常用的免疫酶技术。主要方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，然后利用酶标记的抗体或抗原与之孵育，加入显色剂显色，通过酶标仪测定待测物颜色与标准物颜色的差异，得到定性或定量的结果。根据待测物不同(检测抗原或者检测抗体)以及测定原理的不同，ELISA又可以分为许多种类，如直接法、间接法、竞争法、夹心法等。通过ELISA检测人血清中病原体特异性的IgM抗体，对于传染病感染者的临床早期诊断以及对整个传染病疫情的整体控制具有意义。在人体血清中IgM抗体的含量为0.6-2.0mg/ml，只占血清抗体总量的6-10％，比IgG、IgA的含量都低，并且IgM分子比较庞大，是以五聚体的形式存在的，因此检测IgM比检测IgG和IgA更为困难。现有技术中一般采用间接ELISA检测病原体特异性IgM抗体，其操作通常是把待检血清稀释后与包被在酶标板上的抗原结合，经洗涤后，加入酶标的抗人IgM二抗并利用底物显色。但是，由于血清中IgM含量比IgG、IgA低，且IgM分子比IgG、IgA大，IgM在与IgG、IgA竞争性结合酶标板上的抗原过程中处于劣势，检测结果的敏感性一般比较低。此外，用间接ELISA检测IgM抗体时，其使用酶标二抗大多为多抗(同时含有抗人IgM重轻链的抗体)，检测结果通常会存在较高的假阳性或者较高的背景。<br>
技术实现思路
为了弥补现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种抗人IgM单克隆抗体及其制备方法，其可专一性捕获人IgM抗体，便于酶标抗原的结合，增加检测IgM的特异性，降低整个系统的背景。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术的第一方面提供了一种抗IgM单克隆抗体，所述单克隆抗体包含：分别如SEQIDNO.26、28、30所示氨基酸序列的重链可变区CDR1、CDR2、CDR3；以及分别如SEQIDNO.42、44、46所示氨基酸序列的轻链可变区CDR1、CDR2、CDR3。进一步，所述重链可变区还包含：如SEQIDNO.32、34、36、38所示氨基酸序列的重链可变区框架区FR1、FR2、FR3和FR4；以及分别如SEQIDNO.48、50、52、54所示氨基酸序列的轻链可变区框架区FR1、FR2、FR3和FR4。进一步，所述重链可变区具有如SEQIDNO.40所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQIDNO.56所示的氨基酸序列。进一步，所述单克隆抗体包含抗体重链恒定区和/或抗体轻链恒定区的全部或者部分。本专利技术的第二方面提供了一种核酸分子，所述核酸分子包含编码本专利技术第一方面所述的单克隆抗体的核苷酸序列。本专利技术的核酸分子可以例如通过标准化学合成方法和/或重组方法合成，或半合成地产生，例如通过组合化学合成和重组方法。编码序列与转录调控元件和/或与其他氨基酸编码序列的连接可以使用已确立的方法进行，例如限制酶切消化、连接和分子克隆。进一步，编码重链可变区的CDR1、CDR2、CDR3核苷酸序列如SEQIDNO.27、29、31所示；编码轻链可变区的CDR1、CDR2、CDR3核苷酸序列如SEQIDNO.43、45、47所示。进一步，编码重链可变区框架区FR1、FR2、FR3和FR4的核苷酸序列如SEQIDNO.33、35、37、39所示；编码轻链可变区框架区FR1、FR2、FR3和FR4的核苷酸序列如SEQIDNO.49、51、53、55所示；进一步，编码重链可变区的核苷酸序列如SEQIDNO.41所示，编码轻链可变区的核苷酸序列如SEQIDNO.57所示。本专利技术的第三方面提供了一种载体，所述载体包含本专利技术第二方面所述的核酸分子。分子生物学领域的技术人员已知许多合适的载体，其选择取决于所期望的功能。本专利技术对载体没有特别的限制，但可以是能在包括哺乳动物细胞(例如，人、猴、兔、大鼠、仓鼠或小鼠细胞)、植物细胞、酵母细胞、昆虫细胞和细菌细胞(如大肠杆菌(E.coli))在内的真核或原核细胞内复制和/或表达多核苷酸的载体。较佳地，它可以是载体，包括至少一选择性标记，可操作地连接到合适的启动子，以致可以在宿主细胞内表达多核苷酸。例如，载体可以包括导入噬菌体、质粒、粘粒、微型染色体、病毒或反转录病毒载体的多核苷酸。本专利技术的第四方面提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞包含本专利技术第二方面所述的核酸分子，或包含本专利技术第三方面所述的载体。本专利技术中的用于导入载体的细胞包括原核细胞和真核细胞，上述细胞包含(但并不限于)细菌细胞，如大肠杆菌，链霉菌和鼠伤寒沙门氏菌；酵母细胞；真菌细胞如毕赤酵母；昆虫细胞如果蝇或夜蛾Sf9细胞；动物细胞，如中国仓鼠卵巢细胞，SP2/0，人淋巴样母细胞，COS，NSO，293T，Bowes黑素瘤细胞，HT-1080，BHK(幼仓鼠肾细胞)，HEK(人胚肾细胞)，PERC.6(人视网膜细胞)等；和植物细胞。在本领域中可使用本领域的技术人员已知的可用作哺乳动物宿主细胞的任何细胞。术语“导入”是指将包括编码单克隆抗体的多核苷酸的载体递送入宿主细胞。此导入可以通过本领域中已知的各种方法，包括磷酸钙-DNA共沉淀，DEAE-葡聚糖介导的转染，聚凝胺介导的转染，电穿孔，显微注射，脂质体介导的转染，脂质体融合，脂转染和原生质体融合进行。此外，转染是指用病毒颗粒通过感染将期望材料递送入细胞。此外，该载体可以通过基因轰击导入宿主细胞。在本专利技术中，导入与转染可以互换使用。本专利技术的重组细胞接着可以用于表达以及培养目的，用于大量药物生产的抗体表达。还可以用作药物组合物的活性成分。可以使用任何适当的培养技术，包括但是不局限于静置培养、转瓶培养、腹水流体、中空纤维型生物反应盒、模块化小型发酵罐、搅拌槽、微载体培养、陶瓷芯灌注等等。本专利技术的第五方面提供了一种检测样品中IgM的方法，所述方法包括以下步骤：1)使所述样品与第一特异性结合剂和第二特异性结合剂接触，其中，所述第一特异性结合剂为本专利技术第一方面所述的单克隆抗体；在足以形成第一特异性结合剂-IgM-第二特异性结合剂复合体的时间和条件；和2)检测在1)中形成的复合体，从而检测所述样品中的IgM；进一步，使用第一特异性结合剂包被酶标板。进一步，所述第二特异性结合剂为抗原。进一步，所述第二特异性结合剂被可检测的标记；所述标记为本领域的常规标记，包括但不限于荧光染料，如荧光素类型标记FITC，5-羧基荧光素，6-羧基荧光素；罗丹明类型的标记，包括TAMRA；丹磺酰；丽丝胺；花菁；藻红蛋白；德克萨斯红；及其类似物等；发光染料，如化学发光染料鲁米诺，吖啶化合物，腔肠素和类似物，二氧杂环丁烷，基于过氧草酸的系统及其衍生物；电化学发光染料如基于钌和铱的电化学发光络合物；放射性标记如3H、11C、14C、18F、32P、35S、64Cu、68本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗IgM单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体包含：/n分别如SEQ ID NO.26、28、30所示氨基酸序列的重链可变区CDR1、CDR2、CDR3；以及分别如SEQ ID NO.42、44、46所示氨基酸序列的轻链可变区CDR1、CDR2、CDR3。/n

【技术特征摘要】
1.一种抗IgM单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体包含：
分别如SEQIDNO.26、28、30所示氨基酸序列的重链可变区CDR1、CDR2、CDR3；以及分别如SEQIDNO.42、44、46所示氨基酸序列的轻链可变区CDR1、CDR2、CDR3。


2.根据权利要求1所述的，其特征在于，所述重链可变区还包含：
如SEQIDNO.32、34、36、38所示氨基酸序列的重链可变区框架区FR1、FR2、FR3和FR4；以及分别如SEQIDNO.48、50、52、54所示氨基酸序列的轻链可变区框架区FR1、FR2、FR3和FR4。


3.根据权利要求1或2所述的单克隆抗体，其特征在于，所述重链可变区具有如SEQIDNO.40所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQIDNO.56所示的氨基酸序列。


4.根据权利要求1-3任一项所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体包含抗体重链恒定区和/或抗体轻链恒定区的全部或者部分。


5.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包含编码权利要求1-4任一项所述的单克隆抗体的核苷酸序列；
优选的，编码重链可变区的CDR1、CDR2、CDR3核苷酸序列如SEQIDNO.27、29、31所示；编码轻链可变区的CDR1、CDR2、CDR3核苷酸序列如SEQIDNO.43、45、47所示；
优选的，编码重链可变区框架...

【专利技术属性】
技术研发人员：姬艺洪，
申请(专利权)人：南京妙迪生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32