一种透明质酸化青蒿琥酯、其纳米胶束制剂及其制备方法和用途技术

本发明专利技术公开了一种透明质酸化青蒿琥酯、其纳米胶束制剂及其制备方法和用途，其有效成分透明质酸化青蒿琥酯由青蒿琥酯与透明质酸构成，其中青蒿琥酯为主要有效成分，透明质酸作为载体兼靶向分子并通过化学键与青蒿琥酯连接形成透明质酸化青蒿琥酯，然后自组装形成纳米胶束并冻干而成。本发明专利技术的透明质酸化青蒿琥酯纳米胶束的粒径为100～200nm，其冻干后制剂稳定性好，通过注射进入体内后具有较好的酸度响应性释放特性，细胞毒性试验证明其对比于青蒿琥酯纯药，具有更强的肿瘤细胞毒性作用，该纳米胶束制剂具有靶向性强、长循环、低毒性的特点。

【技术实现步骤摘要】
一种透明质酸化青蒿琥酯、其纳米胶束制剂及其制备方法和用途
本专利技术属于抗肿瘤药物
，具体涉及一种纳米胶束制剂及其制备方法和用途。
技术介绍
青蒿琥酯(Artesunate，缩写为ASA)，Mr384.42，化学名为二氢青蒿素-l,2-α-琥珀酸单酯，是具有倍半萜内酯类抗疟新药青蒿素的重要衍生物之一。ASA作为全新结构抗疟药，具有高效、速效、低毒、不易产生耐受性等特点；且溶解性好，剂型灵活，给药方便，广泛应用于临床。自1980年研制成功以来，广大学者对ASA的药理作用进行了不断深入的研究，结果发现ASA除了具有抗疟作用以外，还具有免疫调节、抗肿瘤、保肝、抗炎、松弛平滑肌等作用。由于ASA的毒副作用小、耐受性好、使用方便等，因此，ASA的抗肿瘤作用受到人们的广泛重视。部分研究者认为，青蒿素类药物的抗肿瘤作用与它们的抗疟机制和肿瘤细胞铁代谢旺盛的特点有关。癌细胞的核酸代谢旺盛、需要大量铁质，大多数肿瘤细胞表面有高密度的转铁蛋白受体，正常细胞转铁蛋白受体较少；含有内过氧桥的青蒿素类药物则通过二价铁离子，促进青蒿素类的过氧基团分解产生自由基发挥破坏作用。这样能够在肿瘤细胞内较正常细胞内形成更多的自由基，对DNA和线粒体都能起到氧化应激损伤的效果，从而起到一定的特异杀伤作用。透明质酸(hyaluronicacid，缩写为HA)，是一种由D-葡萄糖醛酸和N-乙酰-D-氨基葡萄糖的双糖单元反复交替连接而成天然的糖胺聚糖，广泛分布在哺乳动物疏松结缔组织和骨髓细胞外基质中，在细胞迁移、增殖、分化、黏附和基因表达等细胞生物学方面发挥着重要作用。身体内的HA超过一半分布在皮肤中，它不仅具有独特的流体力学性质，而且生物相容性极好。近年来，HA在纳米医学领域受到广泛的关注。HA亲水外壳可逃避单核巨噬细胞的吞噬，延长药物血液循环时间，是各类药物尤其是疏水性药物良好的载体。分化型蛋白CD44受体是主要的HA结合受体。CD44受体可以使HA和特定细胞表面相互作用，这种相互作用已经被深入研究。可以作为特异性运输纳米制剂至肿瘤细胞的媒介。临床上为了减少剂量、减少副作用和增加生物相容性常常把药物包封在纳米载药系统中。但截至目前还未有一种结合ASA和HA的纳米药物制剂的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术缺陷，提供一种透明质酸化青蒿琥酯、其纳米胶束制剂及其制备方法和用途。期望能够改善药物的生物相容性并且有效延长药物在生物体内的血液循环时间。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案之一是：一种透明质酸化青蒿琥酯，所述透明质酸化青蒿琥酯由透明质酸和青蒿琥酯通过化学键连接形成。具体地，所述透明质酸化青蒿琥酯(HA-ASA)是透明质酸和青蒿琥酯通过酯键连接形成的高分子化合物，其结构式如下式所示：本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案之二是：一种透明质酸化青蒿琥酯的制备方法，将羧基活化后的青蒿琥酯与透明质酸在有机溶剂中，氮气保护下，于40～50℃反应36～48h；反应后的物料透析，冻干，得到透明质酸化青蒿琥酯。进一步地，青蒿琥酯的羧基活化方法包括：将ASA溶于有机溶剂中，加入活化剂，在氮气保护下进行羧基活化0.5～2h。在本专利技术的一个优选实施方案中，所述活化剂包括EDC·HCl或4-二甲氨基吡啶(DMAP)中的至少一种。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案之三是：一种透明质酸化青蒿琥酯的纳米胶束制剂，所述纳米胶束制剂包括由透明质酸化青蒿琥酯(HA-ASA)自组装形成的纳米胶束。所述纳米胶束制剂中，青蒿琥酯为主药，透明质酸作为载体兼靶向分子。其中，所述透明质酸化青蒿琥酯的纳米胶束的粒径为100～200nm。在本专利技术的一个优选实施方案中，所述纳米胶束制剂为冻干制剂。进一步优选的，所述纳米胶束制剂还包括冻干保护剂。更进一步优选的，所述冻干保护剂包括山梨醇、甘露醇、蔗糖或右旋糖酐中的至少一种。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案之四是：一种透明质酸化青蒿琥酯的纳米胶束制剂的制备方法，包括如下步骤：将透明质酸化青蒿琥酯分散于有机溶剂后，加入至水中，振摇反应2～6h，随后透析去除杂质和有机溶剂，过滤，冻干，得到所述透明质酸化青蒿琥酯的纳米胶束制剂。在本专利技术的一个优选实施方案中，所述有机溶剂包括二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺、或甲酰胺等中的至少一种。进一步地，所述过滤采用0.22μm微孔滤膜。进一步地，所述透析的时间为10～24h。进一步地，所述透明质酸化青蒿琥酯溶于有机溶剂并在室温下超声分散0.5～1h后，再加入至水中。在本专利技术的一个优选实施方案中，在冻干制备透明质酸化青蒿琥酯的纳米胶束的过程中，加入冻干保护剂；所述冻干保护剂包括右旋糖酐、蔗糖、甘露醇或山梨醇等的至少一种。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案之五是：一种透明质酸化青蒿琥酯纳米胶束制剂在制备抗肿瘤药物中的用途。所述用途例如包括治疗宫颈癌的用途。本专利技术所涉及的设备、试剂、工艺、参数等，除有特别说明外，均为常规设备、试剂、工艺、参数等，不再作实施例。本专利技术所述的透析，本领域技术人员可根据待保留的分子与杂质的分子量等区别，选择合适的透析膜，不再作实施例详细说明。本专利技术所列举的所有范围包括该范围内的所有点值。本专利技术所述“大约”、“约”或“左右”等指的是所述范围或数值的±20％范围内。本专利技术中，除有特别说明外，％均为质量百分比，比例均为质量比。本专利技术中，所述“室温”即常规环境温度，可以为10～30℃。本专利技术的有益效果是：本专利技术的HA-ASA纳米胶束制剂的粒径为100～200nm，具有较好的响应性释放特性，细胞毒性试验证明其对比于ASA的单纯使用，具有更强的肿瘤细胞毒性作用，具有靶向性强、长循环和低毒性的特点。附图说明图1为本专利技术实施例中的HA-ASA的合成过程的化学反应示意图，其中A为HA结构式，B为ASA结构式，C为HA-ASA的结构式。图2为本专利技术实施例1中的HA-ASA纳米胶束的粒径分布和透射电镜图(a)，以及Zeta电位分布图(b)。图3为本专利技术实施例1中的HA-ASA的红外谱图，其中A为ASA纯药，B为HA纯药，C为ASA和HA物理混合物，D为本专利技术实施例的HA-ASA原料。图4为本专利技术实施例2中的HA-ASA的核磁氢谱图，其中A为ASA纯药，B为HA纯药，C为HA-ASA原料。图5为本专利技术实施例2中的HA-ASA纳米胶束制剂和ASA纯药在pH7.4的PBS溶液中的药物释放曲线图，其中A为ASA纯药，B为HA-ASA纳米胶束制剂。图6为本专利技术实施例3中的HA-ASA纳米胶束制剂在不同pH环境下ASA药物释放曲线图，其中A为pH5.0条件下的ASA药物释放曲线，B为pH6.5条件下ASA药物释放曲线，C为pH7.4条件下的ASA药物释放曲线。图7为本专利技术实施例4中的HA-ASA纳米胶束制剂和A本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种透明质酸化青蒿琥酯，其特征在于：所述透明质酸化青蒿琥酯由透明质酸和青蒿琥酯通过酯键连接形成，其结构式如下式所示：/n

【技术特征摘要】
1.一种透明质酸化青蒿琥酯，其特征在于：所述透明质酸化青蒿琥酯由透明质酸和青蒿琥酯通过酯键连接形成，其结构式如下式所示：





2.一种权利要求1所述的透明质酸化青蒿琥酯的制备方法，其特征在于：将羧基活化后的青蒿琥酯与透明质酸在有机溶剂中，氮气保护下，于40～50℃反应36～48h；反应后的物料透析，冻干，得到透明质酸化青蒿琥酯。


3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述青蒿琥酯的羧基活化方法包括：将青蒿琥酯溶于有机溶剂中，加入活化剂，在氮气保护下活化羧基0.5～2h。


4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述活化剂包括EDC·HCl或4-二甲氨基吡啶中的至少一种。


5.一种权利要求1所述的透明质酸化青蒿琥酯的纳米胶束制剂，其特征在于：所述纳米胶束制剂包括由所述透明质酸化青蒿琥酯自组装形成的纳米胶束。
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【专利技术属性】
技术研发人员：侯振清，陈诗端，范仲雄，王衍戈，邢驰坤，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：福建;35