抗鱼类多毒物耐受蛋白MRP4/ABcc4的多克隆抗体及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种抗鱼类多毒物耐受蛋白MRP4/ABcc4的多克隆抗体及其制备方法与应用，其包括如下步骤：构建含有鱼类多毒物耐受蛋白MRP4/ABcc4基因的重组表达载体；将所述重组表达载体转化至大肠杆菌感受态细胞中诱导表达，获得鱼类多毒物耐受蛋白MRP4/ABcc4抗原；将所述鱼类多毒物耐受蛋白MRP4/ABcc4抗原进行动物免疫，获得抗血清，然后分离纯化获得抗鱼类多毒物耐受蛋白MRP4/ABcc4多克隆抗体。本发明专利技术可用于检测鱼类MRP在蛋白水平上的组织表达及对重金属铅和汞胁迫、有机氯类杀虫剂DDT和Lindane的特异性应答，由此可作为环境风险评估的分子标志物。

【技术实现步骤摘要】
抗鱼类多毒物耐受蛋白MRP4/ABcc4的多克隆抗体及其制备方法与应用
本专利技术属于水产养殖领域，具体涉及一种鱼类多毒物耐受蛋白基因MRP4/ABbcc4及其编码蛋白与应用。
技术介绍
多毒物耐受蛋白(Multi-toxicantsResistanceProtein,MRP)属于ABC结合子转运蛋白(ATPbindingcassettetransporters)超家族的成员。作为一类跨膜蛋白，MRP能够识别多种结构不同的内源性物质，并负责参与II相解毒反应产物的转运(如还原型谷胱甘肽GSH、葡糖苷酸、硫酸酯和甘氨酸等的结合物)，被认为是III相解毒因子，在细胞对多种有毒物质的解毒和排泄中具有重要作用。目前，在人类和其他哺乳动物中已报道9个MRP成员基因，且大多数都与多药耐药性(Multi-drugResistance)相关。根据结构特征和系统进化关系，可以将MRP分为MRP1-MRP9。由于生活环境的差异，鱼类MRP可能进化出与哺乳动物同源基因不同的功能。另外，MRP转运蛋白在组织防御、毒物解毒或排泄和信号转导等方面具有重要功本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗鱼类多毒物耐受蛋白MRP4/ABcc4多克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：/n构建含有鱼类多毒物耐受蛋白MRP4/ABcc4基因的重组表达载体；/n将所述重组表达载体转化至大肠杆菌感受态细胞中诱导表达，获得鱼类多毒物耐受蛋白MRP4/ABcc4抗原；/n将所述鱼类多毒物耐受蛋白MRP4/ABcc4抗原进行动物免疫，获得抗血清，然后分离纯化获得抗鱼类多毒物耐受蛋白MRP4/ABcc4多克隆抗体。/n

【技术特征摘要】
1.一种抗鱼类多毒物耐受蛋白MRP4/ABcc4多克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
构建含有鱼类多毒物耐受蛋白MRP4/ABcc4基因的重组表达载体；
将所述重组表达载体转化至大肠杆菌感受态细胞中诱导表达，获得鱼类多毒物耐受蛋白MRP4/ABcc4抗原；
将所述鱼类多毒物耐受蛋白MRP4/ABcc4抗原进行动物免疫，获得抗血清，然后分离纯化获得抗鱼类多毒物耐受蛋白MRP4/ABcc4多克隆抗体。


2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，构建含有鱼类多毒物耐受蛋白MRP4/ABcc4基因的重组表达载体的步骤中包括：采用正向引物F1和反向引物R1扩增所述鱼类多毒物耐受蛋白MRP4/ABcc4基因，且正向引物F1具有如SEQIDNO.1所示核苷酸序列，反向引物R1具有如SEQIDNO.2所示核苷酸序列。


3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述鱼类多毒物耐受蛋白MRP4/ABcc4基因包含如下核苷酸序列，或由如下核苷酸序列组成：
a)SEQIDNO：3所示核苷酸序列；或
b)SEQIDNO：3所示核苷酸序列的互补序列、简并序列或同源序列；或
c)在严紧条件下与SEQIDNO：3所示的核苷酸序列杂交的多核苷酸序列或其互补序列。


4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述同源序列与SEQIDNo.3所示核苷酸序列的同源性≥30％、或≥40％、或≥50％、或≥60％、或≥70％、或≥75％、或≥80％、或≥85％、或≥86％、或≥87％、或≥88％、或≥89％、或或≥90％、或≥91％、或≥92％、或≥93％、或≥94％、或≥95％、或≥96％、或≥97％、或≥98％、或≥99％、或≥99.1％、或或≥99.2％、或≥99.3％、或≥99.4％、或≥99.5％、或≥99.6％、或≥99.7％、或≥99.8％、或≥99.9％。


5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述重组表达载体的核苷酸序列如SEQIDNo.4所示。


6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述鱼类多毒物耐受蛋白MRP4/ABcc4抗原的氨基酸序列如SEQIDN...

【专利技术属性】
技术研发人员：陆星，向莹，文华，蒋明，钟山，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院长江水产研究所，
类型：发明
国别省市：湖北;42