一种感觉神经元细胞的无血清诱导方法技术

本发明专利技术提供一种新的人源型感觉神经元诱导培养体系，通过将小分子抑制剂LY2157299和生长因子的组合添加至无血清基础培养基中，与含有血清的诱导方法相比，不仅大大提高了多能干细胞转变为感觉神经元的效率，而且显著提高了多种离子通道蛋白的表达，从而实现了将多种不同来源的诱导多能干细胞成功诱导为感觉神经元。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】一种感觉神经元细胞的无血清诱导方法
本专利技术属于生物领域。具体涉及将多能干细胞诱导为感觉神经元细胞的方法，诱导培养基及其应用。
技术介绍
2006年，山中伸弥的团队专利技术了一种由OCT4，SOX2，KLF4和c-Myc四种转录因子构成的“鸡尾酒”法，能够成功将终端分化的皮肤成纤维细胞重编程成为具有分化多能性的干细胞，这种干细胞被称为诱导多能干细胞(inducedpluripotentcells)(Cell，2006，124(4)pp.663-676；Cell，2007，131(5)pp.861-872)。这些干细胞具有和胚胎干细胞(embryonicstemcells)类似的分化潜能，能够形成人体发育最基本的三个胚层：外胚层，中胚层及内胚层，并最终形成多种成体细胞。这一专利技术突破了在医学上使用人胚胎干细胞的伦理限制，可以解决细胞移植治疗中的免疫排斥问题，大大拓展了干细胞技术在临床医学上的应用潜力。外周感觉神经元(Nociceptors)被称为伤害感受器，可以感应温度和压力的极端情况，同时可以检测到与损伤相关的化学物质。并能够进一步本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.LY2157299、RepSox、SB5253334或TEW7179在诱导多能干细胞分化为感觉神经前体细胞及感觉神经元细胞中的应用。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.LY2157299、RepSox、SB5253334或TEW7179在诱导多能干细胞分化为感觉神经前体细胞及感觉神经元细胞中的应用。


2.权利要求1所述的应用，其中LY2157299、RepSox、SB5253334或TEW7179的用量为55nM-25uM，优选为100nM、300nM、500nM、700nM、900nM、1uM、2.5uM、5uM、7.5uM、10uM、12.5uM、15uM、17.5uM、20uM或22uM。


3.人-NT3或CHIR98014在培养感觉神经元中的应用。


4.权利要求3所述的应用，其中人-NT3的用量为0.1-49ng/ml，或者CHIR98014的用量为0.5nM-3uM。


5.感觉神经元细胞诱导培养基，其特征在于：由50％(v/v)DMEM培养基和50％(v/v)神经基础培养基形成基础培养基，然后添加0.5％-2％(v/v)N2添加剂(优选0.7％、0.9％、1.0％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、1.6％、1.7％(v/v))，0.2％-3.1％(v/v)GS21添加剂或B27添加剂(优选0.4％、0.6％、0.8％、1.0％、1.2％、1.4％、1.6％、1.8％、2.0％、2.2％、2.4％、2.6％、2.8％、3.0％(v/v))，0.1-15mMHEPES缓冲液(优选1、5、10mM)，5-22mM甘氨酸-谷氨酰胺一水合物(优选10、15、20mM)，12-180nMLDN-193189或LDN-1931892HCl(优选20、50、70、80、90、100、110、120、150、170nM)，和55nM-25uMLY2157299、RepSox、SB5253334或TEW7179(优选100nM、300nM、500nM、700nM、900nM、1uM、2.5uM、5uM、7.5uM、10uM、12.5uM、15uM、20uM或22uM)。


6.权利要求5所述的感觉神经元细胞诱导培养基，其特征在于：由50％(v/v)DMEM培养基和50％(v/v)神经基础培养基形成基础培养基，然后添加1％(v/v)N2添加剂，2％(v/v)GS21添加剂或B27添加剂，0.5mMHEPES缓冲液，20mM甘氨酸-谷氨酰胺一水合物，100nMLDN-193189或LDN-1931892HCl，和选自5uM、7.5uM或12.5uMLY2157299、RepSox、SB5253334或TEW7179。


7.权利要求5或6所述的感觉神经元细胞诱导培养基，其中所述诱导培养基的组成如下：由50％(v/v)DMEM培养基和50％(v/v)神经基础培养基形成基础培养基，然后添加1％(v/v)N2添加剂，2％(v/v)GS21添加剂或B27添加剂，0.5mMHEPES缓冲液，20mM甘氨酸-谷氨酰胺一水合物，100nMLDN-193189或LDN-1931892HCl，和选自5uM、7.5uM或12.5uMLY2157299，优选地，所述感觉神经元细胞诱导培养基还添加血清替代物(例如血清白蛋白，转铁蛋白，脂肪酸)，更优选地，所述血清替代物为纯化形式。


8.感觉神经元细胞培养基，其特征在于：以权利要求5-7任一项所述的诱导培养基为基础，添加3-10uMSU5402(优选5uM、6uM、7uM、8uM、9uM)，3-10uMDAPT(4uM、5uM、6uM、7uM、8uM、9uM)，1-3uMCHIR99021(优选1.3uM、1.5uM、1.7uM、1.9uM、2.0uM、2.2uM、2.5uM、2.7uM)或0.5nM-3uM的CHIR98014(优选5nM、50nM、100nM、200nM、300mM、500mM、700mM、900mM、1uM、1.4uM、1.8uM、2.0uM、2.5uM、2.7uM)，和0.1-4...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏君，蔡萌，
申请(专利权)人：武汉睿健医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42