一种虾头类肝素及其制备方法和在制备抗凝血剂中应用技术

本发明专利技术提供了一种虾头类肝素及其制备方法和在制备抗凝血剂中的应用，涉及类肝素技术领域。本发明专利技术提供的虾头类肝素的制备方法，包括以下步骤：将虾头干体、氯化钠和水混合后调节pH值至7.5～8.5，与碱性蛋白酶混合进行酶解，得到酶解液；将所述酶解液进行灭酶后离心分离，得到上清液；将所述上清液依次进行强碱性大孔阴离子交换树脂吸附和氯化钠水溶液洗脱，得到洗脱液；将所述洗脱液进行沉淀，得到虾头类肝素。本发明专利技术以虾头作为原料制备虾头类肝素，原料来源广，成本低，实现了废物资源的有效利用；而且制备方法，操作简单，适宜工业化生产；制备得到虾头类肝素的抗凝血作用缓和，副作用小。

【技术实现步骤摘要】
一种虾头类肝素及其制备方法和在制备抗凝血剂中应用
本专利技术涉及类肝素
，具体涉及虾头类肝素及其制备方法和在制备抗凝血剂中的应用。
技术介绍
天然类肝素是存在于生物体中类似于肝素结构的一类物质，如硫酸乙酰肝素、硫酸皮肤素、硫酸软骨素等，具有抗凝血、抗血栓等活性。类肝素和肝素作用的不同点之一是抗凝血活性缓和，长期使用无肝素高抗凝活性引起的副作用，避免了因抗凝血作用可能造成的不良反应。此外，类肝素能与多种蛋白质相结合，对细胞的增殖、分化、结合起一定调控作用，并能参与外来细胞的识别和控制过程，受到越来越多研究者的关注。凡纳滨对虾的养殖产量约占我国对虾养殖产量的85％，对虾消耗过程中产生的虾头(包括肝胰腺、生殖腺和消化器官，约占整虾的36％)、虾壳等加工副产物大多被低值化利用或被直接废弃。目前，对于虾头和虾壳的利用主要为：将虾头制成调味品，利用虾壳提取甲壳素并加工虾青素、壳聚糖等。然而，对于以虾头为原料制备类肝素并未有报道。
技术实现思路
鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种虾头类肝素及其制备方法和在制备抗凝血剂中的应用。本专利技术以虾头为原料，提取得到新的类肝素，实现了废物资源的有效利用，且制备的虾头类肝素抗凝血作用缓和，副作用小。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种虾头类肝素的制备方法，包括以下步骤：将虾头干体、氯化钠和水混合后调节pH值至7.5～8.5，与碱性蛋白酶混合进行酶解，得到酶解液；将所述酶解液进行灭酶后离心分离，得到上清液；将所述上清液依次进行强碱性大孔阴离子交换树脂吸附和氯化钠水溶液洗脱，得到洗脱液；所述氯化钠水溶液的浓度为0.5～1.5mol/L；将所述洗脱液进行沉淀，得到虾头类肝素。优选的，所述虾头干体、氯化钠和水的质量比为1：(0.05～0.08)：(5～10)。优选的，所述虾头干体和碱性蛋白酶的质量比为1：(0.05～0.1)；所述酶解的温度为50～55℃，时间为20～24h。优选的，所述灭酶的温度为90～110℃，时间为10～15min。优选的，所述离心分离的温度为2～8℃，速度为6000～8000r/min，时间为15～20min。优选的，所述强碱性大孔阴离子交换树脂的孔径为600～800μm。优选的，所述洗脱的方式为梯度洗脱；所述梯度洗脱为采用浓度为0.5mol/L、1.1mol/L和1.5mol/L的氯化钠水溶液依次进行洗脱。优选的，所述沉淀采用的试剂为醇类试剂。本专利技术提供了上述技术方案所述制备方法得到的虾头类肝素，所述虾头类肝素包括第一虾头类肝素和/或第二虾头类肝素；所述第一虾头类肝素的分子量为7.8kDa；所述第二虾头类肝素的分子量为19.8kDa。本专利技术还提供了上述技术方案所述虾头类肝素在制备抗凝血剂中的应用。本专利技术提供了一种虾头类肝素的制备方法，包括以下步骤：将虾头干体、氯化钠和水混合后调节pH值至7.5～8.5，与碱性蛋白酶混合进行酶解，得到酶解液；将所述酶解液进行灭酶后离心分离，得到上清液；将所述上清液依次进行强碱性大孔阴离子交换树脂吸附和氯化钠水溶液洗脱，得到洗脱液；所述氯化钠水溶液的浓度为0.5～1.5mol/L；将所述洗脱液进行沉淀，得到虾头类肝素。本专利技术以虾头作为原料制备虾头类肝素，提取得到新的类肝素，原料来源广，成本低，实现了废物资源的有效利用；而且制备方法，操作简单，适宜工业化生产。本专利技术制备得到虾头类肝素的分子量为7.8kDa或19.8kDa，抗凝血作用缓和，副作用小。如实施例结果所示，在50～1000μg/mL浓度范围内，虾头类肝素F1.1和虾头类肝素F1.5的抗凝血活性呈现出剂量依赖关系，能有效延长APTT、TT，说明F1.1和F1.5均能通过内源性凝血途径和共同凝血途径发挥抗凝血活性；但与肝素对照品相比，要达到相同的抗凝血作用需要更高的浓度，表明F1.1和F1.5的抗凝活性弱于肝素，较为缓和，对于人体的副作用小。附图说明图1为虾头类肝素在AMBERLITEFPA98Cl型树脂中的洗脱曲线图；图2为虾头类肝素F1.1和虾头类肝素F1.5的乙酸纤维素薄膜电泳结果图；图3为虾头类肝素F1.1和虾头类肝素F1.5的紫外光谱图；图4为虾头类肝素F1.1和虾头类肝素F1.5的HPGPC谱图；图5为虾头类肝素F1.1和虾头类肝素F1.5的FT-IR谱图；图6为虾头类肝素F1.1和虾头类肝素F1.5的单糖组成结果图；图7为Hep、虾头类肝素F1.1和虾头类肝素F1.5的抗凝血活性APTT结果图；图8为Hep、虾头类肝素F1.1和虾头类肝素F1.5的抗凝血活性TT结果图；图9为Hep、虾头类肝素F1.1和虾头类肝素F1.5的抗凝血活性PT结果图。具体实施方式本专利技术提供了一种虾头类肝素的制备方法，包括以下步骤：将虾头干体、氯化钠和水混合后调节pH值至7.5～8.5，与碱性蛋白酶混合进行酶解，得到酶解液；将所述酶解液进行灭酶后离心分离，得到上清液；将所述上清液依次进行强碱性大孔阴离子交换树脂吸附和氯化钠水溶液洗脱，得到洗脱液；所述氯化钠水溶液的浓度为0.5～1.5mol/L；将所述洗脱液进行沉淀，得到虾头类肝素。本专利技术将虾头干体、氯化钠和水混合后调节pH值至7.5～8.5，与碱性蛋白酶混合进行酶解，得到酶解液。在本专利技术中，所述虾头干体的制备方法优选包括：将新鲜虾头匀浆，得到虾头匀浆液；将所述虾头匀浆液在有机溶剂中浸泡后除有机溶剂，得到虾头干体。在本专利技术中，所述虾头优选为凡纳滨对虾的虾头。本专利技术对于所述匀浆的方法没有特殊限定，虾头匀浆液均一、无明显大颗粒即可；所述虾头匀浆液中的颗粒粒度优选为80～100目。在本专利技术中，所述有机溶剂优选包括醇类溶剂或酮类溶剂，所述醇类溶剂优选包括甲醇或乙醇；所述酮类溶剂优选包括丙酮；本专利技术对于所述有机溶剂的用量没有特殊限定，能够将虾头匀浆液浸没即可。在本专利技术中，所述浸泡的温度优选为室温；时间优选为12～48h，更优选为20～40h，最优选为30h；所述浸泡的目的是对虾头进行脱脂脱色。本专利技术对于所述除有机溶剂的方式没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的除有机溶剂方式即可。在本专利技术中，所述虾头干体、氯化钠和水的质量比优选为1：(0.05～0.08)：(5～10)，更优选1：(0.06～0.07)：(6～8)。本专利技术加入上述比例的氯化钠可以提高虾头中蛋白质的溶解度，提高酶解效率，促进多糖从糖蛋白中分离。在本专利技术中，所述混合方式优选为搅拌混合，本专利技术对于所述搅拌混合的速度和时间没有特殊限定，能够将原料混合均匀即可。在本专利技术中，所述混合的顺序优选为将虾头干体分散于水中后加入氯化钠。在本专利技术中，所述调节pH值采用的试剂优选包括氢氧化钠或氢氧化钾。在本专利技术中，所述pH值进一步优选为8。本专利技术对于所述碱性蛋白酶的种类没有特殊限定，采用本领本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种虾头类肝素的制备方法，包括以下步骤：/n将虾头干体、氯化钠和水混合后调节pH值至7.5～8.5，与碱性蛋白酶混合进行酶解，得到酶解液；/n将所述酶解液进行灭酶后离心分离，得到上清液；/n将所述上清液依次进行强碱性大孔阴离子交换树脂吸附和氯化钠水溶液洗脱，得到洗脱液；所述氯化钠水溶液的浓度为0.5～1.5mol/L；/n将所述洗脱液进行沉淀，得到虾头类肝素。/n

【技术特征摘要】
1.一种虾头类肝素的制备方法，包括以下步骤：
将虾头干体、氯化钠和水混合后调节pH值至7.5～8.5，与碱性蛋白酶混合进行酶解，得到酶解液；
将所述酶解液进行灭酶后离心分离，得到上清液；
将所述上清液依次进行强碱性大孔阴离子交换树脂吸附和氯化钠水溶液洗脱，得到洗脱液；所述氯化钠水溶液的浓度为0.5～1.5mol/L；
将所述洗脱液进行沉淀，得到虾头类肝素。


2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述虾头干体、氯化钠和水的质量比为1：(0.05～0.08)：(5～10)。


3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述虾头干体和碱性蛋白酶的质量比为1：(0.05～0.1)；所述酶解的温度为50～55℃，时间为20～24h。


4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述灭酶的温度为90～110℃，时间为10～15min。

【专利技术属性】
技术研发人员：钟赛意，陈菁，杜振兴，周斯仪，陈建平，贾学静，李瑞，刘晓菲，李程鹏，谌素华，
申请(专利权)人：广东海洋大学，
类型：发明
国别省市：广东;44