一种体外培养脐带血CIK细胞的方法技术

本发明专利技术公开了一种体外培养脐带血CIK细胞的方法，包括以下步骤：(1)从脐带血中分离得到脐带血单个核细胞，用无血清培养基制备为单核细胞悬液；(2)向上述步骤(1)的细胞悬液中添加IFN‑γ850‑950U/mL，培养1天后添加IL‑2 600‑700U/mL、单抗CD3 20‑30ng/mL、三肽‑1铜20‑50ng/mL，继续培养；(3)培养至第3‑4天添加甜叶菊苷110‑120ng/mL，积雪草苷80‑100ng/mL，诱导培养至第12天收集细胞，在诱导培养过程中每隔1‑2天添加无血清培养基使细胞浓度保持在1‑2×10

【技术实现步骤摘要】
一种体外培养脐带血CIK细胞的方法
本专利技术涉及细胞培养领域，尤其涉及一种体外培养脐带血CIK细胞的方法。
技术介绍
多种细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)是将人外周血或者脐带血的单个核细胞在体外用多种细胞因子共同培养一段时间后获得的一群异质细胞。由于该种细胞同时表达CD3+和CD56+两种膜蛋白分子，故又称为NK样T淋巴细胞，兼具有T淋巴细胞强大的抗肿瘤活性和NK细胞的非MHC限制性杀瘤优点。因其在体外扩增速度快，杀伤活性高，杀瘤谱广，不良反应少，可提高患者的免疫功能，消除微小残留，被认为是抗肿瘤过继细胞免疫治疗的首选方案。现有技术中的CIK细胞制备方法大多采用人的外周血单个核细胞，CIK细胞在正常的人外周血中极其罕见，仅1％-5％，需要进行体外扩增才能满足使用需求，体外扩增过程先加入IFN-γ，24小时后再加入其他细胞因子如IL-2、IL-I、CD3单抗，在37℃、5％二氧化碳的条件下直接诱导成CIK细胞。但是这种方法诱导培养的这种方法制备出的CIK细胞存在繁殖能力差，CIK细胞中含有数量较多的CD4+CD25+调节性T本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种体外培养脐带血CIK细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)从脐带血中分离得到脐带血单个核细胞，用无血清培养基制备为单核细胞悬液；/n(2)向上述步骤(1)的细胞悬液中添加IFN-γ850-950U/mL，培养1天后添加IL-2 600-700U/mL、单抗CD3 20-30ng/mL、三肽-1铜20-50ng/mL，继续培养；/n(3)培养至第3-4天添加甜叶菊苷110-120ng/mL，积雪草苷80-100ng/mL，诱导培养至第12天收集细胞，在诱导培养过程中每隔1-2天添加无血清培养基使细胞浓度保持在1-2×10

【技术特征摘要】
1.一种体外培养脐带血CIK细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)从脐带血中分离得到脐带血单个核细胞，用无血清培养基制备为单核细胞悬液；
(2)向上述步骤(1)的细胞悬液中添加IFN-γ850-950U/mL，培养1天后添加IL-2600-700U/mL、单抗CD320-30ng/mL、三肽-1铜20-50ng/mL，继续培养；
(3)培养至第3-4天添加甜叶菊苷110-120ng/mL，积雪草苷80-100ng/mL，诱导培养至第12天收集细胞，在诱导培养过程中每隔1-2天添加无血清培养基使细胞浓度保持在1-2×106个/mL，无血清培养基中含有甜叶菊苷35-40ng/mL，积雪草苷20-...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁杰，马超群，
申请(专利权)人：郑州佐爵生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41