一种窖泥功能菌液、功能菌及其制备方法技术

本发明专利技术专利公开了一种窖泥功能菌液、功能菌及其制备方法，具体涉及生物发酵的技术领域。一种窖泥功能菌液的制备方法，包括如下步骤：将黄水按一定比例稀释后加入窖泥，于30℃，pH4.0～6.5下厌氧培养15～30d，获得种子液；将种子液转接于稀释后的黄水中，氮吹除氧20～30min，于30℃，pH4.0～6.5下厌氧培养15～30d；重复上述步骤5～8次，可得到含有产酸菌群的功能菌液。一种窖泥功能菌的制备方法，包括如下步骤：将上述功能菌液转接于产酸梭菌培养基中，于30℃，pH4.0～6.5下厌氧培养15～30d；将发酵完成的菌液进行稀释涂布，可分离筛选出窖泥中的功能菌。采用本发明专利技术技术方案克服了窖泥中功能微生物的开发和利用的问题，可用于白酒酿造及功能菌的开发研究。

【技术实现步骤摘要】
一种窖泥功能菌液、功能菌及其制备方法
本专利技术涉及生物发酵的
，特别涉及一种窖泥功能菌液、功能菌及其制备方法。
技术介绍
俗话说“好窖出好酒”、“酒好还需窖池老”，窖泥是浓香型白酒特有的发酵容器，随着一轮又一轮发酵的进行，窖泥中富集了大量经长期驯化的有益酿酒微生物，这些功能微生物为生产优质浓香型白酒提供了先决条件。己酸乙酯、丁酸乙酯、乳酸乙酯和乙酸乙酯是浓香型白酒中的主要酯类物质，这些酯类物质所对应的前体物(乙酸、己酸和丁酸)大多数是由窖泥中的产酸微生物所产生。因此，开发这些功能微生物对于提高浓香型白酒质量具有重要意义。在白酒固态发酵过程中，微生物代谢生成的水与酒醅中未被利用的水从发酵物料中渗漏到窖池底部从而形成黄水。黄水含有有机酸、酵母溶出物、可溶性淀粉、还原糖、乙醇、氨基酸等物质。因窖泥长期浸泡在黄水中，窖泥中的微生物也通过黄水进行传质和代谢作用。因此，将黄水视为一种天然培养基来富集窖泥中的产酸菌是可行的。
技术实现思路
本专利技术意在提供一种窖泥功能菌液、功能菌及其制备方法，以解决窖泥中功能微生物的开发和利用问题。为了达到上述目的，本专利技术的技术方案如下：一种窖泥功能菌的制备方法，包括如下步骤：S102、取1份黄水加入5～8份水，准备窖龄为20～50年且正常发酵的窖池中的窖泥，将窖泥按质量占比5％～10％接入稀释后的黄水中，pH值调节至4.0～6.5，在30℃下厌氧培养15～30d，从而获得种子液；S104、将S102所述的种子液按质量占比10～30％转接于与S102所述步骤中相同的黄水稀释液，pH值调节至4.0～6.5，氮吹除氧20～30min后，于30℃下厌氧培养15～30d；S106、重复S104所述步骤5～8次，可得到含有产酸菌群的功能菌液。本方案的工作原理：酿酒废水(如黄水)中含有大量的乳酸和少量的乙醇。而在浓香型白酒发酵过程中，窖泥直接浸泡在黄水中，窖泥中的产酸菌通过黄水而发生作用。因此，窖泥中的微生物长期适应着黄水的环境。经过S102～S106所述步骤，窖泥中的产酸微生物不断被驯化和富集，从而制备了一种能够代谢乳酸或乙醇的窖泥功能液。进一步的，一种窖泥功能菌液可在白酒酿酒及酿酒废水的物质转化的应用。本专利技术的另一种技术方案：一种窖泥功能菌的制备方法，包括如下步骤：S108、将S106所述的功能菌液按质量占比15％～30％转接于以乳酸或乙醇为碳源的产酸梭菌培养基中，pH调至4.0～6.5，在30℃下厌氧培养15～30d；S110、将S108所述发酵完成后的菌液稀释涂布于固体产酸梭菌培养基中，于30℃下厌氧培养7～15d；挑取平板上的单菌落于液体产酸梭菌培养基中，于30℃下厌氧培养7～15d，采用气相色谱－质谱联用仪对发酵液中的有机酸进行检测，从而筛选出产酸菌株。本方案的工作原理：因黄水作为一种天然培养基，营养成分丰富但也且复杂，难以区分功能菌株代谢的底物和产物。因此，将S106所述功能菌液转接于以乙醇或乳酸为唯一碳源的产酸梭菌培养基中，通过产物检测不仅可以判断用黄水驯化和富集产酸菌的有效性，还可以准确地筛选到目标功能菌株。进一步的，所述产酸梭菌培养基采用如下方法制作：20～30g乳酸、1.0～3.0g酵母膏、0.5～1.0g(NH4)2SO4、0.1～0.3gMgSO4·7H20和0.5～1.0gK2HPO4，加水定容至1L，用浓度为5mol/L的NaOH将pH值调节至4.0～6.5，121℃灭菌20～30min，待培养基冷却至常温后加入8.0～12.0g/L无菌CaCO3。进一步的，所述产酸梭菌培养基采用如下方法制作：1.0～3.0g酵母膏、0.5～1.0g(NH4)2SO4、0.1～0.3gMgSO4·7H20和0.5～1.0gK2HPO4，加水定容至1L，用浓度为5mol/L的NaOH将pH值调节至4.0～6.5，121℃灭菌20～30min，待灭菌完成的培养基冷却至常温后加入10～20g/L乙醇和8.0～12.0g/L无菌CaCO3。进一步的，向产酸梭菌培养基中加入15～20g/L的琼脂粉，从而制得固体培养基。与现有技术相比，本方案的有益效果：窖泥中的产酸菌群经过黄水多轮次的从富集，不仅可使黄水转换成具有再利用价值的功能菌液，还使窖泥中的产酸功能菌得到了富集。利用以乳酸、乙醇为唯一碳源的产酸梭菌培养基对窖泥功能菌液中的产酸细菌进行分离和筛选，可以确定产酸菌株的所利用的碳源和产酸类型。利用本专利技术所述方法不仅可快速获得窖泥功能产酸菌，对于获得的菌群和单菌还具有较好的实际应用价值。具体实施方式下面通过具体实施方式对本专利技术作进一步详细的说明：实施例1：一种窖泥功能菌液的制备方法，包括如下步骤：S102、取1份黄水加入5份水，准备窖龄为20～50年且正常发酵的窖池中的窖泥，将窖泥按质量占比10％接入稀释后的黄水中，pH值调节至5.5，在30℃下厌氧培养15～30d，从而获得种子液；S104、将S102的种子液按质量占比30％转接于与S102中相同的黄水稀释液，pH值调节至5.5，氮吹除氧20～30min后，于30℃下厌氧培养15～30d；S106、重复S104所述步骤8次，可得到含有产酸菌群的功能菌液。将上述功能菌液经气相谱－质谱联用仪检测，与按份数稀释后黄水中有机酸含量的对比如表1所示：表1：稀释后的黄水与发酵完的黄水中有机酸含量对比乙酸(g/L)丙酸(g/L)丁酸(g/L)己酸(g/L)乳酸(g/L)稀释后的黄水0.570.140.350.2132.11发酵完的黄水5.680.967.634.822.76由表1可以看出，在pH值达到5.5的情况下，相较于稀释后的黄水，窖泥中的菌群发挥着巨大的产酸作用。其中乙酸增加了8.96倍，丙酸增加了5.86倍，丁酸增加了20.80倍，己酸增加了21.95倍，乳酸降低了0.91倍。由此可见，黄水可对窖泥中的产酸菌群进行富集，并且有较好的产酸效果，不仅体现在“增己降乳”上，还能使黄水变废为宝。一种窖泥功能菌的制备方法，包括如下步骤：S108、将S106所述的功能菌液按质量占比15％转接于以乳酸或乙醇为碳源的产酸梭菌培养基中，pH调至5.5，在30℃下厌氧培养15～30d；产酸梭菌培养基采用如下方法制作：30g乳酸、2.0g酵母膏、0.5(NH4)2SO4、0.1gMgSO4·7H20和0.5gK2HPO4，加水定容至1L。用浓度为5mol/L的NaOH将pH值调节至5.5，121℃灭菌20～30min，待培养基冷却至常温后加入8.0～12.0g/L无菌CaCO3。若要将乳酸替换为乙醇，则需待灭菌完成的培养基冷却至常温后加入浓本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种窖泥功能菌液的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：/nS102、取1份黄水加入5～8份水，准备窖龄为20～50年且正常发酵的窖池中的窖泥，将窖泥按质量占比5％～10％接入稀释后的黄水中，pH值调节至4.0～6.5，在30℃下厌氧培养15～30d，从而获得种子液；/nS104、将S102所述的种子液按质量占比10～30％转接于与S102所述步骤中相同的黄水稀释液，pH值调节至4.0～6.5，氮吹除氧20～30min后，于30℃下厌氧培养15～30d；/nS106、重复S104所述步骤5～8次，可得到含有产酸菌群的功能菌液。/n

【技术特征摘要】
1.一种窖泥功能菌液的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
S102、取1份黄水加入5～8份水，准备窖龄为20～50年且正常发酵的窖池中的窖泥，将窖泥按质量占比5％～10％接入稀释后的黄水中，pH值调节至4.0～6.5，在30℃下厌氧培养15～30d，从而获得种子液；
S104、将S102所述的种子液按质量占比10～30％转接于与S102所述步骤中相同的黄水稀释液，pH值调节至4.0～6.5，氮吹除氧20～30min后，于30℃下厌氧培养15～30d；
S106、重复S104所述步骤5～8次，可得到含有产酸菌群的功能菌液。


2.一种窖泥功能菌液在白酒酿酒及酿酒废水的物质转化的应用。


3.一种窖泥功能菌的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
S108、将S106所述的功能菌液按质量占比15％～30％转接于以乳酸或乙醇为碳源的产酸梭菌培养基中，pH调至4.0～6.5，在30℃下厌氧培养15～30d；
S110、将S108所述发酵完成后的菌液稀释涂布于固体产酸梭菌培养基中，于30℃下厌氧培养7～15d；挑取平板上的单菌落于液体产酸梭菌培养基中，于30℃下厌氧培养7～15d，采用气相色谱－质谱联用仪对发酵液中的...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄治国，任志强，卫春会，邓杰，郭燕，
申请(专利权)人：四川轻化工大学，
类型：发明
国别省市：四川;51