改善肠道微生态缓解便秘的凝结芽孢杆菌BC01及应用制造技术

本发明专利技术筛选出了的一株具备优良益生特性的凝结芽孢杆菌BC01，本发明专利技术筛选出的凝结芽孢杆菌BC01有着在改善肠道菌群丰度以及缓解便秘症状方面的优良特性，本发明专利技术利用凝结芽孢杆菌BC01增加肠道菌群丰度以及缓解便秘症状。本发明专利技术还提供了从含凝结芽孢杆菌的样本中筛选出凝结芽孢杆菌BC01以及进行培养的方法。本发明专利技术提供的凝结芽孢杆菌BC01在每日晚上睡觉前摄入量为20亿CFU‑50亿CFU时，连续摄入7‑10天，就可以很有效的缓解便秘症状且可以显著提高肠道菌群的丰度，效果强于现有乳酸菌类益生菌。

【技术实现步骤摘要】
改善肠道微生态缓解便秘的凝结芽孢杆菌BC01及应用
本专利技术属于微生物领域，特别涉及凝结芽孢杆菌。
技术介绍
随着科学家对人体共生微生物的研究日益加深，现在科学家们已经普遍确定人是由自身细胞与共生微生物组成的超级生命体。人体的健康是由自身细胞及其共生微生物共同决定的。肠道菌群是人体最大的共生微生态菌群，众多科学研究已经证实，肠道菌群的失衡与多种疾病(比如，肠炎、便秘、腹泻、炎症、精神疾病等)有着关联。因此，维护肠道微生态平衡对维持人体健康有着重要的意义。饮食结构可以直接影响肠道菌群的组成和丰度，现在已经普遍采用饮食、益生菌、益生元、粪便移植等方式来对肠道菌群进行干预。这些干预手段各有其优点和缺陷。当采用益生菌对肠道菌群进行干预的时候，与益生菌菌株的自有特性紧密相关。因此，即便是同一菌种，但不同菌株对人体的健康功效可能都有着截然不同甚至相反的效果。比如，FatihOzogul[1]等就列举除了嗜酸乳杆菌的8株不同菌株，它们产生不同的细菌素，有着不同的抑菌谱,对人体有着不同的健康功能。因此，筛选和纯化各类具有各自特性的益生菌菌株并且将之运用于人体健康领域也是益生菌产业的核心技术和竞争力。肠道菌群紊乱或者功能异常会导致便秘、腹泻或者肠易激综合征等疾病。对于肠道便秘的资料，医学上普遍采用改善肠神经药物、泻药或者生物疗法作为治疗的主要方法。以乳酸菌为代表的的益生菌产品虽然也用于治疗便秘，但大部分此类益生菌单独使用的时候效果都不如预期，因此常常作为辅助治疗手段。
技术实现思路
本专利技术筛选出了的一株具备优良益生特性的凝结芽孢杆菌BC01，本专利技术筛选出的凝结芽孢杆菌BC01有着在改善肠道菌群丰度以及缓解便秘症状方面的优良特性，本专利技术利用凝结芽孢杆菌BC01增加肠道菌群丰度以及缓解便秘症状。本专利技术提供的凝结芽孢杆菌BC01在每日晚上睡觉前摄入量为20亿CFU-50亿CFU时，连续摄入7-10天，就可以很有效的缓解便秘症状且可以显著提高肠道菌群的丰度，效果强于现有乳酸菌类益生菌。根据本专利技术的一方面，提供了一种凝结芽孢杆菌BC01，该凝结芽孢杆菌BC01为保藏编号：CCTCCNO:M2017813的菌株。根据本专利技术的一方面，上述凝结芽孢杆菌BC01的16SrDNA测序结果如SEQIDNo.1。16srDNA是菌株的保守序列，同一个种的菌保守序列大多大部分相同。基因组测序显示本专利技术筛选出的这株菌与市售其他的凝结芽孢杆菌菌株不同。因此，专利技术的这株菌在缓解便秘和增加肠道菌群丰度方面的优良特性。本专利技术的菌株已经进行了专利保藏。根据本专利技术的一方面，还提供了一种凝结芽孢杆菌BC01，该凝结芽孢杆菌BC01具备如下形态特征：呈细长杆状、革兰氏染色阳性、形态特征芽孢端生，有的芽孢会脱落。根据本专利技术的一方面，还提供了一种凝结芽孢杆菌BC01，该凝结芽孢杆菌BC01还具有如下形态特征：平板形态为乳白色菌落、边缘整齐，大小约2-4mm。根据本专利技术的一方面，还提供了一种凝结芽孢杆菌BC01，该芽孢杆菌BC01具有如下生理生化特征：接触酶实验阳性；氧化酶实验阴性；VP实验阳性；产酸实验：D-甘露醇阴性；产酸实验：葡萄糖阳性；淀粉水解阳性；利用盐类：柠檬酸盐阴性；利用盐类：丙酸盐阴性；7％NaCl生长阴性；最高生长温度为60℃；明胶液化阴性。根据本专利技术的一方面，还提供了一种凝结芽孢杆菌BC01的制备方法，该凝结芽孢杆菌BC01制备方法为如下两种制备方法中任意一种：方法1步骤如下：在无菌瓶中加入含菌样品无菌生理盐水制备成含菌原液，然后将原液梯度稀释101倍、102倍、103倍、104倍、105倍、106倍、107倍、108倍、109倍；将上诉原液和各稀释倍数的稀释液涂布于凝结芽孢杆菌富集固体培养基上，在恒温箱中40℃培养48小时，挑选分离充分、长势良好的单菌落再次接种于凝结芽孢杆菌富集液体培养基上，在摇床中以220rpm的转速40℃培养24小时；将液体培养基以10000rpm的转速离心，收集菌泥进行16SrDNA分析，通过NCBI比对后鉴定出凝结芽孢杆菌，再对纯种进行保藏进行进一步的生理生化、耐抗生素、耐胃酸小肠液等试验分析；或方法2：在无菌瓶中加入含菌样品无菌生理盐水制备成含菌原液，直接将含菌原液接种于凝结芽孢杆菌富集液体培养基中，在摇床上以220rpm的转速40℃培养48小时。然后将液体培养液80℃处理20分钟，再将液体培养液涂布于凝结芽孢杆菌富集固体培养基中，挑选充分分离，长势良好的菌落接种进凝结芽孢杆菌富集固体培养斜面在恒温箱中40℃培养48小时。将获得的菌泥先进行16SrDNA分析，通过NCBI比对后鉴定出凝结芽孢杆菌，再对纯种进行保藏进行进一步的生理生化、耐抗生素、耐胃酸小肠液等试验分析。根据本专利技术的一方面，还提供了凝结芽孢杆菌BC01的应用，本专利技术的凝结芽孢杆菌BC01作为改善肠道微生态或缓解功能性便秘的药物、食品或者保健品。根据本专利技术的一方面，还提供了凝结芽孢杆菌BC01的非治疗用途的应用，本专利技术的凝结芽孢杆菌BC01用于改善肠道微生态、缓解便秘症状。根据本专利技术的一方面，还提供了一种凝结芽孢杆菌BC01制剂，该凝结芽孢杆菌BC01的制剂含有本专利技术的凝结芽孢杆菌BC01。根据本专利技术的一方面，还提供了一种凝结芽孢杆菌BC01制剂，上述凝结芽孢杆菌BC01制剂含有20亿CFU～50亿CFU的所述凝结芽孢杆菌BC01。本专利技术还提供一种凝结芽孢杆菌BC01的纯种制剂，每日睡前单独摄入20亿CFU-50亿CFU该菌株的纯种制剂，连续摄入7-10天，就可以有效缓解功能性便秘，提高肠道菌群丰度指数。制剂类型为药学上可接受的任意制剂类型。附图说明图1、为本专利技术其一个实施例中营养体形态的凝结芽孢杆菌BC01的显微照片；图2、为本专利技术其中一个实施例中芽孢体形态的凝结芽孢杆菌BCO1的显微照片；图3、为本专利技术其中一个实施例中测序比对结果图；图4、为本专利技术其中一个实施例中凝结芽孢杆菌BC01对各种主要抗生素的敏感性试验结果图；图5、为本专利技术其中一个实施例中凝结芽孢杆菌BC01的抗逆性能测试结果图；图6、为本专利技术其中一个实施例中部分试食凝结芽孢杆菌BC01规格利用二代测序技术进行肠道菌群分析后，无人工干预的算法自动归类结果图；图7、为本专利技术其中一个实施例中每天摄入20亿CFU的凝结芽孢杆菌BC01可以有效提高食用人群的肠道菌群丰度(n＝15)结果图。具体实施方式下述的实施例是为了进一步说明本专利技术的一些优选实施例，并非全部实施例。本领域专业人员在没有进行创造性劳动的前提下做出的基于本专利技术的其他实施例，都属于本专利技术的权利保护范围。下面将结合附图对本专利技术作进一步的说明。实施例1凝结芽孢杆菌BC01本专利技术提供的凝结芽孢杆菌BC01保藏于中国典型培养物保藏中本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.凝结芽孢杆菌BC01，其特征在于，所述凝结芽孢杆菌BC01为保藏编号：CCTCC NO:M2017813的菌株。/n

【技术特征摘要】
1.凝结芽孢杆菌BC01，其特征在于，所述凝结芽孢杆菌BC01为保藏编号：CCTCCNO:M2017813的菌株。


2.根据权利要求1所述的凝结芽孢杆菌BC01，其特征在于，所述凝结芽孢杆菌BC01的16SrDNA测序结果如SEQIDNo.1。


3.根据权利要求1所述的凝结芽孢杆菌BC01，其特征在于，所述凝结芽孢杆菌BC01具备如下形态特征：呈细长杆状、革兰氏染色阳性、形态特征芽孢端生，有的芽孢会脱落。


4.根据权利要求3所述的凝结芽孢杆菌BC01，其特征在于，所述凝结芽孢杆菌BC01还具有如下形态特征：平板形态为乳白色菌落、边缘整齐，大小约2-4mm。


5.根据权利要求1所述的凝结芽孢杆菌BC01，其特征在于，所述结芽孢杆菌BC01具有如下生理生化特征：
接触酶实验阳性；
氧化酶实验阴性；
VP实验阳性；
产酸实验：D-甘露醇阴性；
产酸实验：葡萄糖阳性；
淀粉水解阳性；
利用盐类：柠檬酸盐阴性；
利用盐类：丙酸盐阴性；
7％NaCl生长阴性；
最高生长温度为60℃；
明胶液化阴性。


6.根据权利要求1所述的凝结芽孢杆菌BC01的制备方法，所述凝结芽孢杆菌BC01制备方法为如下两种制备方法中任意一种：
方法1步骤如下：在无菌瓶中加入含菌样品和无菌生理盐水制备成含菌原液，然后将原液梯度稀释101倍、102倍、103倍、104倍、105倍、106倍、107倍、108倍、109倍；将上诉原液和各稀释倍数的稀释液涂布于凝结芽孢杆菌富集固体培养基上，在恒温箱...

【专利技术属性】
技术研发人员：喻扬，郁雪平，吴婷婷，
申请(专利权)人：善恩康生物科技苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32