一种牛棘球蚴EG95蛋白抗体间接ELISA检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种牛棘球蚴EG95蛋白抗体间接ELISA检测试剂盒，包括细粒棘球绦虫重组抗原EG95蛋白预包被酶标板、血清稀释液、酶标记结合物稀释液、阳性对照液、阴性对照液、酶标记结合物、洗涤液、底物显色液和终止液；细粒棘球绦虫重组抗原制备过程中在EG95基因采用Xho I和EcoRⅠ同时酶切PCR产物和真核表达载体pGAPZαA，胶回收目的片段和载体后进行连接，构建重组质粒pGAPZαA‑Eg95，再将重组质粒转化到毕赤酵母SMD1168菌，连续经含100μg/mL和200μg/mL Zeocin的YPD培养基筛选，然后经甘油诱导表达。本发明专利技术采用真核表达系统获得的重组蛋白EG95用于创制牛棘球蚴病抗体检测试剂盒，具有特异性强、敏感性高、重复性好、易于操作优点。

【技术实现步骤摘要】
一种牛棘球蚴EG95蛋白抗体间接ELISA检测试剂盒
本专利技术属于基因工程技术和诊断试剂
，尤其涉及一种牛棘球蚴EG95蛋白抗体间接ELISA检测试剂盒。
技术介绍
棘球蚴病(echinococcosis)，俗称包虫病，是由棘球属绦虫的幼虫——棘球蚴寄生于动物(包括人)的肝、肺等组织而引起的一种危害严重的人兽共患寄生虫病，是全球性重要公共卫生问题之一。棘球蚴病被世界动物卫生组织(OIE)归为全球通报的传染性疫病，被世界卫生组织(WHO)列为17种被忽视的热带病(Neglectedtropicaldiseases,NTDs)之一。棘球蚴病不仅影响着发展中国家和地区的贫困人群，而且对一些国家或地区动物及动物产品国际贸易构成了障碍。在棘球蚴病防治中，关键环节在于控制动物棘蚴病传染源、切断生活史循环链。一方面，需要管控棘球蚴病变牛、羊内脏饲喂犬等食肉动物，同时，对流行区牛、羊进行免疫预防。另一方面，要按照“犬犬驱虫、月月投药”的方案对流行区犬等终末宿主进行全面的驱虫管理。Lightowlers等人研制了抗细粒棘球绦虫虫卵感染的E本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种牛棘球蚴EG95蛋白抗体间接ELISA检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括细粒棘球绦虫重组抗原EG95蛋白预包被酶标板、血清稀释液、酶标记结合物稀释液、阳性对照液、阴性对照液、酶标记结合物、洗涤液、底物显色液和终止液；细粒棘球绦虫重组抗原EG95是通过以下方法制备的：首先PCR扩增EG95基因片段，并引入Xho I和EcoR Ⅰ酶切位点，然后采用EcoR Ⅰ和Xho I同时酶切PCR产物和真核表达载体pGAPZαA，胶回收目的片段和载体，然后进行连接，构建重组质粒pGAPZαA-EG95，再将重组质粒转化到毕赤酵母SMD1168菌株感受态细胞中，经含Zeocin的YPD培养基筛选，然后...

【技术特征摘要】
1.一种牛棘球蚴EG95蛋白抗体间接ELISA检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括细粒棘球绦虫重组抗原EG95蛋白预包被酶标板、血清稀释液、酶标记结合物稀释液、阳性对照液、阴性对照液、酶标记结合物、洗涤液、底物显色液和终止液；细粒棘球绦虫重组抗原EG95是通过以下方法制备的：首先PCR扩增EG95基因片段，并引入XhoI和EcoRⅠ酶切位点，然后采用EcoRⅠ和XhoI同时酶切PCR产物和真核表达载体pGAPZαA，胶回收目的片段和载体，然后进行连接，构建重组质粒pGAPZαA-EG95，再将重组质粒转化到毕赤酵母SMD1168菌株感受态细胞中，经含Zeocin的YPD培养基筛选，然后经甘油诱导表达，并经蛋白层析技术纯化。


2.如权利要求1所述的牛棘球蚴EG95蛋白抗体间接ELISA检测试剂盒，其特征在于：抗原包被的方法：将纯化的重组蛋白EG95用包被缓冲液稀释至10μg/mL，包被酶标板，每孔加100μL，4℃过夜，用洗涤液洗涤3次，每次2min；然后加入含质量分数5％脱脂奶粉的PBS封闭液，每孔加200μL，37℃孵育2h，随后用洗涤液洗涤3次，每次2min，真空包装后置于4℃保存备用。


3.如权利要求1所述的牛棘球蚴EG95蛋...

【专利技术属性】
技术研发人员：闫鸿斌，贾万忠，李立，李文卉，张念章，付宝权，李建秋，刘百林，李乐，李文静，何智宇，郭爱民，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所，
类型：发明
国别省市：甘肃;62