一种检测样品体系中微量蛋白的方法技术

一种检测样品体系中微量蛋白的方法，包括：提供待测蛋白的一抗修饰的免疫磁珠和二抗修饰的纳米颗粒；将一抗修饰的免疫磁珠和二抗修饰的纳米颗粒与含有待测蛋白的样品体系混合孵育，形成双抗夹心结构复合体；使复合体以单颗粒形式通过微纳孔装置并引发电脉冲信号，分析电脉冲信号得到复合体的电荷状态或者体积/质量状态，根据电荷状态或者体积/质量状态计算样品体系中待测蛋白的数量。本发明专利技术通过免疫特异性结合磁珠的方式，检测单个磁珠复合体的电荷状态，从而计算出微量蛋白的绝对数量，检出限低至单个蛋白分子，可以检出常规免疫检测检出下限以下的微量蛋白，可广泛应用于免疫学检测、微生物检测、细胞分离等领域。

【技术实现步骤摘要】
一种检测样品体系中微量蛋白的方法
本专利技术涉及蛋白质检测
，尤其涉及一种检测样品体系中微量蛋白的方法。
技术介绍
在几种常用的免疫学检测技术中，酶联免疫检测是目前应用最广泛的免疫检测方法。该方法是将二抗标记上酶，抗原抗体反应的特异性与酶催化底物的作用结合起来，根据酶作用底物后的显色颜色变化来判断试验结果，其敏感度可达纳克水平。常见用于标记的酶有辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶(AP)等。由于酶联免疫法无需特殊的仪器，检测简单，因此被广泛应用于疾病检测。常用的方法包括间接法、夹心法以及BAS－ELISA法。间接法是先将待测的蛋白包被在孔板内，然后依次加入一抗、标记了酶的二抗和底物显色，通过仪器(例如酶标仪)定量检测抗原。这种方法操作简单，但由于高背景而特异性较差，目前已逐渐被夹心法取代。夹心法利用两种抗体对目标抗原进行捕获和固定，在确保灵敏度的同时大大提高了反应的特异性。免疫磁珠捕获法是一种将磁珠磁场响应能力与免疫特异性相结合的新型免疫学技术。免疫磁珠具有固相化试剂特质及免疫学反应高灵敏度、高专一性等优点。此处，还有基本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测样品体系中微量蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括：/n提供待测蛋白的一抗修饰的免疫磁珠和二抗修饰的纳米颗粒；/n将所述一抗修饰的免疫磁珠和二抗修饰的纳米颗粒与含有所述待测蛋白的样品体系混合孵育，形成双抗夹心结构复合体；/n使所述复合体以单颗粒形式通过微纳孔装置并引发电脉冲信号，分析所述电脉冲信号得到所述复合体的电荷状态或体积/质量状态，根据所述电荷状态或体积/质量状态计算所述样品体系中待测蛋白的数量。/n

【技术特征摘要】
1.一种检测样品体系中微量蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括：
提供待测蛋白的一抗修饰的免疫磁珠和二抗修饰的纳米颗粒；
将所述一抗修饰的免疫磁珠和二抗修饰的纳米颗粒与含有所述待测蛋白的样品体系混合孵育，形成双抗夹心结构复合体；
使所述复合体以单颗粒形式通过微纳孔装置并引发电脉冲信号，分析所述电脉冲信号得到所述复合体的电荷状态或体积/质量状态，根据所述电荷状态或体积/质量状态计算所述样品体系中待测蛋白的数量。


2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述方法还包括：在适于抗体修饰反应的溶液体系中，使所述一抗与免疫磁珠表面的功能基团共价结合得到所述一抗修饰的免疫磁珠。


3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，通过调节所述溶液体系中所述一抗与所述免疫磁珠的浓度比例，来调节所述一抗在所述免疫磁珠表面的修饰程度。


4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述免疫磁珠的粒径至少是所述纳米颗粒的1-1000倍；
优选地，所述免疫磁珠的粒径大体上为100纳米到10微米，所述纳米颗粒的粒径大体上小于1微米。


5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述微纳孔装置是基于库尔特原理的微纳孔单颗粒计数装置，该装置包括两个充满电解液的腔室，以及联通所述两个充满电解液的腔室的微纳孔，当所述复合体以单颗粒形式通过所述微纳孔时，短暂堵塞离子在所述微纳孔中的流动，形成电脉冲信号。


6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述电脉冲信号反映所述复合体的电荷状态，通过分析所述电脉冲信号的峰波动得到所述复合体中结合的所述纳米颗粒的状态和/或数量，根据所述状态和/或数量以及双抗夹心结构反应原理计算所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：柳可，熊贵，王哲，
申请(专利权)人：瑞芯智造深圳科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44