一种酶标抗体缓冲液、试剂R1和肌酸激酶同工酶测定试剂盒制造技术

本发明专利技术提供的一种酶标抗体缓冲液、试剂R1和肌酸激酶同工酶测定试剂盒，所述酶标抗体缓冲液的配方为：50mM～150mM缓冲液，5g/L～10g/L电解质，0.1％～1％防腐剂，0.1％～2％表面活性剂，2mM～20mM无机盐，0.3g/L～1g/L稳定剂，0.1％～3％阻断剂，0.1％～1％保护剂，pH值为6.4～6.6；其中，所述表面活性剂为Tetronic701、聚氧乙烯油醚中的一种或两种。所述试剂R1为采用所述的酶标抗体缓冲液稀释抗CK‑MB抗体‑碱性磷酸酶标记物获得的工作液。本发明专利技术在2～8℃下能稳定12个月且生物活性良好；对非特异性吸附有着较好的抵抗效果。

【技术实现步骤摘要】
一种酶标抗体缓冲液、试剂R1和肌酸激酶同工酶测定试剂盒
本专利技术属于免疫检测
，涉及一种酶标抗体缓冲液、试剂R1和肌酸激酶同工酶测定试剂盒。
技术介绍
急性心肌梗死(acutemyocardialinfarction，AMI)是冠状动脉急性、持续性缺血缺氧所引起的心肌坏死，可并发心律失常、休克或心力衰竭，常危及生命。本病在欧美最常见，美国每年约有150万人发生心肌梗死。中国近年来呈明显上升趋势，每年新发至少50万，现患至少200万。肌酸激酶(CreatineKinase，CK)，也称为肌酸磷酸激酶。CK是由M和B两个亚基组成的二聚体，有三种同工酶即CKMM、CKMB、CKBB，不同肌肉内同工酶的比例不同。CK-MB主要分布于心肌细胞中，在心肌损伤后3～4小时上升，24小时达到最高点，3天内可恢复正常。CK-MB是当今最广泛的心肌损伤标志物之一，CK-MB对判断心肌坏死也有较高的特异性，由于检测窗口期相对较短，CK-MB测定也适于诊断再发心肌梗死，如检测到CK-MB升高则预示着心肌坏死，是ACS患者评估中的重要预后指标，尤其是NSTE-ACS患者，入院后CK-MB浓度与30天病死率呈正相关性，CK-MB浓度低于参考范围上限者30天病死率为1.8％，浓度为参考范围上限1～2倍者为3.3％，而浓度大于参考范围上限10倍者为8.3％，CK-MB在心肌疾病中，尤其是心肌梗死的诊断、治疗过程中有着举足轻重，甚至不可替代的作用。在体外诊断试剂中，试剂的稳定性与抗干扰能力都是必不可少的，如在CN103278623A提到，试剂可在37℃条件下放置7天仍保持活性不变，并且其对于CK-MM与CK-BB的特异性交叉反应有较好的抗干扰能力，试剂性能优越。但当前的临床背景下，试剂盒所需抗干扰能力应该更强，如患者体内存在的类风湿因子(RF)和人抗鼠抗体(HAMAs)均会对检测结果产生影响，而且单一的37℃条件稳定性并不能适用于日常临床诊断。由此可见，目前试剂盒需要更高特异性，并在有临床分析价值的试剂储存条件下具备长期的有效活性。因此，如何制备一种稳定性好、能抗非特异性吸附的酶标抗体缓冲液、试剂R1和肌酸激酶同工酶测定试剂盒，成为亟待解决的技术问题。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种酶标抗体缓冲液、试剂R1和肌酸激酶同工酶测定试剂盒，稳定性好：在2～8℃下能稳定12个月且生物活性良好；在抗干扰方面，非离子表面活性剂对于非特异性吸附有着较好的抵抗效果。本专利技术通过以下技术方案实现：本专利技术的目的之一在于提供一种酶标抗体缓冲液，所述酶标抗体缓冲液的配方为：50mM～150mM缓冲液，5g/L～10g/L电解质，0.1％～1％防腐剂，0.1％～2％表面活性剂，2mM～20mM无机盐，0.3g/L～1g/L稳定剂，0.1％～3％阻断剂，0.1％～1％保护剂，pH值为6.4～6.6；其中，所述表面活性剂为Tetronic701、聚氧乙烯油醚中的一种或两种。进一步地，所述Tetronic701和聚氧乙烯油醚的质量比为(0.8～1.2)：(0.8～1.2)。进一步地，所述缓冲液选自：Tris、HEPES、MES、MOPSO缓冲液中的一种；所述防腐剂选自：叠氮化钠、ProClin-300中的一种。进一步地，所述保护剂为牛血清白蛋白、PEG-1000、甘氨酸中的一种；所述无机盐为MgCl2或/和ZnCl2。进一步地，所述稳定剂为4-氨基安替比林中的一种；所述阻断剂为小鼠IgG。本专利技术的目的之二在于提供一种肌酸激酶同工酶测定用试剂R1，所述试剂R1为采用所述的酶标抗体缓冲液稀释抗CK-MB抗体-碱性磷酸酶标记物获得的工作液。进一步地，所述抗CK-MB抗体-碱性磷酸酶标记物为采用碱性磷酸酶、CK-MB抗体和戊二醛进行反应获得，具体包括：将CK-MB抗体溶解于PBS溶液中，获得浓度为0.5～2mg/ml的CK-MB抗体溶液；将所述CK-MB抗体溶液中加入碱性磷酸酶，混匀后加入戊二醛，反应完全后透析除去未反应的戊二醛，获得抗CK-MB抗体-碱性磷酸酶标记物；所述碱性磷酸酶与所述抗CK-MB抗体的质量比为(8～12)：1，所述戊二醛的终浓度为0.1～0.4％。本专利技术的目的之三在于提供一种肌酸激酶同工酶测定试剂盒，所述试剂盒包括：试剂M和所述的试剂R1。进一步地，所述试剂M为磁微粒缓冲液溶解包被抗CK-MB抗体的磁微粒获得的工作液；所述包被抗CK-MB抗体的磁微粒的制备方法为：将磁珠微粒清洗重悬，获得磁微粒溶液；使用活化液将所述磁微粒溶液活化，获得活化磁微粒溶液；将所述活化磁微粒溶液包被CK-MB抗体，获得包被抗CK-MB抗体的磁微粒。本专利技术的目的之四在于提供一种肌酸激酶同工酶测定试剂盒的制备方法，采用所述的配方制得。本专利技术实施例中的一个或多个技术方案，至少具有如下技术效果或优点：本专利技术提供的一种酶标抗体缓冲液、试剂R1和肌酸激酶同工酶测定试剂盒，通过改良化学发光试剂盒中酶标抗体缓冲液，进而改良了试剂R1的配方，从而达到同时提高稳定性和抗非特异性干扰的能力；所述酶标抗体缓冲液中，本申请人通过实验发现：1,2-亚乙二次氮四丙醇与环氧乙烷和甲基环氧丙烷的聚合物(Tetronic701)与聚氧乙烯(20)油醚作为两种非离子表面活性剂，与蛋白酶之间存在特殊的相互作用，其相互作用力在恰当的条件下(即本专利技术的配方组成和pH条件下)可以提高酶的稳定性与抗非特异性吸附的能力。最终制备得到的肌酸激酶同工酶测定试剂盒，稳定性好：在2～8℃下能稳定12个月且生物活性良好；在抗干扰方面，非离子表面活性剂对于非特异性吸附有着较好的抵抗效果。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作一简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。图1是本专利技术实施例1的试剂盒测定值与Roche试剂盒测定的浓度值做相关性分析图。具体实施方式下文将结合具体实施方式和实施例，具体阐述本专利技术，本专利技术的优点和各种效果将由此更加清楚地呈现。本领域技术人员应理解，这些具体实施方式和实施例是用于说明本专利技术，而非限制本专利技术。在整个说明书中，除非另有特别说明，本文使用的术语应理解为如本领域中通常所使用的含义。因此，除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本专利技术所属领域技术人员的一般理解相同的含义。若存在矛盾，本说明书优先。除非另有特别说明，本专利技术中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等，均可通过市场购买得到或者可通过现有方法制备得到。本专利技术实施例提供的技术方案为解决上述技术问题，总体思路如下：根据本专利技术的典型实施方式之一，提供一种酶标抗体缓冲液，所述酶标抗体缓冲液的配方为：50mM～150mM缓冲本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种酶标抗体缓冲液，其特征在于，所述酶标抗体缓冲液的配方为：/n50mM～150mM缓冲液，5g/L～10g/L电解质，0.1％～1％防腐剂，0.1％～2％表面活性剂，2mM～20mM无机盐，0.3g/L～1g/L稳定剂，0.1％～3％阻断剂，0.1％～1％保护剂，pH值为6.4～6.6；/n其中，所述表面活性剂为Tetronic701、聚氧乙烯油醚中的一种或两种。/n

【技术特征摘要】
1.一种酶标抗体缓冲液，其特征在于，所述酶标抗体缓冲液的配方为：
50mM～150mM缓冲液，5g/L～10g/L电解质，0.1％～1％防腐剂，0.1％～2％表面活性剂，2mM～20mM无机盐，0.3g/L～1g/L稳定剂，0.1％～3％阻断剂，0.1％～1％保护剂，pH值为6.4～6.6；
其中，所述表面活性剂为Tetronic701、聚氧乙烯油醚中的一种或两种。


2.根据权利要求1所述的一种酶标抗体缓冲液，其特征在于，所述Tetronic701和聚氧乙烯油醚的质量比为(0.8～1.2)：(0.8～1.2)。


3.根据权利要求1所述的一种酶标抗体缓冲液，其特征在于，所述缓冲液选自：Tris、HEPES、MES、MOPSO缓冲液中的一种；所述防腐剂选自：叠氮化钠、ProClin-300中的一种。


4.根据权利要求1所述的一种酶标抗体缓冲液，其特征在于，所述保护剂为牛血清白蛋白、PEG-1000、甘氨酸中的一种；所述无机盐为MgCl2或/和ZnCl2。


5.根据权利要求1所述的一种酶标抗体缓冲液，其特征在于，所述稳定剂为4-氨基安替比林中的一种；所述阻断剂为小鼠IgG。


6.一种肌酸激酶同工酶测定用试剂R1，其特征在于，所述试剂R1为采用权利要求1-6任一所述的酶标抗体缓冲液稀释抗...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘磊，来祥兵，
申请(专利权)人：武汉生之源生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42