本发明专利技术实施例涉及免疫检测领域，具体涉及一种磁微粒化学发光法检测腺病毒IgM抗体的试剂盒及其制备方法。所述试剂盒包括：校准品、样本稀释液、酶标工作液、磁珠悬浮液和发光底物液；其中，酶标工作液包括辣根过氧化物酶标记的腺病毒抗原，磁珠悬浮液包括偶联有鼠抗人IgM抗体的磁微粒；所述腺病毒抗原包括重组抗原A、重组抗原B或重组抗原C中的一种或多种；所述重组抗原A的氨基酸序列包括SEQ ID NO.1所示序列；所述重组抗原B的氨基酸序列包括SEQ ID NO.2所示序列；所述重组抗原C的氨基酸序列包括SEQ ID NO.3所示序列。本发明专利技术实施例提供的试剂盒，提高了灵敏度和线性范围，且特异性、准确性好。
【技术实现步骤摘要】
一种磁微粒化学发光法检测腺病毒IgM抗体的试剂盒及其制备方法
本专利技术涉及免疫检测领域，具体涉及一种磁微粒化学发光法检测腺病毒IgM抗体的试剂盒及其制备方法。
技术介绍
腺病毒(adenovirus，Adv)属于腺病毒科，具有双螺旋DNA基因组。腺病毒壳体周围并没有脂质体外鞘，而是直接作用于宿主细胞。腺病毒有47种亚型对人体致病的病毒，是引起人类呼吸道和消化道感染的重要病原之一。对腺病毒进行早期预防具有重要意义。目前临床和科研用腺病毒诊断主要包括病原学诊断、分子生物学诊断及免疫学诊断等。病原学诊断主要通过细胞培养的方法分离鉴定临床尿液、血液等标本中的病原体，病原学诊断阳性率低，操作繁琐，分离周期较长，主要应用在科研教学方面，并不适合大规模，快速，准确的临床检测需求。分子生物学主要检测病原体核酸，该方法对标本的采集要求严格，如时间、部位等，并对实验技术要求较高，容易产生假阳性结果。免疫学诊断主要检测血清中的抗体，包括胶体金法、酶联免疫吸附法。胶体金法一般通过手工进行实验操作，最终通过肉眼进行定性判定，该技术灵敏度低，易出现假阳性，人为主观因素影响较大。酶联免疫吸附法的灵敏度较胶体金法有所提升，但仍然较低，并且线性范围窄，反应时间也较长，仍然不能很好满足临床的应用。公开于该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
技术实现思路
专利技术目的为解决上述技术问题，本专利技术的目的在于提供一种磁微粒化学发光法检测腺组病毒(ADV)IgM抗体的试剂盒及其制备方法。本专利技术实施例提供的试剂盒，使用磁微粒化学发光法检测腺病毒IgM抗体，与传统的胶体金法和酶联免疫吸附法相比，提高了灵敏度和线性范围，且特异性、准确性好。本专利技术的试剂盒，酶标工作液中HRP上标记的是经过特别选择的腺病毒基因工程抗原，提高了试剂盒的反应的灵敏度。本专利技术的试剂盒，磁微粒上标记的是鼠抗人IgM单克隆抗体，可提高试剂盒的特异性。解决方案为实现本专利技术目的，本专利技术实施例提供了一种试剂盒，所述试剂盒包括：校准品、样本稀释液、酶标工作液、磁珠悬浮液和发光底物液；其中，酶标工作液包括辣根过氧化物酶标记的腺病毒抗原，磁珠悬浮液包括偶联有鼠抗人IgM抗体的磁微粒；所述腺病毒抗原包括重组抗原A、重组抗原B或重组抗原C中的一种或多种；所述重组抗原A的氨基酸序列包括SEQIDNO.1所示序列；所述重组抗原B的氨基酸序列包括SEQIDNO.2所示序列；所述重组抗原C的氨基酸序列包括SEQIDNO.3所示序列。腺病毒六邻体为腺病毒主要的结构蛋白，六邻体的中和抗原决定簇主要存在于其两个环区L1、L2。这些区域在六邻体的三维结构图上位于三角形顶端(L1，L2)，在病毒颗粒表面处于易接近的位置。该区域具有较高的抗原性及很好的暴露性，是型间特异性表位。六邻体有很高的同源性，本专利技术选择具有较强抗原性和较强亲水性的六邻体蛋白序列构建腺病毒六邻体基因工程抗原来建立腺病毒检测方法。上述试剂盒在一种可能的实现方式中，编码重组抗原A的核苷酸序列包括SEQIDNO.4所示序列。上述试剂盒在一种可能的实现方式中，编码重组抗原B的核苷酸序列包括SEQIDNO.5所示序列。上述试剂盒在一种可能的实现方式中，编码重组抗原C的核苷酸序列包括SEQIDNO.6所示序列。上述试剂盒在一种可能的实现方式中，所述腺病毒抗原包括重组抗原A。选取两段具有较强的抗原性的六邻体蛋白序列，加入连接臂，将其连接在硫氧还蛋白羧基端，从而构建得到重组抗原A。上述试剂盒在一种可能的实现方式中，酶标工作液包括牛血清白蛋白(BSA)，新生牛血清，磷酸盐缓冲液(PBS)和辣根过氧化物酶标记的腺病毒抗原；可选地，酶标工作液包括下述终浓度的组分：牛血清白蛋白(BSA)2-5g/L，新生牛血清80-120mL/L，氯化钠5-10g/L，磷酸氢二钠4-8g/L，磷酸二氢钠0.4-1g/L和辣根过氧化物酶标记的腺病毒抗原0.8-1.2μg/mL；进一步可选地，酶标工作液包括下述终浓度的组分：牛血清白蛋白(BSA)2.4-2.6g/L，新生牛血清95-105mL/L，氯化钠7.5-8.5g/L，磷酸氢二钠5.5-6.0g/L，磷酸二氢钠0.55-0.65g/L和辣根过氧化物酶标记的腺病毒抗原1μg/mL。本领域通用的辣根过氧化物酶标记的腺病毒抗原(ADV-Ag-HRP)的标记比例为1mgHRP上标记1mg腺病毒抗原。本专利技术试剂盒中，ADV-Ag-HRP的终浓度以腺病毒抗原的质量计，即“ADV-Ag-HRP0.8-1.2μg/mL”指以腺病毒抗原的质量计，酶标工作液中ADV-Ag-HRP的终浓度为0.8-1.2μg/mL。上述试剂盒在一种可能的实现方式中，磁珠悬浮液包括下述终浓度的组分：偶联有鼠抗人IgM抗体的磁微粒(以磁微粒的质量计)0.8-1.2mg/mL，其中，1mg磁微粒上偶联有30-50μg的鼠抗人IgM抗体；可选地，磁珠悬浮液包括下述终浓度的组分：偶联有鼠抗人IgM抗体的磁微粒(以磁微粒的质量计)1mg/mL，其中，1mg磁微粒上偶联有40μg的鼠抗人IgM抗体。上述试剂盒在一种可能的实现方式中，磁微粒为超顺磁性微粒。上述试剂盒在一种可能的实现方式中，所述磁微粒使用碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化；可选地，每100mL磁微粒使用1mL含有浓度为4.80-5.20mg/mL的EDC和2.3-2.7mg/mL的NHS的活化剂活化，或含有浓度为4.80-5.20mg/mL的EDC和4.80-5.20mg/mL的NHS的活化剂活化，或含有浓度为4.80-5.20mg/mL的EDC和9.8-10.2mg/mL的NHS的活化剂活化；进一步可选地，每100mL磁微粒使用1mL含有浓度为4.80-5.20mg/mL的EDC和2.3-2.7mg/mL的NHS的活化剂活化。上述试剂盒在一种可能的实现方式中，校准品包括腺病毒IgM抗体；可选地，校准品包括20、40、80、160、320、640AU/mL的腺病毒IgM抗体。所述腺病毒IgM抗体为高值血清。上述试剂盒在一种可能的实现方式中，校准品用校准品稀释液稀释，所述校准品稀释液包括下述终浓度的组分：Na2HPO4·12H2O5-6g/L，NaH2PO4·2H2O0.5-0.7g/L，NaCl6-10g/L，BSA2-3g/L，pH7.1-7.3。上述试剂盒在一种可能的实现方式中，样本稀释液为pH值为7.0-7.2的生理盐水。上述试剂盒在一种可能的实现方式中，发光底物液包括发光底物液A和发光底物液B，发光底物液A包括鲁米诺或鲁米诺钠盐；化学发光底物液B包括过氧化脲。本专利技术实施例还提供了利用上述试剂盒的组分制备磁微粒化学发光法检测腺病毒IgM抗体试剂盒的制备方法。上述制备方法在一种可能的实现方式中，校准品本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：/n校准品、样本稀释液、酶标工作液、磁珠悬浮液和发光底物液；/n其中，酶标工作液包括辣根过氧化物酶标记的腺病毒抗原，/n磁珠悬浮液包括偶联有鼠抗人IgM抗体的磁微粒；/n所述腺病毒抗原包括重组抗原A、重组抗原B或重组抗原C中的一种或多种；/n所述重组抗原A的氨基酸序列包括SEQ ID NO.1所示序列；/n所述重组抗原B的氨基酸序列包括SEQ ID NO.2所示序列；/n所述重组抗原C的氨基酸序列包括SEQ ID NO.3所示序列。/n
【技术特征摘要】
1.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：
校准品、样本稀释液、酶标工作液、磁珠悬浮液和发光底物液；
其中，酶标工作液包括辣根过氧化物酶标记的腺病毒抗原，
磁珠悬浮液包括偶联有鼠抗人IgM抗体的磁微粒；
所述腺病毒抗原包括重组抗原A、重组抗原B或重组抗原C中的一种或多种；
所述重组抗原A的氨基酸序列包括SEQIDNO.1所示序列；
所述重组抗原B的氨基酸序列包括SEQIDNO.2所示序列；
所述重组抗原C的氨基酸序列包括SEQIDNO.3所示序列。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，编码重组抗原A的核苷酸序列包括SEQIDNO.4所示序列；
和/或，编码重组抗原B的核苷酸序列包括SEQIDNO.5所示序列；
和/或，编码重组抗原C的核苷酸序列包括SEQIDNO.6所示序列。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述腺病毒抗原包括重组抗原A。
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述磁微粒使用碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺活化；可选地，每100mL磁微粒使用1mL含有浓度为4.80-5.20mg/mL的碳二亚胺和2.3-2.7mg/mL的N-羟基琥珀酰亚胺的活化剂活化，或浓度为4.80-5.20mg/mL的碳二亚胺和4.80-5.20mg/mL的N-羟基琥珀酰亚胺的活化剂活化，或浓度为4.80-5.20mg/mL的碳二亚胺和9.8-10.2mg/mL的N-羟基琥珀酰亚胺的活化剂活化；进一步可选地，每100mL磁微粒使用1mL含有浓度为4.80-5.20mg/mL的碳二亚胺和2.3-2.7mg/mL的N-羟基琥珀酰亚胺的活化剂活化。
5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，酶标工作液包括下述终浓度的组分：牛血清白蛋白2-5g/L，新生牛血清80-120mL/L，氯化钠5-10g/L，磷酸氢二钠4-8g/L，磷酸二氢钠0.4-1g/L和辣根过氧化物酶标记的腺病毒抗原0.8-1.2μg/mL；
和/或，磁珠悬浮液包括下述终浓度的组分：偶联有鼠抗人IgM抗体的磁微粒(以磁微粒的质量计)0.8-1.2mg/mL，其中，1mg磁微粒上偶联有30-50μg的鼠抗人IgM抗体；
和/或，磁微粒为超顺磁性微粒。
【专利技术属性】
技术研发人员：徐悦，
申请(专利权)人：北京贝尔生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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