用于治疗实体瘤的靶向鹅膏毒素缀合物制造技术

本发明专利技术涉及式(I)的包含鹅膏毒素的鹅膏毒素‑连接基构建体，其用于制备用于治疗实体瘤的结合部分‑毒素缀合物，其中：R

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗实体瘤的靶向鹅膏毒素缀合物专利
本申请涉及用于治疗实体瘤的靶向鹅膏毒素缀合物。专利技术背景实体瘤的治疗是一个持续的挑战，在过去的几十年中进展甚微。尽管最近已经开发了相当多新的治疗方式，但是仍然需要进一步的改进，以增加患有实体瘤的患者的存活率并改善其生活质量。一种有前途的治疗方式是抗体药物缀合物，其中具有杀死细胞能力的高毒性实体与使毒素穿梭到疾病部位的靶结合实体偶联。申请人在过去已经开发了所谓的ATAC，即，抗体靶向的鹅膏蕈碱缀合物，其中鹅膏蕈碱毒素与高度靶特异性抗体偶联。鹅膏蕈碱是八个氨基酸的双环肽，其天然存在于蘑菇的鹅膏属的数个物种中，一种是死帽蕈(鬼笔鹅膏(Amanitaphalloides))。鹅膏蕈碱具有以下一般结构：鹅膏毒素以非常高的亲和力与RNA聚合酶II结合，导致分裂细胞和静止细胞的蛋白质合成急剧下降，并最终导致细胞凋亡(Cochet-Meilhac和Chambon，1974；Cochet-Meilhac等人，1974)。α-鹅膏蕈碱仅与RNA聚合酶III轻微结合，并显示出与RNA聚合酶I没有结合。当与RNA聚合酶II结合时，鹅膏蕈碱抑制酶在RNA和DNA上的易位，因此转录速率会减慢1000倍以上，最终导致细胞凋亡。当前正在开发的一种ATAC称为HDP101，并且公开在PCT申请PCT/EP2017/084431中。它包含鹅膏毒素，该鹅膏毒素具有6′-脱氧位置的氨基酸4(上图中＝R4)；和S-脱氧位置的氨基酸8。连接基是PABValAla连接基。该鹅膏毒素经由氨基酸1和与其缀合的可裂解连接基与称为J22.9-ISY的抗BCMA结合抗体缀合。HDP101中使用的鹅膏毒素连接基缀合物的结构称为30.2115，并示于本文下表中。该ATAC在恶性血液病，特别是淋巴瘤的治疗中显示出非常好的效力。这种恶性血液病在本文中也称为“液体瘤”。但是，申请人已经意识到，在实体瘤的治疗方面仍然有改进的空间，实体瘤是比液体瘤更具挑战性的ATACa的靶标。因此，本专利技术的一个目的是提供实体瘤的新治疗选择。本专利技术的另一个目的是改善ATAC在实体瘤中的效力。这些和其他目的通过根据本专利技术的独立权利要求的方法和手段来实现。从属权利要求涉及特定实施方案。专利技术概述本申请提供用于治疗实体瘤的靶向鹅膏毒素缀合物。下面将详细讨论本专利技术及其特征的一般益处。附图简要说明以下列表给出附图及其内容的概述：专利技术详述在详细描述本专利技术之前，应当理解，本专利技术不限于所描述的设备的特定组成部分或所描述的方法的过程步骤，因为这样的设备和方法可以变化。还应理解，本文所使用的术语仅出于描述特定实施方案的目的，而无意于进行限制。必须注意，如说明书和所附权利要求书中所使用的，单数形式“a”，“an”和“the”包括单数和/或复数所指对象，除非上下文另外明确指出。此外要理解的是，在给出由数值界定的参数范围的情况下，该范围被认为包括这些限制值。还应理解，本文中所公开的实施方案并不意味着应理解为彼此不相关的单个实施方案。关于一个实施方案讨论的特征也旨在公开结合本文中所示的其他实施方案。如果在一种情况下，特定特征没有被一个实施方案公开，但是被另一个实施方案公开，则本领域技术人员会理解这不一定意味着所述特征没有意图被所述其他实施方案公开。本领域技术人员会理解，针对其他实施方案也公开所述特征是本申请的主旨，但是仅仅为了清楚的目的并且将说明书保持在可管理的大小，这尚未进行。此外，本文中引用的现有技术文件的内容通过援引加入。尤其是对于公开标准或常规方法的现有技术文件而言。在那种情况下，通过援引加入的主要目的是提供足够的使能公开，并避免冗长的重复。根据第一方面，提供式(I)的包含鹅膏毒素的鹅膏毒素-连接基构建体其中：·R1和R2各自为-OH·R3是NH2，或带有用于将所述鹅膏毒素连接至靶结合部分的反应性基团Y的连接基，·R4是H，或带有用于将所述鹅膏毒素连接至靶结合部分的反应性基团Y的连接基，·R5不存在或为＝O，其中R3和R4不能相同。所述构建体提供用于制备用于治疗实体瘤的结合部分-毒素缀合物。这些构建体的关键特征之一是在分子的氨基酸4(Trp)的吲哚环中4位上的-OR4取代基。专利技术人令人惊讶地表明，包含这样的鹅膏毒素连接基构建体的结合部分-毒素缀合物对实体瘤或其中包含的细胞具有优异的效力。当与结构相似的结合部分-毒素缀合物(在4位上不具有-OR4，而是具有氢取代基)相比时特别如此。有趣的是，如在PCT申请PCT/EP2017/084431中所公开的，如果两个变体都具有相当的效力，则在液体瘤的治疗中不可观察到这种明显的差异。如本文所用，术语“实体瘤”涉及影响除了血液、骨髓和淋巴系统之外的身体组织或器官的所有癌症类型。如本文所用，术语“液体瘤”涉及在患者的体液(例如血液，骨髓或淋巴)中发生的任何癌症或恶性肿瘤，包括白血病、淋巴瘤和骨髓瘤。重要的是要理解，-OR4可以是-OH或-O-连接基。特别地，如果连接基是可裂解连接基或自降解(selfimmolative)连接基，则所述连接基会随着时间而降解，并且降解的最后步骤将会导致-O-连接基键水解，从而释放-OH。由于这个原因，裂解/降解会提供6-OH-Trp。根据一个实施方案，所述连接基是可裂解连接基和/或自降解连接基。如本文所用，术语“可裂解连接基”涉及通常在细胞内条件下易于裂解的连接基。合适的可裂解连接基包括，例如，可被细胞内蛋白酶诸如溶酶体蛋白酶或核内体蛋白酶理解的肽连接基。在示例性实施方案中，所述连接基可以是二肽连接基，诸如缬氨酸-瓜氨酸(val-cit)、缬氨酸-丙氨酸(val-ala)、苯丙氨酸-赖氨酸(phe-lys)连接基，或马来酰亚胺基己酸-缬氨酸-瓜氨酸-对氨基苄氧基羰基(mc-Val-Cit-PABA)连接基。这样的连接基例如公开在美国专利号6214345中。另一连接基是磺基琥珀酰亚胺基-44N-马来酰亚胺基甲基]环己烷-1-羧酸酯(smcc)。磺基-smcc缀合是通过马来酰亚胺基团进行的，所述基团与巯基(硫醇，-SH)反应，而其磺基-NHS酯则对伯胺(如赖氨酸和蛋白质或肽N端所存在的)具有反应性。又一种连接基是马来酰亚胺基己酰基(mc)。其他合适的连接基包括在特定pH或pH范围下可水解的连接基，诸如腙连接基。其他合适的可裂解连接基包括二硫化物连接基。连接基可以与抗体共价结合至使得抗体必须在细胞内降解以便药物释放的程度，例如mc连接基等。EP3130587中公开了包括环状亚苄基缩醛连接基的其他pH敏感性可裂解连接基。如本文所用，术语“自降解连接基”涉及在发生初始反应后自发降解的连接基。自降解连接基的一个实例是对氨基苄醇(PAB)，其通常经由芳香胺基团与可裂解二肽如缬氨酸-瓜氨酸(val-cit)或缬氨酸-丙氨酸(va本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.式(I)的包含鹅膏毒素的鹅膏毒素-连接基构建体，其用于制备用于治疗实体瘤的结合部分-毒素缀合物：/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180413 EP 18167265.01.式(I)的包含鹅膏毒素的鹅膏毒素-连接基构建体，其用于制备用于治疗实体瘤的结合部分-毒素缀合物：



其中：
·R1和R2各自为-OH
·R3是NH2，或带有用于将所述鹅膏毒素连接至靶结合部分的反应性基团Y的连接基，
·R4是H，或带有用于将所述鹅膏毒素连接至靶结合部分的反应性基团Y的连接基，
·R5不存在或为＝O，
其中R3和R4不能相同。


2.根据权利要求1所述的鹅膏毒素-连接基构建体，其中所述连接基是可裂解连接基和/或自降解连接基。


3.根据前述权利要求中任一项所述的鹅膏毒素-连接基构建体，其中所述连接基可被选自下列中的至少一种物质裂解：
·半胱氨酸蛋白酶
·金属蛋白酶
·丝氨酸蛋白酶
·苏氨酸蛋白酶，和/或
·天冬氨酸蛋白酶。


4.根据前述权利要求中任一项所述的鹅膏毒素-连接基构建体，其中所述连接基包含选自下列的基序：
·ValAla
·ValCit
·ValLys
·ValArg
·PheLysGlyProLeuGly
·AlaAlaProVal
·β-葡糖苷酸，和/或
·β-半乳糖苷。


5.根据前述权利要求中任一项所述的鹅膏毒素-连接基构建体，其中所述连接基中的所述反应性基团Y为选自下列中的至少一种：








6.根据前述权利要求中任一项所述的鹅膏毒素-连接基构建体，其中连接基R3包含对氨基苯ValAla马来酰亚胺基丙基基序





7.根据权利要求1所述的鹅膏毒素-连接基构建体，其中所述连接基是不可裂解连接基。


8.根据前述权利要求中任一项所述的鹅膏毒素-连接...

【专利技术属性】
技术研发人员：C·米勒，W·西蒙，C·卢茨，S·维尔纳西蒙，T·黑希勒，M·库尔克，A·帕尔，
申请(专利权)人：海德堡医药研究有限责任公司，
类型：发明
国别省市：德国;DE