一种血浆中烟碱及其主要代谢物的手性分析方法技术

本发明专利技术涉及一种血浆中烟碱及其主要代谢物的手性分析方法，该方法包括如下步骤：(1)取血浆加入内标萃取溶液以沉淀蛋白，振荡，离心，得上清液；(2)取步骤(1)得到的上清液进行高效液相色谱‑串联质谱(HPLC‑MS/MS)分析；(3)采用内标标准曲线法定量计算样品中目标物的含量。该方法实现了烟碱及其主要代谢物的同时手性分析，具有通量高、分离度好、操作简便、灵敏度高、回收率及重复性好等优点，适合血浆样本中烟碱及其主要代谢物的手性分析。

【技术实现步骤摘要】
一种血浆中烟碱及其主要代谢物的手性分析方法
本专利技术属于化学分析
，具体涉及一种血浆中烟碱及其主要代谢物的手性分析方法。
技术介绍
烟碱是烟草及烟草制品具有潜在致瘾性的决定性因素和主要药理活性物质，其在动物及人体内可以很快地代谢成各种产物，主要代谢产物有可替宁、降可替宁、可替宁氮氧化物等。烟碱、可替宁、降可替宁和可替宁氮氧化物都有两个对映异构体：S-烟碱、R-烟碱，S-可替宁、R-可替宁，S-降可替宁、R-降替宁和S-可替宁氮氧化物、R-可替宁氮氧化物。对映异构体虽然分子式相同，但结构不同，因此其代谢机理和生物活性一般具有较大的差异。生物样本中对映异构体的手性分析是研究目标物药理学及毒性等生理作用的关键，因此，建立血浆样本中烟碱及其代谢物的高通量、高灵敏度、高选择性的手性分离方法对烟碱的代谢、积累及吸烟与健康研究具有重要意义。目前，烟碱及其代谢物的手性分离的方法主要有液相色谱(LC)法、液相色谱-质谱联用法(LC-MS/MS)、超临界流体色谱(SFC)法、气相色谱-质谱联用法(GC-MS)法、毛细管电泳(CE)法等，而液相色谱-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种血浆中烟碱及其主要代谢物的手性分析方法，该方法包括如下步骤：/n(1)取血浆加入内标萃取溶液以沉淀蛋白，振荡，离心，得上清液；/n(2)取步骤(1)得到的上清液进行高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)分析；/n(3)采用内标标准曲线法定量计算样品中目标物的含量。/n

【技术特征摘要】
1.一种血浆中烟碱及其主要代谢物的手性分析方法，该方法包括如下步骤：
(1)取血浆加入内标萃取溶液以沉淀蛋白，振荡，离心，得上清液；
(2)取步骤(1)得到的上清液进行高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)分析；
(3)采用内标标准曲线法定量计算样品中目标物的含量。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述内标萃取溶液为各内标的甲醇溶液；
优选地，在步骤(1)中，所述内标萃取溶液浓度为20～50ng/mL；
优选地，在步骤(1)中，所述离心的温度为2～5℃；
优选地，在步骤(1)中，所述离心的速度为10000～15000rpm。


3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述高效液相色谱-串联质谱分析的色谱条件包括：色谱柱为ChiralpakIG-3色谱柱(250×4.6mm×3μm)联合保护柱(10mm×4.0mm×3μm)。


4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述高效液相色谱-串联质谱分析的色谱条件还包括：柱温为25℃；流动相为质量分数为0.2％的甲酸铵/甲醇溶液；流速为0.5mL/min；运行总时间为40min；进样体积为10μL。


5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，质谱条件为：离子源：电喷雾离子源；离子化方式：ESI(+)；检测模式：MRM模式；离子源温度(TEM)：500℃；电喷雾电压(IS)：5500V；碰撞气(CAD)：4.8×104Pa；气帘气(CUR)：2.4×105Pa；离子源气流(GS1)：3.4×105Pa；离子源气流(GS2)：4.1×105Pa；入口电压(EP)：10V；射出电压(CXP)：10V；
优选地，在步骤(2)中，目标化合物和内标的MRM质谱检测参数如下：






注：“*”表示定量离子。


6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述内标标准曲线法为：配制含有目标物的系列标准工作溶液，加入同位素内标(烟碱-d3、可替宁-d3、可替宁氮氧化物-d3、降可替宁-d4)，以各标准工作溶液中目标物与内标的定量离子峰面积比为纵坐标，以各标准工作溶液中目标物的含量为横坐标制作标准工作曲线；将步骤...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩书磊，金光祥，陈欢，王红娟，付亚宁，郭溪香，刘彤，侯宏卫，胡清源，
申请(专利权)人：国家烟草质量监督检验中心，
类型：发明
国别省市：河南;41