【技术实现步骤摘要】
一种银杏达莫注射制剂的检测方法
本专利技术属于药品领域，具体涉及一种银杏达莫注射制剂的检测方法。
技术介绍
心脑血管疾病如冠心病、脑血栓、高血压、脑梗塞等均是当今世界上最常见和危害最大的疾病之一，也是危害我国人民健康的常见病、多发病，已成为人口死亡的主要原因之一；据报告，近年来的发病率有逐年增高趋势，而且中、青年患者不断增加。银杏达莫注射液是由银杏叶提取物与双嘧达莫制作而成的，收载于化学药品地方标准上升国家标准（第一册），标准号：WS-10001-(HD-0087)-2002。该产品能抗血小板聚集，属于冠状动脉扩张药，适用于预防和治疗冠心病、血栓栓塞性疾病，其中银杏叶提取物中含有黄酮类、萜类、酚类等活性成分，能起到改善心肌和脑组织代谢、增加冠状动脉及脑血管血流，改善心肌和脑组织等血供的作用，对于治疗心脑血管疾病如冠心病、心绞痛、心律失常、脑血栓、老年性痴呆等有较好的疗效。本专利技术在前期的研究中，在质量标准的基础上逐渐增加了一些检测指标，同时优化部分检测环节中试剂、检测手段或者是样品的制备等过程。比如CN2005102006...
【技术保护点】
1.一种银杏达莫注射制剂的检测方法，所述银杏达莫注射制剂是由银杏叶提取物和双嘧达莫制备而成的注射液，所述检测方法包含性状、鉴别、检查、指纹图谱、含量测定中的部分或全部，所述性状为黄色至棕黄色澄明液体；所述鉴别为盐酸镁粉反应鉴别，双嘧达莫化学反应定性鉴别，双嘧达莫、总黄酮醇苷、萜类内酯的色谱鉴别、银杏叶提取物薄层色谱鉴别中的部分或全部；所述检查为pH值检查、溶液的颜色、黄酮苷元峰面积比检查、炽灼残渣检查、总固体检查、5-羟甲基糠醛检查、总银杏酸检查、重金属及有害元素残留量检查、蛋白质、鞣质、草酸盐、树脂、钾离子、热原检查以及其他注射剂项目检查中的部分或全部；所述指纹图谱是采用...
【技术特征摘要】
1.一种银杏达莫注射制剂的检测方法，所述银杏达莫注射制剂是由银杏叶提取物和双嘧达莫制备而成的注射液，所述检测方法包含性状、鉴别、检查、指纹图谱、含量测定中的部分或全部，所述性状为黄色至棕黄色澄明液体；所述鉴别为盐酸镁粉反应鉴别，双嘧达莫化学反应定性鉴别，双嘧达莫、总黄酮醇苷、萜类内酯的色谱鉴别、银杏叶提取物薄层色谱鉴别中的部分或全部；所述检查为pH值检查、溶液的颜色、黄酮苷元峰面积比检查、炽灼残渣检查、总固体检查、5-羟甲基糠醛检查、总银杏酸检查、重金属及有害元素残留量检查、蛋白质、鞣质、草酸盐、树脂、钾离子、热原检查以及其他注射剂项目检查中的部分或全部；所述指纹图谱是采用HPLC法对制剂中银杏叶提取物及双嘧达莫所属主要化学成份进行色谱表征；所述含量测定为双嘧达莫、总黄酮醇苷、芦丁、山柰酚-3-O-芸香糖苷、水仙苷以及萜类内酯含量测定中的部分或全部。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述含量测定具体方法为：
所述双嘧达莫含量测定方法是照中国药典高效液相色谱法测定，具体方法为：
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇或乙腈：pH值为3～6的0.1～1%磷酸二氢钠溶液＝80-50：20-50为流动相；检测波长为250～300nm；
对照品溶液制备取双嘧达莫对照品适量，精密称定，加甲醇溶液制成对照品溶液；
供试品溶液制备精密量取注射液1～2ml，置25～50ml量瓶中，加甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液；
测定法分别精密量取对照品溶液及供试品溶液各10～20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算双嘧达莫含量；
所述总黄酮醇苷含量测定方法是照中国药典高效液相色谱法测定，具体方法为：
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇或乙腈：0.1～0.5%磷酸溶液＝20-60：80-40为流动相；检测波长300～400nm；
对照品溶液的制备取槲皮素对照品、山柰素对照品、异鼠李素对照品适量，精密称定，加甲醇制成对照品溶液；
供试品溶液的制备精密量取注射液5～10ml，加甲醇：33%盐酸溶液＝6：1的混合溶液20～35ml，置水浴上加热回流60～90分钟，迅速冷却至室温，转移至50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5～10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按下式计算总黄酮醇苷含量：
总黄酮醇苷含量=（槲皮素含量+山柰素含量+异鼠李素含量）×2.51；
所述芦丁、山柰酚-3-O-芸香糖苷、水仙苷的含量测定方法是照中国药典高效液相色谱法测定，具体方法为：
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇或乙腈∶0.1～0.5％磷酸溶液＝10-40∶90-60为流动相；检测波长为300～400nm；
对照品溶液的制备取芦丁对照品、山柰酚-3-O-芸香糖苷对照品、水仙苷对照品适量，精密称定，加甲醇溶液溶解，作为对照品溶液；
供试品溶液的制备取注射液，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；
测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5～10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，分别计算芦丁、山柰酚-3-O-芸香糖苷、水仙苷含量；
所述萜类内酯含量测定方法是照中国药典高效液相色谱法测定，具体方法为：
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以正丙醇：四氢呋喃：水＝1:10-20:89-79为流动相；用蒸发光散射检测器检测；
对照提取物溶液的制备取银杏叶总内酯对照提取物适量，精密称定，加甲醇制成对照提取物溶液；
供试品溶液的制备精密量取注射液15-25ml，加2％盐酸溶液2滴，用乙酸乙酯振摇提取5次，第1次20～30ml，其余4次每次15～25ml，合并乙酸乙酯提取液，用5％醋酸钠溶液15～30ml洗涤，分取醋酸钠液，再用乙酸乙酯10～30ml洗涤；合并乙酸乙酯提取液及洗涤液，用水洗涤2次，每次10～30ml，分取水液，用乙酸乙酯10～30ml洗涤，合并乙酸乙酯液，回收溶剂至干，残渣用甲醇溶解并转移至2～5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
测定法分别精密吸取对照提取物溶液3～5μl、10～20μl，供试品溶液5～10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，用外标两点法对数方程分别计算白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C的含量。
3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于：所述含量测定具体方法为：
所述双嘧达莫含量测定方法是照中国药典高效液相色谱法测定，具体方法为：
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇：0.1%磷酸二氢钠溶液＝75：25为流动相，所述0.1%磷酸二氢钠溶液预先用1→3的磷酸溶液调pH值至4.6；流速为每分钟1.0ml；检测波长为290nm；理论板数按双嘧达莫峰计算应不低于2000；
对照品溶液制备取双嘧达莫对照品适量，精密称定，加80%甲醇溶液制成每1ml中含15μg的溶液，作为对照品溶液；
供试品溶液制备精密量取注射液2ml，置50ml量瓶中，加80%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液；
测定法分别精密量取对照品溶液及供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算双嘧达莫含量；
所述总黄酮醇苷的含量测定方法是照中国药典高效液相色谱法测定，具体方法为：
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇：0.4%磷酸溶液＝50：50为流动相；检测波长360nm；理论塔板数按槲皮素峰计算应不低于2500；
对照品溶液的制备取槲皮素对照品、山柰素对照品、异鼠李素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含槲皮素0.03mg、山柰素0.025mg和异鼠李素0.01mg的混合溶液，摇匀，即得对照品溶液；
供试品溶液的制备精密量取注射液10ml，加甲醇：33%盐酸溶液＝6：1的混合溶液35ml，置水浴上加热回流60分钟，迅速冷却至室温，转移至50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按下式计算总黄酮醇苷含量：
总黄酮醇苷含量=（槲皮素含量+山柰素含量+异鼠李素含量）×2.51；
所述芦丁、山柰酚-3-O-芸香糖苷、水仙苷含量测定方法是照中国药典高效液相色谱法测定，具体方法为：
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈∶0.4％磷酸溶液＝16∶84为流动相；流速为每分钟1.0ml；柱温为30℃；检测波长为360nm；理论塔板数按芦丁峰计算应不低于5000；
对照品溶液的制备取芦丁对照品、山柰酚-3-O-芸香糖苷对照品、水仙苷对照品适量，精密称定，加80%甲醇溶解制成每1ml含芦丁0.08mg、山柰酚-3-O-芸香糖苷0.07mg和水仙苷0.06mg的混合溶液，摇匀，即得对照品溶液；
供试品溶液的制备取注射液，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，分别计算芦丁、山柰酚-3-O-芸香糖苷、水仙苷含量；
所述萜类内酯的含量测定方法是照中国药典高效液相色谱法测定，具体方法为：
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以正丙醇：四氢呋喃：水＝1:15:84为流动相；用蒸发光散射检测器检测；理论板数按白果内酯峰计算应不低于2500；
对照提取物溶液的制备取银杏叶总内酯对照提取物适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含2.5mg的溶液，即得对照提取物溶液；
供试品溶液的制备精密量取注射液20ml，加2％盐酸溶液2滴，用乙酸乙酯振摇提取5次，第1次20ml，其余4次每次15ml，合并乙酸乙酯提取液，用5％醋酸钠溶液20ml洗涤，分取醋酸钠液，再用乙酸乙酯10ml洗涤；合并乙酸乙酯提取液及洗涤液，用水洗涤2次，每次20ml，分取水液，用乙酸乙酯10ml洗涤，合并乙酸乙酯液，回收溶剂至干，残渣用甲醇溶解并转移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
测定法分别精密吸取对照提取物溶液3μl、10μl，供试品溶液5～10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，用外标两点法对数方程分别计算白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C的含量。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述指纹图谱检测方法是照中国药典高效液相色谱法测定，具体方法为：
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈或甲醇为流动相A，以0.1～0.5%磷酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为200～400nm；所述梯度洗脱条件为：
0-5min，流动相A8→12%，流动相B92→88%；
5-25min，流动相A12→17%，流动相B88→83%；
25-35min，流动相A17%，流动相B83%；
35-45min，流动相A17→23%，流动相B83→77%；
45-60min，流动相A23→25%，流动相B77→75%；
60-75min，流动相A25→60%，流动相B75→40%；
参照物溶液的制备取芦丁对照品适量，精密称定，加甲醇溶解，即得对照品溶液；
供试品溶液的制备取注射液，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5～10μl，注入液相色谱仪，测定，记录75分钟的色谱图，即得供试品指纹图谱；
供试品指纹图谱中，应呈现与参照物色谱峰保留时间相同的色谱峰；按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度。
5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于：所述色谱条件与系统适用性试验中，流动相A为乙腈，流动相B为0.4%磷酸溶液；流速为每分钟1.0ml；柱温为30℃；检测波长为254nm；理论板数按芦丁峰计算应不低于10000；所述参照物溶液的浓度每1ml含芦丁0.1mg的甲醇溶液；所述供试品指纹图谱应有15个共有峰，其中的4号峰为喋豆素峰，6号峰为芦丁峰，9号峰为槲皮素3-O-葡萄糖基（1→2）鼠李糖苷峰，10号峰为山柰酚-3-O-芸香糖苷峰，11号峰为水仙苷峰，13号峰为3-O-{2-O-[6-O-(对羟基-反-香豆酰)-葡萄糖基]-鼠李糖基}槲皮素峰，14号峰为3-O-{2-O-[6-O-(对羟基-反-香豆酰)-葡萄糖基]-鼠李糖基}山奈酚峰，15号峰为双嘧达莫峰；共有峰匹配，按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算，供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度不得低于0.90。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述银杏叶提取物薄层色谱鉴别方法为：
取注射液20～100ml，通过大孔吸附树脂柱，用水200～300ml洗脱，弃去水洗液，再用乙醇200～300ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加正丁醇10～30ml，置水浴中温浸15～30分钟并时时振摇，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1～3ml使溶解，作为供试品溶液；取银杏叶对照提取物0.1～0.5g，加正丁醇10～30ml，置水浴中温浸15～30分钟并时时振摇，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1～3ml使溶解，作为对照提取物溶液；照中国药典薄层色谱法试验，取供试品溶液、对照提取物溶液各1～5µl，分别点于同一含4％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯：丁酮：甲酸：水＝4-6：2-4：0.5-2：0.5-2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3％～5%三氯化铝乙醇溶液；置365nm波长的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照提取物色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于：所述的银杏叶提取物薄层色谱鉴别的方法为：
取注射液50ml，通过D101型大孔吸附树脂柱，用水250ml洗脱，弃去水洗液，再用乙醇250ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加正丁醇15ml，置水浴中温浸15分钟并时时振摇，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；取银杏叶对照提取物0.2g，加正丁醇15ml，置水浴中温浸15分钟并时时振摇，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为对照提取物溶液；照中国药典薄层色谱法试验，取供试品溶液、对照提取物溶液各1µl，分别点于同一含4％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯：丁酮：甲酸：水＝5：3：1：1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3％三氯化铝乙醇溶液；置365nm波长的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照提取物色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述黄酮苷元峰面积比检查方法为：按含量测定项下的总黄酮醇苷色谱计算，槲皮素与山柰素的峰面积比应为0.8～1.2，异鼠李素与槲皮素的峰面积比值应大于0.15；所述炽灼残渣检查方法为：精密量取注射液10ml，蒸干，照中国药典炽灼残渣检查法检查，每1ml不得过1.0mg；所述总固体检查方法为：精密量取注射液10ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干后，精密加入经105℃干燥至恒重的硅藻土2.5～4.0g，搅拌，置105℃干燥3小时，移置干燥器中，冷却30分钟，迅速精密称定重量，扣除加入的硅藻土量，计算，每1ml注射液含总固体应为0.20～0.30g；所述重金属及有害元素残留量检查是照中国药典铅、镉、砷、汞、铜测定法测定，每1ml注射液含铅不得过0.24μg，含镉不得过0.06μg，含砷不得过0.12μg，含汞不得过0.04μg，含铜不得过3.00μg；所述5-羟甲基糠醛检查方法为：照中国药典高效液相色谱法测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇或乙腈：0.1～0.5%冰醋酸＝2-20：98-80为流动相，检测波长为250～350nm；取5-羟甲基糠醛对照品适量，精密称定，加甲醇制成对照品溶液；取注射液，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5～10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；计算5-羟甲基糠醛含量；所述总银杏酸检查方法为：照中国药典高效液相色谱法测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以含0.1～0.5%三氟乙酸的乙腈或甲醇为流动相A，含0.1～0.5%三氟乙酸的水为流动相B，进行梯度洗脱，检测波长为250～350nm；所述梯度洗脱条件为：
0-30min，流动相A75→90%，流动相B25→10%；
30-35min，流动相A90%，流动相B10%；
25-35min，流动相A17%，流动相B83%；
35-36min，流动相A90→75%，流动相B10→25%；
36-45min，流动相A75%，流动相B25%；
取白果新酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成照品溶液，另取总银杏酸对照品适量，用甲醇制成定位用...
【专利技术属性】
技术研发人员：窦啟玲，杨青波，陆煜玫，段毅，
申请(专利权)人：贵州益佰制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：贵州;52
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