用于人甲状腺免提取癌基因突变检测试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术公开了分子生物技术领域的一种用于人甲状腺免提取癌基因突变检测试剂盒及检测方法，本试剂盒采用特异性的核酸释放剂及其与之匹配的PCR反应液，结合多重PCR捕获技术和NGS测序技术，用于定性检测甲状腺结节穿刺活检细胞学不确定的新鲜组织样本中BRAF、TERT、RET、TP53、NRAS、HRAS、KRAS、PIK3CA基因的多种变异，通过多基因多位点的检测，并结合临床病理分析结果，为甲状腺癌的辅助诊断和治疗提供帮助。

【技术实现步骤摘要】
用于人甲状腺免提取癌基因突变检测试剂盒及检测方法
本专利技术涉及分子生物
的一种用于人甲状腺免提取癌基因突变检测试剂盒及检测方法。
技术介绍
甲状腺癌是常见的头颈部恶性肿瘤,占全身恶性肿瘤的1.0％～1.5％，目前甲状腺癌主要通过临床触诊、超声、核素显像及细针穿刺细胞活检等方法综合评价，在一定程度上可以提高甲状腺癌诊断的准确性,但仍有10％～30％不能明确诊断。国内外甲状腺癌指南均建议，甲状腺结节经甲状腺结节细针穿刺细胞学活检(FNAB)检测尚不能确诊的，可利用分子标志物检测以提高诊断准确性，如BRAF、RAS、RET/PTC、PAX8/PPARγ等突变检测已经是常规分子检测项目，作为FNAB的重要补充，为甲状腺癌的诊断和预后判断提供了重要的帮助。然而，目前临床常用的组织穿刺针头为22～25G，其中25G的外径仅有0.5mm，其可用的细胞仅仅只有几百个，无法满足市场上现有的核酸检测试剂盒的要求，因此急需一款起始量极低，同时灵敏度高的甲状腺结节穿刺组织样本检测试剂盒。目前市场上的检测试剂盒基本是先对穿刺样本提取再建库，此方法会加重核酸提取过本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种甲状腺癌基因突变检测点，其特征在于：所述甲状腺癌基因变异位点如表1检测基因及位点所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种甲状腺癌基因突变检测点，其特征在于：所述甲状腺癌基因变异位点如表1检测基因及位点所示。


2.一种用于人甲状腺免提取癌基因突变检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括核酸释放剂、PCR反应液、特异性扩增引物、纯化磁珠、NGS特异引物接头和高保真扩增试剂。


3.一种用于人甲状腺免提取癌基因突变检测试剂盒及检测方法，其特征在于：检测流程包括以下步骤：
1)获取甲状腺结节穿刺组织样本，离心后加入核酸释放剂，室温放置10分钟后，加入核酸释放剂匹配的配置好的PCR反应液和特异性扩增引物进行扩增，应用磁珠片选扩增产物，得到第一轮PCR产物；所述核酸释放剂的组分为300-500mmol/L的NaOH，0.1-2mol/L甲酰胺；PCR扩增缓冲液组成为50mmol/LTris-HCl，30mmol/...

【专利技术属性】
技术研发人员：包文静，王宝霞，高伙妮，何文天，张志帅，
申请(专利权)人：上海睿璟生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31