本发明专利技术提供了PLCE1‑AS2抑制剂在制备治疗乳腺癌的药物组合物中的应用。进一步，本发明专利技术还公开了一种治疗乳腺癌的药物组合物。本发明专利技术首次发现了PLCE1‑AS2在乳腺癌细胞中表达上调。本发明专利技术同时公开了PLCE1‑AS2抑制剂在乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭中起着重要的作用，为乳腺癌的治疗提供新的治疗方法。
【技术实现步骤摘要】
PLCE1-AS2在乳腺癌中的应用
本专利技术涉及生物医药研究领域，特别是涉及PLCE1-AS2在乳腺癌中的应用。
技术介绍
乳腺癌(breastcancer)是女性最普遍的恶性肿瘤之一，通常发生在乳腺上皮组织。据资料统计，乳腺癌的发病率占全身各种恶性肿瘤的7-10％。全球每年有135万新增加的乳腺癌，其中有42万死亡，每年递增是2％。中国每年有4万多妇女死于本病，虽然不是乳腺癌高发国家，但是其增长速度远远高于其他国家。它的发病影响因素较多，遗传易感性和基因与环境相互作用均与其发生、进展和转移密切相关。虽然通过之前的研究已经发现了多种致癌基因和抑癌基因，使乳腺癌的诊断率有所提高，治疗效果有所改善，但并不能完全解决问题。因此需要对肿瘤发生的分子机制深入了解，为乳腺癌患者的治疗提供新的有效的治疗方法。在没有完全找到乳腺癌的发病原因之前，乳腺癌的早诊断、早治疗，是降低乳腺癌死亡率的关键。非编码RNA根据转录本长度不同又分为两类，一类是长度小于200个核苷酸的短链非编码RNA，包括微小RNA(miRNAs)、小干扰RNA(siRNAs)和Piwi相关RNA(piRNAs)。另一类长度超过200核苷酸称为长链非编码RNA(longnon-codingRNA，1ncRNA)，其最初被视为“转录噪声”，不具备生物学功能，但越来越多的证据表明lncRNA可以在转录水平、转录后水平以及表观遗传学层面调控基因的表达，从而参与人体的多种生理和病理过程，包括癌症转移、侵袭、细胞分化及凋亡等。随着对lncRNA的研究增多，越来越多的lncRNA在多种肿瘤中被发现，然而目前在乳腺癌中lncRNA的研究仍处于起步阶段，在乳腺癌发生发展中作用机制尚不明确，有待进一步研究。寻找与乳腺癌发生发展相关的lncRNA对乳腺癌的机制研究以及临床上的诊断和治疗具有重要的意义。
技术实现思路
鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术提供了一种与乳腺癌发生发展相关的标志物PLCE1-AS2，并提供PLCE1-AS2抑制剂为乳腺癌的治疗提供了新的方法和思路。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术的第一方面，提供了PLCE1-AS2抑制剂在制备治疗乳腺癌的药物组合物中的应用。在一些实施方式中，所述应用包括制备抑制乳腺癌细胞迁移、侵袭和增殖的药物组合物。在一些实施方式中，所述药物组合物包括抑制PLCE1-AS2表达或PLCE1-AS2功能的试剂。在一些实施方式中，所述试剂包括所述PLCE1-AS2抑制剂选自：能降低PLCE1-AS2表达量的siRNA、dsRNA、shRNA、miRNA、反义核苷酸；或者能表达或形成所述siRNA、dsRNA、shRNA、miRNA、反义核苷酸的构建物。在一优选的实施方式中，所述PLCE1-AS2抑制剂为siRNA，其核苷酸序列如SEQIDNo.1～2所示。本专利技术的第二方面，提供了一种治疗乳腺癌的药物组合物，所述药物组合物以PLCE1-AS2抑制剂为活性成分。在一些实施方式中，所述药物组合物还包括药物可接受的载体和/或辅料。优选地，所述载体和/或辅料包括慢病毒载体、脂质体或壳聚糖。本专利技术的第三方面，提供了一种筛选治疗乳腺癌的候选物质的方法，所述方法包括：用待筛选物质处理含有PLCE1-AS2基因的培养体系；和检测所述培养体系中PLCE1-AS2基因的表达；其中，若所述待筛选的物质可以抑制PLCE1-AS2基因的表达水平，则表明该待筛选物质是治疗乳腺癌的候选物质。本专利技术的第四方面，提供了第三方面所述的方法在筛选治疗乳腺癌的潜在物质中的应用。本专利技术将PLCE1-AS2基因作为作用对象，对药物或制剂进行筛选，以找到可以抑制PLCE1-AS2基因表达的药物作为乳腺癌治疗备选药物。如本专利技术所述的PLCE1-AS2基因小分子干扰RNA(siRNA)即是以人PLCE1-AS2基因为作用对象筛选获得的，可用作具有抑制乳腺癌细胞增殖作用的药物。除此之外，诸如抗体药物，小分子药物等也可将PLCE1-AS2基因作为作用对象。本专利技术的第五方面，提供了PLCE1-AS2检测试剂在制备乳腺癌诊断试剂盒中的应用。在一种实施方式中，所述试剂盒用于诊断受试者是否患有乳腺癌风险，通过测量来自所述受试者的测试样品中的PLCE1-AS2的水平来诊断受试者是否患有乳腺癌风险，其中与对照样品中PLCE1-AS2的水平相比，测试样品中PLCE1-AS2的水平上调，指示着受试者患有乳腺癌的风险。在一些实施方式中，所述试剂盒包括通过使用qRT-PCR、印记杂交、原位杂交、阵列杂交、基因芯片或新一代测序来检测PLCE1-AS2或其同源物的水平的试剂。在一优选实施方式中，所述试剂包括特异性针对PLCE1-AS2的探针或引物。基于上述技术方案，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术通过敲低PLCE1-AS2后可有效地抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭进程。本专利技术提供的PLCE1-AS2抑制剂能够特异性抑制乳腺癌细胞的增殖速率、迁移、侵袭，从而治疗乳腺癌，为乳腺癌治疗开辟新的方向。附图说明图1PLCE1-AS2在乳腺癌组织中的表达；图2PLCE1-AS2在乳腺癌细胞中的表达；图3为PLCE1-AS2转染模拟物后，Q-PCR检测PLCE1-AS2的表达量；图4为PLCE1-AS2转染模拟物后检测细胞增殖；图5为PLCE1-AS2抑制乳腺癌细胞迁移(A)和侵袭(B)结果图。具体实施方式以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。本专利技术统计学分析：所有数据采用均数±标准差(mean±SD)表示。两组间比较采用双侧Student'st检验，三组及以上采用单因素方差分析。所有结果均采用GraphPadSoftware软件进行绘图，以P<0.05为检验水准，当P<0.05为差异有统计学意义。实施例1QPCR检测PLCE1-AS2在乳腺癌组织中的表达1、样本收集收集就诊于北京大学深圳医院的乳腺癌组织和乳腺癌癌旁组织各8例，全部病例在手术前均未接收化疗和放疗，所有的患者均已知情同意，并取得均通过组织伦理委员会的同意。2、RNA提取利用QIAGEN的组织RNA提取试剂盒进行组织RNA的提取，按说明书的具体步骤进行操作。3、QPCR检测1)反应体系：RNA模板1μl，随机引物1μl，双蒸水加至12μl，混匀，低转速离心，65℃5min，然后放在冰上冷却。继续在12μl反应液中加入下列成分：5×反应缓冲液4μl，RNA酶抑制剂(20U/μl)1μl，10mMdNTP混合液2μl，AMV反转录酶(200U/μl)1μl；充分混匀并进行离心处理；2)逆转录反应条件25℃5min，42℃6本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.PLCE1-AS2抑制剂在制备治疗乳腺癌的药物组合物中的应用。/n
【技术特征摘要】
1.PLCE1-AS2抑制剂在制备治疗乳腺癌的药物组合物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用包括制备抑制乳腺癌细胞迁移、侵袭和增殖的药物组合物。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述药物组合物包括抑制PLCE1-AS2表达或PLCE1-AS2功能的试剂。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述试剂包括所述PLCE1-AS2抑制剂选自：能降低PLCE1-AS2表达量的siRNA、dsRNA、shRNA、miRNA、反义核苷酸；或者能表达或形成所述siRNA、dsRNA、shRNA、miRNA、反义核苷酸的构建物。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述PLCE1-AS2抑制剂为siRNA，其核苷酸序列如SEQI...
【专利技术属性】
技术研发人员：何劲松，付阳，李锋，高睿，郭秋怡，黄康华，周子函，
申请(专利权)人：北京大学深圳医院，
类型：发明
国别省市：广东;44
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