中性蛋白酶基因、中性蛋白酶及其制备方法和应用技术

技术编号:26365301 阅读:40 留言:0更新日期:2020-11-19 23:34
本发明专利技术属于基因工程技术领域,具体涉及一种中性蛋白酶基因、中性蛋白酶及其制备方法和应用。本发明专利技术中性蛋白酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示,其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明专利技术通过将中性蛋白酶Np的第422位氨基酸和第433位氨基酸突变为半胱氨酸,可以形成二硫键,使所得中性蛋白酶的热稳定性得到显著提升,具有更广泛的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
中性蛋白酶基因、中性蛋白酶及其制备方法和应用
本专利技术属于基因工程
,具体涉及中性蛋白酶基因及相应的重组表达载体、重组表达菌株,以及中性蛋白酶及其制备方法和应用。
技术介绍
蛋白酶是催化蛋白质水解的一类酶,蛋白酶作为一种重要的工业酶制剂广泛的应用于饲料加工、酿造、洗涤、食品加工等领域。蛋白酶分布广泛,目前市面上的蛋白酶主要来源于微生物,相对于动物及植物,微生物蛋白酶pH值范围广,生产成本低。根据微生物蛋白酶最适反应pH环境可将蛋白酶分为酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶。其中,中性蛋白酶是一类在中性条件下水解蛋白质的酶类,目前中性蛋白酶主要来源于芽孢杆菌、曲霉等微生物。嗜热脂肪芽孢杆菌中性蛋白酶(简称Np)对不同蛋白质原料具有很好的分解效果,此外Np的热稳定性要好于枯草芽孢杆菌中性蛋白酶和解淀粉芽孢杆菌中性蛋白酶(一般芽孢杆菌中性蛋白酶在70℃处理5分钟后,剩余酶活低于10%,Np的剩余酶活则大于60%)。但是当热处理温度提高至80℃时,Np则容易变性失活(80℃热处理3分钟,Np剩余酶活为18%)。
技术实现思路
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【技术保护点】
1.一种中性蛋白酶基因,其特征在于,其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种中性蛋白酶基因,其特征在于,其核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。


2.一种中性蛋白酶,其特征在于,其氨基酸序列如SEQIDNO:2所示。


3.一种重组表达载体,其特征在于,包括权利要求1所述的中性蛋白酶基因。


4.一种重组表达菌株,其特征在于,包括权利要求3所述的重组表达载体。


5.一种中性蛋白酶的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
提供嗜热脂肪芽孢杆菌中性蛋白酶的核苷酸序列、表达载体和表达菌株;
将所述嗜热脂肪芽孢杆菌中性蛋白酶的核苷酸序列与所述表达载体进行连接后,通过扩增引物进行扩增,得到含有中性蛋白酶基因的重组表达载体;
将所述重组表达载体转入表达菌株,得到重组表达菌株;
对所述重组表达菌株进行培养,得到所述中性蛋白酶;
其中,所述中性蛋白酶基因的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示,所述扩增引物的核苷酸序列如SEQ...

【专利技术属性】
技术研发人员:王建荣祝木金余思王平孟建军刘小慧曹革
申请(专利权)人:深圳润康生态环境股份有限公司
类型:发明
国别省市:广东;44

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