一种醋酸艾替班特的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种醋酸艾替班特的制备方法，属于药物合成技术领域。所述制备方法包括：采用固相合成法，按照醋酸艾替班特主链肽顺序依次将N端和侧链有保护基团的氨基酸和二肽片段连接到树脂固相载体上，得到树脂肽，其中精氨酸的胍基被硝基保护，甘氨酸N端连接了2,4‑二甲氧基苄基；利用裂解试剂裂解树脂肽，分离出裂解肽链，再用钯碳催化脱去硝基，得到艾替班特粗品，纯化后制得醋酸艾替班特。本发明专利技术采用硝基保护基对精氨酸残基进行保护，大大降低了合成成本；合成过程中相应的氨基酸位置上利用二肽片段、骨架修饰肽，减少缺失肽和插入肽杂质，制备工艺简单、稳定且商业上可行。

【技术实现步骤摘要】
一种醋酸艾替班特的制备方法
本专利技术涉及药物合成
，具体涉及一种制备醋酸艾替班特的方法。
技术介绍
艾替班特是一种对缓激肽B2受体有选择性的竞争性拮抗剂，其亲和力与缓激肽相似。缓激肽是一种血管扩张剂，被认为是导致局部肿胀、炎症和疼痛的典型遗传性血管水肿症状的原因。艾替班特抑制缓激肽与B2受体结合，从而治疗遗传性血管水肿急性发作的临床症状。艾替班特是由五种非蛋白质氨基酸组成的合成十肽。2011年，由ShireOrphanTherapies公司开发的艾替班特作为皮下注射剂在美国获得初步批准。专利文献US5648333A公开了艾替班特及其制备方法。专利文献CN107417770A公开了通过使用新型偶联试剂，如：2-氰基-2-(2-硝基苯磺酰氧亚胺)乙酸乙酯(O-NosylOXY)来抑制消旋肽杂质D-Thi6-艾替班特和D-Ser7-艾替班特，从而提高收率和纯度的合成方法。然而，用该试剂合成醋酸艾替班特在商业上是不可行的，而且该试剂的合成、储存和使用对使用者和环境都不友好。专利文献CN103992383A公开了一种固相多肽合成法制备醋酸艾替班特的方法，其中，最后两个氨基酸采用二肽片段Boc-D-Arg-Arg-OH.2HCl来偶联，以抑制des-D-Arg1-艾替班特和des-Arg2-艾替班特这两个缺失肽。然而这个二肽片段需要通过液相合成制备，精氨酸的盐酸盐不是合成二肽片段的合适原料，而且这种二肽片段Boc-D-Arg-Arg-OH的固相偶联也很冗长。在固相多肽合成中，使用有适当保护基的氨基酸和偶联剂是关键。通常，采用构建模块Fmoc-Arg(Pmc/Pbf)-OH进行合成，但是这种构建模块非常昂贵且商业上不易获得。专利文献EP3478704A1公开了采用液相合成法合成醋酸艾替班特的过程，其中在液相中合成了五肽片段、二肽片段和三肽片段，并将这些片段逐一偶联得到艾替班特十肽。但是采用液相法合成十肽比较繁琐，而且会产生多种杂质，进而使纯化变得冗长。在溶液相策略中，随着肽链长度的增加，外消旋杂质将会大幅增加。上述制备艾替班特的方法各有缺点，这些方法由于技术复杂，成本高，不适合大规模生产。因此工艺不具有商业可行性或实际操作问题依然存在。研究者在固相合成过程中，观察到多肽有强烈的聚集趋势。原因如下：生长的肽序列易形成β片状结构，导致多肽树脂崩塌。在这种情况下，试剂在多肽树脂中的分散受到限制，偶联和脱保护反应迟钝、不完全，从而产生缺失、加成，消旋肽杂质，纯化困难，导致产率低。因此，开发一种高产率、可放大、成本效益高、环境友好和商业上可行的艾替班特制备方法，避免重复繁琐和冗长的纯化步骤是本领域技术人员需要解决的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种低成本高效益的方法来合成低消旋化的醋酸艾替班特，以克服现有技术存在的工艺繁琐、纯度低等问题。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种醋酸艾替班特的制备方法，包括以下步骤：(1)通过液相合成二肽片段Fmoc-Arg(NO2)-Pro-OH和Fmoc-Ser(tBu)-D-Tic-OH；(2)采用固相合成法，按照醋酸艾替班特主链肽顺序依次将N端和侧链有保护基团的氨基酸和二肽片段连接到树脂固相载体上，得到树脂肽，其中精氨酸的胍基被硝基保护，甘氨酸在N端嵌入了2,4-二甲氧基苄基；(3)利用裂解试剂裂解树脂肽，分离出裂解肽链，再用钯碳催化脱去硝基，得到艾替班特粗品，纯化后制得醋酸艾替班特。所述艾替班特的结构式如式(Ⅰ)所示：上述醋酸艾替班特的制备工艺流程如图1所示。本专利技术中参与固相合成的单个氨基酸使用特定的正交保护基进行保护。具体地，采用硝基保护基对精氨酸残基进行保护，即Fmoc-Arg(NO2)-OH替代现有技术中常用的昂贵且不易获得的构建模块Fmoc-Arg(Pmc/Pbf)-OH，大大降低了合成成本。本专利技术在固相合成过程中相应的氨基酸位置上利用二肽片段Fmoc-Arg(NO2)-Pro-OH和Fmoc-Ser(tBu)-D-Tic-OH，以减少des-Arg2-艾替班特、des-Pro3-艾替班特、des-Ser7-艾替班特和des-D-Tic8-艾替班特等缺失肽；通过插入2,4-二甲氧基苄基(Dmb)保护基对甘氨酸残基进行骨架修饰，以破坏β片状结构从而抑制多肽聚集。通过上述手段减少缺失肽和插入肽杂质的产生，提升产物纯度。作为优选，最后一个氨基酸偶联采用Boc-D-Arg(NO2)-OPfp。将OPfp酯用于固相多肽合成，可以避免使用其它偶联剂如DIC、HBTU、TBTU、PyBoP、HATU、HCTU等。通过在Arg1位置使用Boc-D-Arg(NO2)-OPfp，可以减少des-D-Arg1-艾替班特杂质。本专利技术利用固相法将单个氨基酸和二肽片段按顺序偶联，具体为：先将Fmoc-Arg(NO2)-OH偶联到树脂固相载体上，脱Fmoc保护基后偶联下一个氨基酸，序列中的其他氨基酸按照以下顺序进行偶联和脱保护：Fmoc-Oic-OH、Fmoc-Ser(tBu)-D-Tic-OH、Fmoc-Thi-OH、Fmoc-(Dmb)Gly-OH、Fmoc-Hyp(tBu)-OH、Fmoc-Arg(NO2)-Pro-OH和Boc-D-Arg(NO2)-OPfp，得到Boc-D-Arg(NO2)-Arg(NO2)-Pro-Hyp(tBu)-(Dmb)Gly-Thi-Ser(tBu)-D-Tic-Oic-Arg(NO2)-树脂固相载体。所述树脂固相载体为wang树脂，取代度为1.0～1.2mmol/g。在第一个氨基酸即Fmoc-Arg(NO2)-OH锚定后，用溶于DMF溶剂的20％哌啶裂解Fmoc基团，游离胺基与序列中的下一个氨基酸偶联，即Fmoc-Oic-OH。依次地，按照序列顺序脱保护和偶联。在偶联过程中，对于C-末端含酸基的氨基酸，在DIC/HOBT体系下进行偶联。在DIC/HOBt偶合体系下，没有形成消旋杂质。Fmoc氨基酸和偶联试剂总是过量使用。作为优选，各Fmoc氨基酸片段和肽偶联试剂的添加量均为树脂取代物的2-4倍当量。固相合成过程中通过Kaiser试验和四氯苯醌试验监测偶合和解偶合。本专利技术通过按顺序连接实现了完整的合成。该方法完成了偶联和脱保护反应，减少了外消旋，从而控制住了与目标分子非常接近的异构杂质，从而简化了肽的纯化过程。所有氨基酸的连接完成后，使用裂解试剂将肽链从树脂上切割下来。所述裂解试剂为三氟乙酸(TFA)、苯酚、三异丙基硅烷(TIS)和水以不同比例混合。作为优选，步骤(3)中，裂解试剂为三氟乙酸、苯酚、三异丙基硅烷和水以体积比为92.5：2.5：2.5：2.5混合所得。所需的裂解试剂和树脂肽的质量比为8～10：1。裂解条件为0～40℃下反应2～5小时。作为优选，10～20℃下反应3～4小时。裂解反应结束后，收集滤液，加入异丙醚和甲苯，并在20-3本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种醋酸艾替班特的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)通过液相合成二肽片段Fmoc-Arg(NO

【技术特征摘要】
1.一种醋酸艾替班特的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)通过液相合成二肽片段Fmoc-Arg(NO2)-Pro-OH和Fmoc-Ser(tBu)-D-Tic-OH；
(2)采用固相合成法，按照醋酸艾替班特主链肽顺序依次将N端和侧链有保护基团的氨基酸和二肽片段连接到树脂固相载体上，得到树脂肽，其中精氨酸的胍基被硝基保护，甘氨酸在N端嵌入了2,4-二甲氧基苄基；
(3)利用裂解试剂裂解树脂肽，分离出裂解肽链，再用钯碳催化脱去硝基，得到艾替班特粗品，纯化后制得醋酸艾替班特。


2.如权利要求1所述的醋酸艾替班特的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，最后一个氨基酸偶联采用Boc-D-Arg(NO2)-OPfp。


3.如权利要求2所述的醋酸艾替班特的制备方法，其特征在于，步骤(2)包括：先将Fmoc-Arg(NO2)-OH偶联到树脂固相载体上，脱Fmoc保护基后偶联下一个氨基酸，序列中的其他氨基酸按照以下顺序进行偶联和裂解：Fmoc-Oic-OH、Fmoc-Ser(tBu)-D-Tic-OH、Fmoc-Thi-OH、Fmoc-(Dmb)Gly-OH、Fmoc-Hyp(tBu)-OH、Fmoc-Arg(NO2)-Pro-OH和Boc-D-Arg(NO2)-OPfp，得到Boc-D-Arg(NO2)-Arg(NO2)-Pro-Hyp(tBu)-(Dmb)Gly-Thi-Ser(tBu)-D-Tic-Oic-Arg(NO2)-树脂固相载体。


4.如权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：王丰健，拉及库马尔·塔尔，拉维·塞米拉，
申请(专利权)人：台州吉诺生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33