伊特卡肽的液相合成方法技术

本发明专利技术提供了一种伊特卡肽的液相合成方法。该合成方法包括：采用Cbz作为保护基团液相顺序合成式（I）序列，脱除式（I）序列中Ac‑

Liquid phase synthesis of iptecapeptide

【技术实现步骤摘要】
伊特卡肽的液相合成方法
本专利技术涉及多肽合成领域，具体而言，涉及一种伊特卡肽的液相合成方法。
技术介绍
伊特卡肽(Etelcalcetide)是由KaiPharmaceuticals，Inc.开发的一种新颖的拟钙剂(calcimimeticagent)，能够抑制甲状旁腺激素的分泌。伊特卡肽可结合并激活甲状旁腺上的钙敏感受体，实现甲状旁腺激素水平的降低。伊特卡肽有3个D构型的精氨酸、2个D构型的丙氨酸、1个D构型的精氨酰胺、1个L构型半胱氨酸与1个D构型半胱氨酸(N段被乙酰基封闭)构成，其中D构型半胱氨酸与L构型半胱氨酸以二硫键连接在一起(N-acetyl-D-cysteinyl-D-alanyl-D-arginyl-D-arginyl-D-arginyl-D-alanyl-D-Argininamide，disulfidewith-L-cysteine)，其结构式I所示：目前报道Etelcalcetide的合成工艺有以下专利：WO2011/014707，US2017/0190739A1，WO2017/114240A1，US2019/0100554A1，WO2017/114238A1，CN109734778A，CN109280078A等等。Etelcalcetide的合成方法有液相合成和固相方法，通过制备纯化后的伊特卡肽纯品。固相专利方法：专利WO2017/114240A1：首先固相方法合成全保护的7肽，使用二硫二吡啶活化7肽构建二硫键，同Boc-L-Cys-OH偶联得到伊特卡肽。切割树脂后，制备纯化后得到最终产品，纯度98.5%。使用活性比较高的Boc-L-Cys-OH偶联得到粗肽纯度为81.0%，杂质较多，需多次纯化，使用溶剂较多，成本高。专利US2019/0100554A1：首先固相方法合成全保护的N末端乙酰化的7肽，脱除Mmt后，同Boc-L-Cys（Npys）-OH偶联得到伊特卡肽。粗肽纯度较低，需要多次纯化，收率有待提高。可见，目前固相合成方法，均存在粗肽纯度低，二硫键错接，杂质多，难纯化等问题。液相专利方法：WO2017/114238A1：采用液相方法合成N末端乙酰化、C末端酰胺化的直链七肽同L-Cys（SCl）偶联得到伊特卡肽。制备纯化后得到最终产品，纯度98.2%。通过合成L-Cys（SCl）提高L-Cys-OH的活性，提高了粗肽的纯度，但是合成步骤很长，且总收率11%。综上，目前普遍采用固相合成方法合成伊特卡肽，但是目前的固相合成工艺普遍存在二硫键构建时副产物较多，纯度和收率不理想，原料比较贵，放大生产存在困难的问题。
技术实现思路
本专利技术的主要目的在于提供一种伊特卡肽的液相合成方法，以解决现有技术中步骤繁琐的问题。为了实现上述目的，根据本专利技术的一个方面，提供了一种伊特卡肽的液相合成方法，该合成方法包括：采用Cbz作为保护基团液相顺序合成式（I）序列，Ac-D-Cys(K)-D-Ala-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Ala-D-Arg(Pbf)-NH2（I）；脱除式（I）序列中Ac-D-Cys(K)的侧链保护基团K，得到式（II）序列，Ac-D-Cys-D-Ala-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Ala-D-Arg(Pbf)-NH2（II）；通过Boc-L-Cys(S-S-Py)-OtBu在式（II）序列的D-Cys处形成二硫键获得式（III）序列，Ac-D-Cys(S-S-(Boc-Cys-OtBu))-D-Ala-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Ala-D-Arg(Pbf)-NH2（III）；脱除式（III）序列中的保护基，得到伊特卡肽；K为Mmt或Trt。进一步地，采用Cbz作为保护基团液相顺序合成式（I）序列包括：以Cbz-D-Arg(Pbf)-OH为起始原料，在活化剂的作用下与醋酸氨反应，生成Cbz-D-Arg(Pbf)-NH2；采用Pd/C加氢脱除Cbz-D-Arg(Pbf)-NH2中的保护基团Cbz，得到NH2-D-Arg(Pbf)-NH2；采用Cbz-D-Ala-OH为起始原料，在活化剂的作用下与NH2-D-Arg(Pbf)-NH2反应，生成Cbz-D-Ala-D-Arg(Pbf)-NH2；按照脱保护基团Cbz、偶联-脱保护基团Cbz、偶联的循环操作，依次将Cbz-D-Arg(Pbf)-OH、Cbz-D-Ala-OH和Cbz-D-Cys(K)-OH进行偶联，得到式（I）序列。进一步地，活化剂选自Oxymapure、EDCI及DIPEA、HOBt、HOAt、HATU、HBTU及PyBop中任意多种；优选地，Oxymapure、EDCI及DIPEA的摩尔数，与各起始原料的摩尔数之比分别为：1.0~1.2M、1.05~1.2M及1.05~1.5M。进一步地，Cbz-D-Arg(Pbf)-OH与醋酸氨的摩尔比为1:1~6。进一步地，Cbz-D-Ala-OH与NH2-D-Arg(Pbf)-NH2的摩尔比为1:1~1:1.1。进一步地，脱除式（I）序列中Ac-D-Cys(K)的侧链保护基团K，得到式（II）序列包括：将式（I）序列置于TFA/DCM溶液中进行脱K保护基反应，得到脱保护产物；优选反应温度为10~30℃，反应时间为0.5~4h；向脱保护产物中添加1.1~1.3倍TFA摩尔量的DIPEA以中和反应体系，得到中和产物；对中和产物依次进行洗涤、纯化，得到式（II）序列。进一步地，将式（II）序列与Boc-L-Cys(S-S-Py)-OtBu按照1:3~4的摩尔比进行反应，得到二硫键连接产物；将二硫键连接产物加入水中析晶，得到式（III）序列。进一步地，将式（II）序列与Boc-L-Cys(S-S-Py)-OtBu在20~30℃的反应温度下反应8~24h，得到二硫键连接产物。进一步地，脱除式（III）序列中的保护基，得到伊特卡肽包括：将式（III）序列溶于温度为0-10℃的TFA/Tips/H2O裂解体系中进行反应，得到脱保护产物；在0~10℃下，将脱保护产物滴加至MTBE中析晶，得到析晶产物；依次对析晶产物进行Pre-HPLC纯化、转盐，得到伊特卡肽。进一步地，裂解体系中TFA：Tips：H2O的体积比为90~95：2.5~5：2.5~5；优选地，裂解体系在20-30℃下反应2~3小时。应用本专利技术的技术方案，通过采用Cbz保护的氨基酸进行液相偶联，易于控制纯度，有效的避免了缺失肽；并通过采用二硫二吡啶与半胱氨酸形成的二硫键的活性中间体Boc-L-Cys(S-S-Py)-OtBu与肽链连接，便于对二硫键的合成进行精准控制，提高了目标多肽伊特卡肽的收率（由现有技术的11%提高至25%）和纯度。该方法原料廉价易得，Cbz保护的氨基酸相比较传统的Fmoc或者Boc保护的氨基酸，脱保护经Pd/C加氢后处理简单易纯化，操作方便；且Pd/C本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种伊特卡肽的液相合成方法，其特征在于，所述合成方法包括：/n采用Cbz作为保护基团液相顺序合成式（I）序列，Ac-

【技术特征摘要】
1.一种伊特卡肽的液相合成方法，其特征在于，所述合成方法包括：
采用Cbz作为保护基团液相顺序合成式（I）序列，Ac-D-Cys(K)-D-Ala-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Ala-D-Arg(Pbf)-NH2（I）；
脱除所述式（I）序列中Ac-D-Cys(K)的侧链保护基团K，得到式（II）序列，Ac-D-Cys-D-Ala-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Ala-D-Arg(Pbf)-NH2（II）；
通过Boc-L-Cys(S-S-Py)-OtBu在所述式（II）序列的D-Cys处形成二硫键获得式（III）序列，Ac-D-Cys(S-S-(Boc-Cys-OtBu))-D-Ala-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Ala-D-Arg(Pbf)-NH2（III）；
脱除所述式（III）序列中的保护基，得到所述伊特卡肽；
所述K为Mmt或Trt。


2.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，采用Cbz作为保护基团液相顺序合成式（I）序列包括：
以Cbz-D-Arg(Pbf)-OH为起始原料，在活化剂的作用下与醋酸氨反应，生成Cbz-D-Arg(Pbf)-NH2；
采用Pd/C加氢脱除所述Cbz-D-Arg(Pbf)-NH2中的保护基团Cbz，得到NH2-D-Arg(Pbf)-NH2；
采用Cbz-D-Ala-OH为起始原料，在活化剂的作用下与所述NH2-D-Arg(Pbf)-NH2反应，生成Cbz-D-Ala-D-Arg(Pbf)-NH2；
按照脱保护基团Cbz、偶联-脱保护基团Cbz、偶联的循环操作，依次将Cbz-D-Arg(Pbf)-OH、Cbz-D-Ala-OH和Cbz-D-Cys(K)-OH进行偶联，得到所述式（I）序列。


3.根据权利要求2所述的合成方法，其特征在于，所述活化剂选自Oxymapure、EDCI及DIPEA、HOBt、HOAt、HATU、HBTU及PyBop中任意多种；
优选地，Oxymapure、EDCI及DIPEA的摩尔数，与各起始原料的摩...

【专利技术属性】
技术研发人员：李九远，李常峰，荆禄涛，巴拉苏布拉马尼安·阿鲁穆加姆，
申请(专利权)人：凯莱英生命科学技术天津有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12