对天然CXCR4具有拮抗活性的肽制造技术

以低于50μm的IC

【技术实现步骤摘要】
对天然CXCR4具有拮抗活性的肽本申请是申请日为2014年06月12日，申请号为201480033321X，专利技术名称为“对天然CXCR4具有拮抗活性的肽”的专利技术专利申请的分案申请。该在先中国申请是2014年06月12日提交的PCT国际申请(PCT/EP2014/062252)进入中国国家阶段的申请，该PCT申请的国际公布号为WO2014/198834，进入中国国家阶段日是2015年12月10日。本专利技术涉及针对天然CXCR4具有拮抗活性的肽，本专利技术肽的治疗用途以及制造本专利技术肽的方法。专利技术背景CXC趋化因子受体4(CXCR4)是G蛋白偶联受体(GPCR)，其中基质细胞衍生因子-1(SDF-1或CXCL12)是唯一公布的配体。CXCR4参与多种发育和生理过程，包括干细胞归巢(和Drost,2012)和免疫细胞的迁移(Campbell等.,2003)。CXCR4的-CXCL12轴还在先天和适应性免疫，以及在各种疾病过程，如癌细胞转移、白血病细胞迁移、类风湿性关节炎和肺纤维化中起作用(Nagasawa等.,1996；Zou等.,1998；Tachibana等.1998；Furze等.,2008)。人造CXCR4拮抗剂能够动员器官移植或化疗后用于免疫重建的造血干细胞(HSC)(Ratajczak和Kim,2012；Schroeder和DiPersio,2012)。此外，CXCR4也是HIV-1进入靶细胞的主要辅助受体(Feng等.,1996；Bleul等.,1996)。CXCR4辅助受体的利用是高度有效的，高比例的CD4+T细胞在体内淋巴组织中表达该GPCR。尽管如此，在慢性HIV-1感染期间，几乎仅有利用5型C-C趋化因子受体(CCR5)的HIV-1变体被传播和发现(Alkhatib等.,1996；Deng等.,1996；Dragic等.,1996)。有人提出多种因素造成CXCR4-嗜性(X4)HIV-1病毒株的无效传播(Margolis和Shattock,2006)。然而，免疫活性个体中有效控制X4HIV-1的潜在机制仍然知之甚少。最近，对CXCR4拮抗剂的研究因各种迹象而成为有巨大(吸引力)的领域。特别是，在临床研究中，寻找某策略来干预癌细胞增殖、分化和转移的努力尚未如预期那样成功。其中一种用于长期治疗的化合物，即，AMD3100，一种CXCR4-拮抗剂(双氮杂环十四碳烷(bicyclame)化合物：Hendrix和Flexner2000)的开发因毒副作用而不得不停止。虽然AMD注册为干细胞动员中的单次短时应用，然而找到针对靶CXCR4的适当的拮抗剂仍是一挑战。专利技术概述本专利技术的目的通过具有以下通式氨基酸序列的肽得以实现，所述肽以小于50μM的IC50值有效阻断X4嗜性HIV-1NL4-3感染：Z1XX0X1X2X3X4X5VX6X7X8X9Z2除了由SEQIDNO:16-28所示氨基酸序列构成的肽，其中X＝I、P或L、<E，如果Z1＝0，则X＝I、dL、dI、V、W、S、T、Val、Cap、β-L、β-I、Sul-L、Sul-I、Sul-V，X0＝V或者，如果X＝I，则X0是V或d-V、d-L、d-I、d-M、d-P、β-V、β-L、β-I、β-M、β-P、或Sul-V，X1＝R、H或K；X2＝Y、F、S或W；X3＝A、T、C或S；X4和X5＝K或C，前提是X4＝C，则X5≠C和如果X5＝C，则X4≠C；X6＝P、C或缺失，以及X4和X5均＝K；X7＝Q、C或缺失；X8＝C、V或缺失；X9＝S、C或缺失；Z1＝0、L、Z2、或<E，其中Z2＝0或该肽链N-末端氮原子的修饰形式，该修饰形式与该肽N-末端氨基酸的氨基一起形成具有-NR2R3结构的部分，其中R2和/或R3彼此独立为H或取代或未取代的酰基烷基、芳基、芳烷基、环烷基和杂环烷基；Z3＝0、TPTE-Z4、TPT-Z4、TP-Z4、T-Z4、或Z4，其中Z4＝0或是该肽链C-末端羧基的修饰形式，该修饰形式与该肽C-末端氨基酸的羧基一起形成具有–C(O)-O-R1或-C(O)-NR2R3结构的部分，其中R1是取代或未取代的烷基、芳基、芳烷基、环烷基和杂环烷基；和其中其它缩写具有以下意义：Cap＝己酸(C6羧酸),<E＝焦谷氨酸(pyrogutamate),Val＝缬氨酸(C5羧酸),和Sul＝砜氨基酸(sulfonaminoacids)。本领域技术人员理解，术语“包括”或“具有”可以替换为“由...组成”而不加入新的物质。本专利技术证明了本专利技术的肽影响T细胞迁移和干细胞动员，以及抑制细菌病原体。因此，本专利技术的肽是天然CXCR4拮抗剂，可防止X4HIV-1毒株传播并在体内起到调节CXCR4活性和抗微生物免疫力的作用。在本专利技术一优选的实施方式中，本专利技术的肽包含以下通式氨基酸序列：Z1XX0RX2X3X4X5VX6X7X8X9Z3除了由SEQIDNO:16-28所示氨基酸序列构成的肽，其中X＝I，或者如果Z1＝0，则X＝I、dL、dI、V、W、S、T、Val、Cap、β-L、β-I、Sul-L、Sul-I、Sul-V；X0＝V或d-V、d-L、d-I、d-M、d-P、β-V、β-L、β-I、β-M、β-P、或Sul-V；X2＝Y、或W；X3＝T、C或S；X4和X5＝K或C，前提是X4＝C，则X5≠C和如果X5＝C，则X4≠C；X6＝P、C或缺失，以及X4和X5均＝K；X7＝Q、C或缺失；X8＝C、V或缺失；X9＝S、C或缺失；Z1＝0、L、Z2、或<E，其中Z2＝0或该肽链N-末端氮原子的修饰形式，该修饰形式与该肽N-末端氨基酸的氨基一起形成具有-NR2R3结构的部分，其中R2和/或R3彼此独立为H或取代或未取代的酰基烷基、芳基、芳烷基、环烷基和杂环烷基；Z3＝0、或Z4，其中Z4＝0或是该肽链C-末端羧基的修饰形式，除了Aca，该修饰形式与该肽C-末端氨基酸的羧基一起形成具有–C(O)-O-R1或-C(O)-NR2R3结构的部分，其中R1是取代或未取代的烷基、芳基、芳烷基、环烷基和杂环烷基；和其中其它缩写具有以下意义：Cap＝己酸(C6羧酸),Aca＝氨基己酸,<E＝焦谷氨酸(pyrogutamate),Val＝缬氨酸(C5羧酸),和Sul＝砜氨基酸(sulfonaminoacids)。在本专利技术的另一优选的实施方式中，本专利技术的肽包含以下氨基酸序列：IVX1X2X3X4X5VX6X7X8X9其中X1＝R、H或K；X2＝Y、F、S或W；X3＝T、C或S；X4＝K或C；X5＝K或C；X6＝P或者如果X1＝R和X2＝W和X3＝S和X4＝K和X5＝K，则X6＝C；X7＝Q或本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种具有以下通式氨基酸序列的肽，所述肽以小于50μM的IC

【技术特征摘要】
20130612 EP 13171718.31.一种具有以下通式氨基酸序列的肽，所述肽以小于50μM的IC50值有效阻断X4嗜性HIV-1NL4-3感染：
IVRYX3X4X5VX6X7X8X9
除了由SEQIDNO:16-28所示氨基酸序列构成的肽，
其中
X3＝T、C或S；
X4和X5＝K或C，前提是X4＝C，则X5≠C和如果X5＝C，则X4≠C；
X6＝P、C或缺失，以及X4和X5均＝K；
X7＝Q、C或缺失；
X8＝C、V或缺失；
X9＝S、C或缺失。


2.如权利要求1所述的肽，具有至少一种以下氨基酸序列：
IVRYSKKVPQVS，408I-419T412S
IVRYTKCVPQVS，408I-419K414C
IVRYSKKVPQC，408I-418SC
IVRYTKKVPQCS，408I-419V418C。


3.一种二聚肽，由权利要求1或2所述的两个相同的单体肽构成，所述肽包含氨基酸半胱氨酸，其中所述二聚肽经由在所述单体肽之间形成的半胱氨酸桥彼此相连。


4.如权利要求3所述的二聚肽，其特征在于，包含氨基酸半胱氨酸的所述单体肽选自权利要求2所述的肽的组。


5.一种肽，用于以下领域：神经疾病的治疗，特别是中风、帕金森病、阿尔茨海默病、多发性硬化症；免疫学领域，特别是治疗WHIm-综合征和类风湿关节炎；肿瘤学领域，特别是治疗癌症，特别是表现出CRCX受体的癌症，例如肝、胰腺、前列腺或乳腺的癌症；治疗干细胞动员、增殖和迁移的缺乏、T-细胞激活以及对免疫母细胞，例如CTL/PD-1支持；治疗烧伤所致伤口；抗纤维化的治疗；治疗或预防疤痕；治疗心源性疾病，特别是心脏机能不全；治疗代谢疾病，特别是糖尿病；
其中如下式所示的所述肽以低于50μM的IC50值有效阻断X4嗜性HIV-1NL4-3感染：
IVRYX3X4X5VX6X7X8X9
并且其中
X3＝T、C或S；
X4和X5...

【专利技术属性】
技术研发人员：WG·福斯曼，F·科克霍夫，J·芒奇，L·斯坦德克尔，
申请(专利权)人：法瑞斯生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：德国;DE