一种用于制备具有以下氨基酸序列的人松弛素-2的方法：A链：pGlu-Leu-Tyr-Ser-Ala-Leu-Ala-Asn-Lys-Cys-Cys-His-Val-Gly-Cys-Thr-Lys-Arg-Ser-Leu-Ala-Arg-Phe-CysB链：Asp-Ser-Trp-Met-Glu-Glu-Val-Ile-Lys-Leu-Cys-Gly-Arg-Glu-Leu-Val-Arg-Ala-Gln-Ile-Ala-Ile-Cys-Gly-Met-Ser-Thr-Trp-Ser;包括以下步骤：提供具有常规保护基的用于合成A链和B链所需要的氨基酸，其中，半胱氨酸用作三苯甲基保护的氨基酸(L-Cys(Trt)-OH)；在固相合成之后实施链A和链B各自的色谱纯化；接着在pH为7.9到8.4的碳酸氢铵缓冲液中同时折叠和结合各链A和链B；和然后纯化形成的松弛素-2。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】一种用于制备具有以下氨基酸序列的人松弛素-2的方法：A链：pGlu-Leu-Tyr-Ser-Ala-Leu-Ala-Asn-Lys-Cys-Cys-His-Val-Gly-Cys-Thr-Lys-Arg-Ser-Leu-Ala-Arg-Phe-CysB链：Asp-Ser-Trp-Met-Glu-Glu-Val-Ile-Lys-Leu-Cys-Gly-Arg-Glu-Leu-Val-Arg-Ala-Gln-Ile-Ala-Ile-Cys-Gly-Met-Ser-Thr-Trp-Ser;包括以下步骤：提供具有常规保护基的用于合成A链和B链所需要的氨基酸，其中，半胱氨酸用作三苯甲基保护的氨基酸(L-Cys(Trt)-OH)；在固相合成之后实施链A和链B各自的色谱纯化；接着在pH为7.9到8.4的碳酸氢铵缓冲液中同时折叠和结合各链A和链B；和然后纯化形成的松弛素-2。【专利说明】本专利申请涉及用于全合成松弛素-2的化学方法,其经药物处理(galenicallyprocess)成高纯度形式,供作为药物使用。松弛素-2是属于胰岛素家族天然存在的肽激素(Schwabe和McDonaldl977 ;Rinderknecht 和 Humbel 1978)，可以从人体血流中分离(Wilkinson 和 Bathgate2007)。然而，这将意味着巨大的消耗，不能获得理想的和想要的产率，另外将难以提供可比的质量和纯度的材料。松弛素-2在人体内的生理功能是控制心血管和/或肾系统、以及血管的血管舒张调节(Sherwood2004)。它与G蛋白偶联受体相互作用(参见图1)。直至20世纪90年代，松弛素被认为仅是生育和孕激素:在怀孕的头三个月达到其最高血浆水平，并在胚胎着床和泌尿生殖结缔组织重建中发挥重要作用。自2000年以来，科学家们已经研究了松弛素的心血管效应，尤其是在慢性心脏衰竭的作用。研究已经首次表明存在组成型表达的内源性心脏和血管松弛素系统(Dschietzig等，2006)。在心脏衰竭中，心肌松弛素系统是处于受激状态，因此，发现循环松弛素水平显著增加，当血流动力学改善时其迅速下降。 因此，得到的结果显示I)存在功能相关的内源性心血管松弛素系统和2)心脏衰竭时松弛素的代偿作用。如同胰岛素，松弛素-2由通过两个二硫键互连的两个不同多肽链(A和B)构成(Bourell 等，1990)。加工的人松弛素~2的氨基酸序列A链:pGlu-Leu-Tyr-Ser-Ala-Leu-Ala-Asn-Lys-Cys-Cys-His-Val-Gly-Cys-Thr-LyS-Arg-Ser-Leu-Ala-Arg-Phe-Cys线形A链的分子量:2656.2道尔顿(理论h )B链:Asp-Ser-Trp-Met-Glu-Glu-Val-1le-Lys-Leu-Cys-Gly-Arg-Glu-Leu-Val-Arg-AIa-Gln-1le-Ala-1le-Cys-Gly-Met-Ser-Thr-Trp-Ser线形B链的分子量:3312.9道尔顿(理论h )人松弛素-2分子内的二硫键:A 链内:Cys-1O 和 Cys-15连接A链和B链:A 链的 Cys-1l 和 B 链的 Cys-11A 链的 Cys-24 和 B 链的 Cys-23二硫键连接分子的分子量:5963.1道尔顿(理论上)5962.5 (ES1-MS)至今，仅能通过重组合成制备纯度足够的松弛素-2和松弛素家族的其他肽，但对于肽来说该方法繁琐且产率低(Breece等.，1995; Tang等.，2003).至今，全化学合成一直伴随着大量反应步骤和高支出消耗，因此没有获得高产率(Bullesbach 和 Schwabel99I;Samuel 等., 2007;Barlos 等., 2010)。对于药物制备，需要开发优化的合成策略，该策略能够符合所有情况下对于纯度、产率、再现性、经济效率和消耗的需求。传统的合成策略是基于在松弛素-2分子内选择性引入三个二硫键，一方面这意味着巨大的化学试剂消耗，另一方面需要色谱纯化过程，这是在产生各二硫键后所必须的。进而预计会导致产物的巨大物质损失。针对产物的质量和经济方面，迄今为止已经实施的合成策略是不够的。至今，化学合成描述为太难，从而无法生产市售的产品。迄今为止，化学合成已经与氨基酸缺失所致的高杂质水平以及和高成本相关。因此，为了应对不断增加的问题，需要提供高纯度形式的松弛素-2从而获得无副作用的药物制剂(galenic preparation)。不同的制造商实施松弛素-2的重组合成，为临床前和临床检验和研究提供产品。但是，生产的消耗阻碍经济上合理的开发。大量研究表明，松弛素的效果由G蛋白偶联受体(RXFPl)，以前称为孤儿受体LGR7介导(Sherwood2004)。在携带受体RXFPl的克隆细胞的试验中，我们可以在血浆中检测到闭环控制的生理变化中出现的有效浓度的肽，确定为松弛素。因此，偏离此类因子的生理分泌模式所致疾病的治疗必须包括以适应局部靶位的形式给药来提供高纯度活性成分，这在下文有描述，也是本专利技术所涉及的。制备高纯度形式的松弛素-2及其应用是困难的，因此必须首先适应各自的状态和治疗的对象。因此，对某些 疾病，必须找到能适应各疾病的全身性和局部应用的药物形式(galenic form)。目前还没有同样是高纯度形式的此类松弛素_2制剂可用。因此，必须有以下的活性组分可用，其对于当前的规定纯度足够，能够以相应的药物形式提供，能够商业化生产，可以认为是符合最高要求的高纯度形式。本专利技术的目的在于提供这样一种方法，就在形成产物(松弛素-2)的后续反应中以等摩尔量用于合成的离析物(educt) (A链+B链)而言，该方法能足量且高效地制备松弛素_2。另一需要解决的技术问题是产生提供高纯度形式松弛素的药物和有大量应用的药物制剂。根据本专利技术，通过制备具有以下氨基酸序列的人松弛素-2的方法实现这些目的:A 链:pGlu-Leu-Tyr-Ser-Ala-Leu-Ala-Asn-Lys-Cys-Cys-His-Val-Gly-Cys-Thr-LyS-Arg-Ser-Leu-Ala-Arg-Phe-CysB 链:Asp-Ser-Trp-Met-Glu-Glu-Val-1le-Lys-Leu-Cys-Gly-Arg-Glu-Leu-Val-Arg-AIa-Gln-1le-Ala-1le-Cys-Gly-Met-Ser-Thr-Trp-Ser ；其中，本专利技术的方法包括以下步骤:提供具有常规保护基团的合成A链和B链所需的氨基酸，其中，半胱氨酸用作三苯甲基保护的氨基酸(L-Cys (Trt) -OH)，从而在固相合成之后实施链A和链B各自的色谱纯化，接着在PH为7.9到8.4的碳酸氢铵缓冲液中同时折叠和结合各链A和链B ;然后纯化形成的松弛素_2。在本专利技术的方法中，以下氨基酸衍生物用于固相合成，具体是:Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Arg(Pbf)- OH、Fmoc-L-Asn(Trt)- OH、Fmoc-L-Asp (OtBu) -OH、Fmoc-L-Glu (OtBu)、Fmoc-L-Cys (Trt)、Fmoc-L-Gln (T本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：WG·福斯曼，T·德斯彻特齐格，L·施坦德克，A·齐格拉杰，J·赫希，
申请(专利权)人：法瑞斯生物技术有限公司，
类型：
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。