一种利拉鲁肽的固相合成方法技术

本发明专利技术涉及一种利拉鲁肽的固相合成方法，将Fmoc‑Arg(NO

【技术实现步骤摘要】
一种利拉鲁肽的固相合成方法
本专利技术涉及利拉鲁肽
，尤其涉及一种利拉鲁肽的固相合成方法。
技术介绍
利拉鲁肽由丹麦诺和诺德公司开发，是一种胰高血糖素样肽-1（GLP-1）受体激动剂，采用基因重组技术制备。专利US6268343B1和US6458924B2中描述了利拉鲁肽的固液相合成，其中需要反相HPLC纯化中间体GLP-1(7-37)-OH，然后与Nα-alkanoyl-Glu(ONSu)-OtBu在液相条件下反应。在该工艺中，GLP-1(7-37)-OH的N端未受到保护，侧链的保护基团全部被去除，导致杂质大量产生，纯化困难，操作步骤复杂。这些工艺技术复杂，成本高，不适合大规模生产多肽。专利W02018032521A1描述了采用二肽、三肽、四肽和五肽偶联策略合成利拉鲁肽，具有较好的产率和纯度。然而，在实际应用中，三肽和五肽片段在DMF、NMP或DMSO等偶联溶剂中的溶解度较低，且偶联效率会随着片段大小的增加而降低。EP2757107描述了在赖氨酸位置使用Fmoc-Lys(Alloc)-OH合成利拉鲁肽。但这些方法工艺复杂本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利拉鲁肽的固相合成方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：/nS1：在活化剂体系存在下，将N端Fmoc保护的二肽Fmoc-Arg(NO

【技术特征摘要】
1.一种利拉鲁肽的固相合成方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：
S1：在活化剂体系存在下，将N端Fmoc保护的二肽Fmoc-Arg(NO2)-Gly-OH偶联到树脂固相载体上；
S2：在第一个二肽片段，即Fmoc-Arg(NO2)-Gly-OH锚定后，使用含10%-30%的哌啶溶液来切割Fmoc基团；
S3：在切割Fmoc保护基团后，游离氨基与序列中的下一个氨基酸偶联；
S4：在第二个肽片段即Fmoc-Arg(NO2)-Gly-OPfp偶联后，所连接的Fmoc基团被裂解；
S5：在所有氨基酸完成连接后，通过使用混合裂解液，从树脂中切割出肽链，反应在0-40℃下保持搅拌2-5小时；
S6：用乙醚、二异丙基醚或甲基叔丁基醚处理TFA中的裂解肽链，并在5-10℃下放置1-2小时，使产品沉淀，将沉淀产物过滤并用乙醚洗涤3-5次并干燥；
S7：用氢氧化钠溶液或DIPEA或氨水将被硝基保护的利拉鲁肽粗品水溶液的pH调节至8.0-9.5，除去废弃物；
S8：过滤所得的反应物，并根据等电点，通过使用乙酸或高氯酸或三氟乙酸来调节上述水溶液的pH值至5.0-6.5；
S9：使用甲酸和钯碳从硝基保护的利拉鲁肽中脱去硝基；
S10：对上述利拉鲁肽粗品水溶液进行反相高效液相色谱纯化，并将所需纯组分冻干，得到>99.4%的纯利拉鲁肽，其序列为NH2-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys(N-ε-(N-α-Palmitoyl-L-γ-glutamyl)-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg(NO2)-Gly-Arg(NO2)-Gly-COOH。


2.根据权利要求1所述的一种利拉鲁肽的固相合成方法，其特征在于：S1中所述固相载体包括王树脂、CTC树脂、PHB树脂、HMPA树脂、HMPB树脂、Rinkacid树脂、TentaGelTGA树脂、TentaGelSPHB树脂。


3.根据权利要求1所述的一种利拉鲁肽的固相合成方法，其特征在于：S2中的哌啶溶液可以但不局限于是哌啶溶于DMF、DMSO、NMP或N,N-二乙基乙酰胺这些非质子溶剂，S3中所述氨基酸是溶于DMF、DMSO、N，N-二乙...

【专利技术属性】
技术研发人员：王丰健，拉及库马尔·塔尔，拉维·塞米拉，
申请(专利权)人：台州吉诺生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33