鼠抗曲霉菌半乳甘露聚糖杂交瘤细胞株，单克隆抗体及应用制造技术

本发明专利技术提供一种鼠抗曲霉菌半乳甘露聚糖杂交瘤细胞株，单克隆抗体及其应用，通过小鼠杂交瘤单克隆抗体筛选及RT‑PCR法克隆Ig可变区基因，获得稳定分泌抗曲霉菌半乳甘露聚糖抗体的杂交瘤细胞株及其可变区序列，并用ELISA方式对抗体结合特异性进行了鉴定，为抗曲霉菌半乳甘露聚糖基因工程抗体的研发奠定了基础；该鼠源性曲霉菌半乳甘露聚糖单克隆抗体与曲霉菌半乳甘露聚糖反应高效价，且结合特异性强，可用于曲霉菌半乳甘露聚糖的检测，以该抗体为原料开发的检测试剂盒具备很好的临床应用价值。

Mouse anti Aspergillus galactomannan hybridoma cell line, monoclonal antibody and its application

【技术实现步骤摘要】
鼠抗曲霉菌半乳甘露聚糖杂交瘤细胞株，单克隆抗体及应用
本专利技术属于抗体的制备及序列测定领域，尤其是涉及一种鼠抗曲霉菌半乳甘露聚糖杂交瘤细胞株，单克隆抗体及应用。
技术介绍
烟曲霉（Aspergillufumigatus，A.fumigatus）在自然界中广泛分布，其分生孢子漂浮在空气中，通过呼吸道进入人体，主要引起肺部感染，其次是颅内感染、外耳病、鼻窦炎，偶有通过皮肤、腹膜、肾、骨、眼睛及消化道感染的报道。随着糖皮质激素、抗肿瘤药物、免疫抑制剂使用以及器官移植患者的增多，免疫抑制患者中侵袭性曲霉病（InvasiveAspergillosis,IA）的发病率呈迅速上升趋势。烟曲霉是引起免疫抑制患者肺部侵袭性曲霉感染的最常见病原菌，此外还有黄曲霉、黑曲霉、土曲霉等。由于缺乏典型的临床表现及有效的早期诊断方法，IA的死亡率高达50%-100%。早期快速检测是IA的有效治疗及降低死亡的关键因素。半乳甘露聚糖(Galactomannan，GM)是存在于曲霉和青霉细胞壁中的一类具有高度特异性和高度保守性的多糖，可作为曲霉菌检测的特异性分子的标志物。当曲霉菌吸入进入人体肺组织中吞噬细胞便快速将其吞噬，消化处理后释放出真菌细胞壁结构成分。通过血清、支气管肺泡灌洗液、尿液、脑脊液均可监测到半乳甘露聚糖，因此，对GM测定是曲霉菌感染的敏感指标。GM试验特异性检测血清中或组织液中的曲霉菌半乳甘露聚糖抗原，是早期发现侵袭性曲霉菌感染的有效检测手段，由于GM量的多少与组织中真菌含量密切相关，因此，检测GM抗原不仅可以帮助临床早期发现IA并早期进行干预，还可以对治疗效果进行监测和评估，同时对患者的临床结局起到提示作用。
技术实现思路
为解决上述技术问题，本专利技术提供一种鼠抗曲霉菌半乳甘露聚糖杂交瘤细胞株，单克隆抗体及其应用。本专利技术采用的技术方案是：鼠抗曲霉菌半乳甘露聚糖杂交瘤细胞株，保藏编号是CGMCCNo.20282命名为BB10。优选地，包含重链可变区序列和轻链可变区序列；重链可变区序列的CDR区中包含如SEQIDNO:1、SEQIDNO:2和SEQIDNO:3所示的三个序列；SEQIDNO:1（CDRH1）VQLHESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFDFSRYWMSSEQIDNO:2（CDRH2）WVRQAPGKGLEWIGEINPDSSTINYTPSLKDSEQIDNO:3（CDRH3）KFIISRDNAKNTLYLQMSKVRSEDTALYYCARPRGTYAMDYWGQGTSVTVSS轻链可变区序列的CDR区中包含如SEQIDNO:4、SEQIDNO:5和SEQIDNO:6所示的三个序列；SEQIDNO:4（CDRL1）DIVMTQSHKFMSTSVGDRVSITCKASQDVSTAVASEQIDNO:5（CDRL2）WYQQKPGQSPKLLIYSASYRYTSEQIDNO:6（CDRL3）GVPDRFTGSGSGTDFTFTISSVQAEDLAVYYCQENHRIPWTFGGGTKLEIKRA优选地，由保藏编号是CGMCCNo.20282的鼠抗曲霉菌半乳甘露聚糖杂交瘤细胞株产生。优选地，重链可变区序列如SEQIDNO:7所示，轻链可变区序列如SEQIDNO:8所示。SEQIDNO:7VQLHESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFDFSRYWMSWVRQAPGKGLEWIGEINPDSSTINYTPSLKDKFIISRDNAKNTLYLQMSKVRSEDTALYYCARPRGTYAMDYWGQGTSVTVSSSEQIDNO:8DIVMTQSHKFMSTSVGDRVSITCKASQDVSTAVAWYQQKPGQSPKLLIYSASYRYTGVPDRFTGSGSGTDFTFTISSVQAEDLAVYYCQENHRIPWTFGGGTKLEIKRA一种核苷酸分子，核苷酸分子包含编码鼠抗曲霉菌半乳甘露聚糖单克隆抗体的核苷酸序列。优选地，核苷酸分子编码鼠抗曲霉菌半乳甘露聚糖单克隆抗体的重链可变区的核苷酸序列如SEQIDNO:9所示，核苷酸分子编码鼠抗曲霉菌半乳甘露聚糖单克隆抗体的轻链可变区的核苷酸序列如SEQIDNO:10所示。SEQIDNO:9GGTGCAGCTTCACGAGTCTGGAGGTGGCCTGGTGCAGCCTGGAGGATCCCTGAAACTCTCCTGTGCAGCCTCAGGATTCGATTTTAGTAGATACTGGATGAGTTGGGTCCGGCAGGCTCCAGGGAAAGGGCTAGAATGGATTGGAGAAATTAATCCAGATAGCAGTACGATAAACTATACGCCATCTCTAAAAGATAAATTCATCATCTCCAGAGACAACGCCAAAAATACGCTGTACCTGCAAATGAGCAAAGTGAGATCTGAGGACACAGCCCTTTATTACTGTGCAAGACCGAGAGGTACCTATGCTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCAGSEQIDNO:10GACATTGTCATGACCCAGTCTCACAAATTCATGTCCACATCAGTAGGAGACAGGGTCAGCATCACCTGCAAGGCCAGTCAGGATGTGAGTACTGCTGTAGCCTGGTATCAACAGAAACCAGGACAATCTCCTAAACTACTGATTTACTCGGCATCCTACCGGTACACTGGAGTCCCTGATCGCTTCACTGGCAGTGGATCTGGGACGGATTTCACTTTCACCATCAGCAGTGTGCAGGCTGAAGACCTGGCAGTTTATTACTGTCAGGAAAATCATCGTATTCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAACGGGCT一种检测曲霉菌半乳甘露聚糖的试剂盒，含有鼠抗曲霉菌半乳甘露聚糖单克隆抗体。本专利技术具有的优点和积极效果是：本专利技术提供了一种鼠源性抗曲霉菌半乳甘露聚糖单克隆抗体，由其制备的腹水与曲霉菌半乳甘露聚糖反应效价高达106，不与隐球菌荚膜多糖、念珠菌甘露聚糖、肽聚糖、脂多糖、1，3-β-葡聚糖产生交叉反应，基于这些特性该单克隆抗体可用于曲霉菌半乳甘露聚糖的检测，以该抗体为原料开发的检测试剂盒具备很好的临床应用价值。附图说明图1抗体BB10的纯化后蛋白电泳图；1Marker；2BB10；图2抗体BB10的腹水效价测定结果；图3抗体BB10的交叉反应测定结果。具体实施方式下面结合附图对本专利技术的实施例做出说明。本专利技术涉及鼠抗曲霉菌半乳甘露聚糖杂交瘤细胞株，生物材料命名为BB10，属杂交瘤细胞，其保藏编号是CGMCCNo.20282，保藏地为中国微生物菌种本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.鼠抗曲霉菌半乳甘露聚糖杂交瘤细胞株，其特征在于：保藏编号是CGMCC No.20282。/n

【技术特征摘要】
1.鼠抗曲霉菌半乳甘露聚糖杂交瘤细胞株，其特征在于：保藏编号是CGMCCNo.20282。


2.鼠抗曲霉菌半乳甘露聚糖单克隆抗体，其特征在于：包含重链可变区序列和轻链可变区序列；
所述重链可变区序列的CDR区中包含如SEQIDNO:1、SEQIDNO:2和SEQIDNO:3所示的三个序列；
所述轻链可变区序列的CDR区中包含如SEQIDNO:4、SEQIDNO:5和SEQIDNO:6所示的三个序列。


3.根据权利要求2所述的鼠抗曲霉菌半乳甘露聚糖单克隆抗体，其特征在于：由保藏编号是CGMCCNo.20282的鼠抗曲霉菌半乳甘露聚糖杂交瘤细胞株产生。


4.根据权利要求3所述的鼠抗曲霉菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：苑庆华，何永胜，周跃辉，王玉芳，臧丹戎，樊琳琳，王兴，
申请(专利权)人：天津喜诺生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12