聚乙二醇化单修饰重组谷胱甘肽过氧化物酶、制备方法及其应用技术

聚乙二醇化单修饰重组谷胱甘肽过氧化物酶(mPEG‑GPX)、制备方法及其在制备抗氧化药物、保健品和化妆品方面的应用，属于生物技术领域。本发明专利技术是将活化的直链单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺琥珀酸酯(mPEG‑SS)与重组谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)的氨基共价偶联得到mPEG‑GPX。GPX经聚乙二醇修饰后，产物mPEG‑GPX的稳定性较GPX明显增强，mPEG‑GPX的体内抗氧化效果优于GPX，有利于mPEG‑GPX保健品的开发利用；得到的聚乙二醇化单修饰重组谷胱甘肽过氧化物酶提高了重组谷胱甘肽过氧化物酶的pH耐受性和热稳定性以及抗蛋白酶水解的能力，有效地延长重组谷胱甘肽过氧化物酶在体内的循环半衰期，增加药物的稳定性并提高药效。

【技术实现步骤摘要】
聚乙二醇化单修饰重组谷胱甘肽过氧化物酶、制备方法及其应用
本专利技术属于生物
，涉及聚乙二醇修饰蛋白质类化合物，具体涉及一类聚乙二醇化单修饰重组谷胱甘肽过氧化物酶(mPEG-GPX)、制备方法及其在制备抗氧化药物、保健品和化妆品方面的应用。
技术介绍
谷胱甘肽过氧化物酶是一类重要的酶，和超氧化物歧化酶及过氧化氢酶共同构成机体主要的抗氧化酶系。谷胱甘肽过氧化物酶能够通过催化还原性谷胱甘肽与过氧化氢的反应，从而阻断氧自由基对机体组织的损伤。但是天然谷胱甘肽过氧化物酶的来源有限，性质不稳定，为解决这一问题，中国专利201510431360.1公布了一种杂合tRNA及其在制备谷胱甘肽过氧化物酶中的应用，成功制备了酶蛋白活力和产量高、稳定性好的重组谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)。研究表明，重组谷胱甘肽过氧化物酶具有很好的抗氧化效果，在医药领域、化妆品行业和保健品领域均具有较高的应用价值。作为一类蛋白质，重组谷胱甘肽过氧化物酶拥有大多数蛋白质类普遍面临和急需解决的问题，如在体内的循环半衰期短、稳定性差、免疫原性强且易被蛋白酶水解等。因此本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种聚乙二醇化单修饰重组谷胱甘肽过氧化物酶，其结构式如下：/n

【技术特征摘要】
1.一种聚乙二醇化单修饰重组谷胱甘肽过氧化物酶，其结构式如下：



其中，GPX表示重组谷胱甘肽过氧化物酶，mPEG表示活化的直链单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺琥珀酸酯中的单甲氧基聚乙二醇部分。


2.权利要求1所述的聚乙二醇化单修饰重组谷胱甘肽过氧化物酶的制备方法，其步骤如下：
(1)重组谷胱甘肽过氧化物酶的获取
制备重组谷胱甘肽过氧化物酶，用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白印迹鉴定重组谷胱甘肽过氧化物酶靶蛋白；
(2)修饰反应及分离纯化
以平均分子量2～30kD的活化的直链单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺琥珀酸酯作为修饰剂，与步骤(1)得到的重组谷胱甘肽过氧化物酶在4～37℃、pH6.0～9.0条件下进行10～60min的共价偶联反应，重组谷胱甘肽过氧化物酶与修饰剂的摩尔比为1：5～60，然后加入终止剂甘氨酸终止反应；再将共价偶联反应所得混合液用阴离子交换层析色谱分离纯化，采用盐浓度梯度洗脱方式洗脱目标产物，将含有目标产物的洗脱液收集透析除盐，然后将目标产物冻干，即得到聚乙二醇化单修饰重组谷胱甘肽过氧化物酶，最后用聚丙烯酰胺凝胶电泳结合考蓝染色和碘染色两种染色方式鉴定目标产物。


3.如权利要求2所述的聚乙二醇化单修饰重组谷胱甘肽过氧化物酶的制备方法，其特征在于：活化的直链单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺琥珀酸酯的平均分子量为2～20kD。


4.如权利要求3所述的聚乙二醇化单修饰重组谷胱甘肽过氧化物酶的制备方法，其特征在于：活化的直链单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺琥珀酸酯的平均分子量为5～20kD。

【专利技术属性】
技术研发人员：魏景艳，王艳伟，闫琦，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：吉林;22