一种重组锰过氧化物酶的制备方法及其在中草药木质素降解中的应用技术

本发明专利技术属于生物饲料领域，涉及种重组锰过氧化物酶的制备方法及其在中草药木质纤维素降解中的应用；首先将来源于Irpex lacteus的锰过氧化物酶基因序列进行偏爱性优化，以优化的基因为模板进行PCR扩增，与pREP连接后转化到大肠杆菌感受态细胞中，获得重组穿梭质粒并导入缺陷型粟酒裂殖酵母感受态细胞中，得到重组锰过氧化物酶酵母工程菌；培养后得到粗酶液，与中草药混合，再加入氯化钙、硫酸锰、漆酶、葡萄糖氧化酶和小分子物质激活剂进行多酶协同酶解反应；本发明专利技术提供的方法可以快速地获取大量锰过氧化物酶，实现锰过氧化物酶的工业化生产，制备良好稳定的过氧化物酶产品，实现中草药木质素的有效降解。

【技术实现步骤摘要】
一种重组锰过氧化物酶的制备方法及其在中草药木质素降解中的应用
本专利技术属于生物饲料领域，具体涉及一种重组锰过氧化物酶的制备方法及其在中草药木质素降解中的应用。
技术介绍
食品安全和大健康产业是今后的发展方向，养殖业是其重要的前提条件。近年来化学合成添加剂、抗生素和激素使得畜禽产品的品质、口感、营养及安全性备受质疑，高品质的饲料成为刚需。中华人民共和国农村农业部发布第194号公告，自2020年1月1日起，退出除中药外的所有促生长类药物饲料添加剂品种，自2020年7月1日起，饲料生产企业停止生产含有促生长类药物饲料添加剂(中药类除外)的商品饲料。中草药饲料添加剂将得到推广，畜禽饲料中添加中草药，有效发挥防病治病的效果，而且纯天然、毒副作用小、低残留、高安全性。比如，杜仲中含有丰富的绿原酸，有保胎安胎之功效；黄芪中含有丰富的黄芪多糖等，能显著提高免疫力。当下使用的中草药中有90％为植物类，而植物细胞内物质均被致密木质纤维素包裹，致使胞浆中有效成分和活性物质难以充分释放。在中草药发酵过程中加入多种纤维素酶、半纤维素酶可以降解细胞壁间组分物质，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组锰过氧化物酶的制备方法，其特征在于，步骤如下：/n(1)将来源于Irpex lacteus的锰过氧化物酶基因序列根据粟酒裂殖酵母密码子偏爱性进行优化，得到编码锰过氧化物酶的基因；/n(2)以步骤(1)中所述的编码锰过氧化物酶的基因为模板，进行PCR扩增，与穿梭质粒载体pREP连接后转化到大肠杆菌感受态细胞中，抽提获得重组穿梭质粒后，利用电转化法导入到缺陷型粟酒裂殖酵母感受态细胞中，得到重组锰过氧化物酶酵母工程菌，即S.pombe-pREP-mnp；/n(3)培养步骤(2)中所述的重组锰过氧化物酶酵母工程菌收集菌液，所述菌液中包含重组酵母工程菌胞外分泌的锰过氧化物酶；得到的菌液以不同...

【技术特征摘要】
1.一种重组锰过氧化物酶的制备方法，其特征在于，步骤如下：
(1)将来源于Irpexlacteus的锰过氧化物酶基因序列根据粟酒裂殖酵母密码子偏爱性进行优化，得到编码锰过氧化物酶的基因；
(2)以步骤(1)中所述的编码锰过氧化物酶的基因为模板，进行PCR扩增，与穿梭质粒载体pREP连接后转化到大肠杆菌感受态细胞中，抽提获得重组穿梭质粒后，利用电转化法导入到缺陷型粟酒裂殖酵母感受态细胞中，得到重组锰过氧化物酶酵母工程菌，即S.pombe-pREP-mnp；
(3)培养步骤(2)中所述的重组锰过氧化物酶酵母工程菌收集菌液，所述菌液中包含重组酵母工程菌胞外分泌的锰过氧化物酶；得到的菌液以不同的方式制备保存、备用。


2.根据权利要求1所述的重组锰过氧化物酶的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述重组穿梭质粒为pREP-mnp；所述的大肠杆菌是6-磷酸葡萄糖胺合成酶缺陷型大肠杆菌。


3.根据权利要求1所述的重组锰过氧化物酶的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述的缺陷型粟酒裂殖酵母是6-磷酸果糖氨基转移酶缺陷型粟酒裂殖酵母。


4.根据权利要求1所述的重组锰过氧化物酶的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述菌液以不同的方式制备保存为：直接保存菌液或菌液固液分离后保存液体部分，即粗酶液；或由粗酶液制备成浓缩制剂和粉制剂进行保存。


5.根据权利要求1～4任意一项所述的方法制备的重组锰过氧化物酶用于降解中草药木质素的用途，其特征在于，步骤如下：取菌液或菌液分离后的粗酶液与中草药混合，并添加CaCl2、MnSO4、漆酶、...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈华友，崔周磊，王洪成，卢晨曦，姚丹，陈华撑，
申请(专利权)人：浙江康星生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33