一种富含乳双歧杆菌发酵饲料的生产方法技术

本发明专利技术属于生物饲料领域，具体涉及一种富含乳双歧杆菌发酵饲料的生产方法；步骤为：活化菌株，得到枯草芽孢杆菌、酿酒酵母、乳双歧杆菌、凝结芽孢杆菌和副干酪乳杆菌发酵种子液；豆粕与豆渣、次粉混合得到发酵培养基，在密封条件下进行厌氧发酵后获得成品；本发明专利技术采用混菌厌氧发酵模式，利用枯草芽孢杆菌、酿酒酵母和凝结芽孢杆菌消耗发酵初期环境中的残余氧气，副干酪乳杆菌产酸丰富，为乳双歧杆菌提供适宜生长的环境pH，通过菌株间的共生协同作用，提高菌体密度，发酵彻底，乳双歧杆菌菌量高，有机酸含量丰富，适口性好，经济效益高；本发明专利技术利用qPCR方法检测发酵饲料中乳双歧杆菌的数量，检测时间短、灵敏度高。灵敏度高。灵敏度高。

【技术实现步骤摘要】
一种富含乳双歧杆菌发酵饲料的生产方法


[0001]本专利技术属于生物饲料领域，具体涉及一种富含乳双歧杆菌发酵饲料的生产方法。

技术介绍

[0002]双歧杆菌是厌氧益生菌，是动物肠道菌群的重要组成部分，可以分解糖类，产生醋酸、乳酸等酸类；双歧杆菌通过细胞壁中的磷壁酸与肠黏膜上皮细胞特异性结合，黏附在肠黏膜表面，形成生物菌膜，起到占位保护作用，具有稳定肠道内环境、抵御有害菌感染，促进消化等功能。双歧杆菌可以较好地利用豆粕中的水苏糖，降解原料中抗营养因子。然而，双歧杆菌比其他细菌更易受氧气、pH值、储藏温度等因素的影响，发酵基质中不同菌株的存在也会影响双歧杆菌生长，如微生物代谢产生的抑菌物质以及菌株对底物营养的竞争利用或菌株间的拮抗作用，都可能抑制双歧杆菌的生长；当发酵基质中存在与双歧杆菌具有共生或协同作用的微生物时，则会促进双歧杆菌的生长。双歧杆菌即使在牛奶中也需要较长的发酵条件和严格的厌氧条件。因此，双歧杆菌多以微生物制剂形式应用于养殖行业，在发酵饲料中的应用受到限制。凝结芽孢杆菌是兼性厌氧菌，具有芽孢杆菌和乳酸菌的双重特性，在有氧、微氧和无氧环本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种富含乳双歧杆菌发酵饲料的生产方法，其特征在于，制备步骤如下：(1)将枯草芽孢杆菌、酿酒酵母、乳双歧杆菌和乳酸菌分别接种到相应的液体培养基中进行活化培养，分别得到枯草芽孢杆菌发酵种子液、酿酒酵母发酵种子液、乳双歧杆菌发酵种子液和乳酸菌发酵种子液；(2)将豆粕、豆渣和次粉混合均匀，得到厌氧发酵培养基：(3)接种步骤(1)得到的枯草芽孢杆菌发酵种子液、酿酒酵母发酵种子液、乳双歧杆菌发酵种子液和乳酸菌发酵种子液分别加入步骤(2)得到的厌氧发酵培养基中，混合均匀，得到厌氧发酵混合物，调整发酵温度以及培养基含水量，在密封条件下进行厌氧发酵，厌氧发酵后获得成品，即为富含乳双歧杆菌发酵饲料；(4)制作乳双歧杆菌标准曲线:将乳双歧杆菌基因组DNA用乳双歧杆菌特异性引物进行PCR扩增，获得的PCR产物经切胶、回收后，稀释至1
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102～1
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109拷贝/μL，作为标准品进行荧光定量PCR反应，记录荧光定量PCR反应过程中产生可被检测到的荧光信号所需的最小循环数，即为Ct值；将测得的标准品DNA浓度换算成拷贝数，以拷贝数的对数值为横坐标，对应Ct值为纵坐标，生成标准曲线；其中拷贝数计算公式如下：拷贝数＝DNA浓度(ng/μL)
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10
‑9×
6.023
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10
23
/(660
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碱基数)；(5)取步骤(3)制备的一定量饲料样品，提取DNA进行qPCR检测，得到Ct值，根据步骤(4)所得标准曲线计算乳双歧杆菌数量。2.根据权利要求1所述的一种富含乳双歧杆菌发酵饲料的生产方法，其特征在于，步骤(1)所述乳酸菌为凝结芽孢杆菌、副干酪乳杆菌或乳双歧杆菌的一种或多种。3.根据权利要求1所述的一种富含乳双歧杆菌发酵饲料的生产方法，其特征在于，步骤(2)中所述厌氧发酵培养基的各组分重量百分含量分别为：豆粕37％～52.5％；豆渣40％～55.5％；次粉7.5％～19.5％。4.根据权利要求1所述的一种富含乳双歧杆菌发酵饲料的生产方法，其特征在于，步骤(3)中所述枯草芽孢杆菌种子液和酿酒酵母种子液的接种量均为厌氧发酵培养基重量的1％～3％；所述枯草芽孢杆菌和酿酒酵母种子液的活菌总数均为1.0
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108～2.1
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109cfu/mL。5.根据权利要求1所述的一种富含乳双歧杆菌发酵饲料的生产方法，其特征在于，步骤(3)中所述乳...

【专利技术属性】
技术研发人员：康凌宇，陈华友，姚丹，
申请(专利权)人：浙江康星生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：