一种鸡蛋中多西环素残留的LC-MS测定方法技术

本发明专利技术公开了一种鸡蛋中多西环素残留的LC‑MS测定方法，该方法包括样品提取纯化、标准工作溶液的配制、测定和结果计算等步骤，其中，色谱柱为C18；流动相A为0.05‑0.5％甲酸水溶液，流动相B为乙腈溶液，梯度洗脱；采用ESI离子源，正离子模式扫描，多离子反应监测模式测定，多西环素母离子的质荷比为445.0，二级质谱检测的子离子的质荷比为154和428，相应的碰撞电压分别为37eV和29eV。该方法平均回收率为78.51％～108.82％，平均相对标准偏差(RSD)为5.96％～11.07％，检出限仅为0.5μg/kg，定量限仅为0.5μg/kg，具有操作简便、快速、准确、灵敏度高及重复性好等优点。

【技术实现步骤摘要】
一种鸡蛋中多西环素残留的LC-MS测定方法
本专利技术涉及一种鸡蛋中多西环素残留的测定方法，更具体地说是采用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)定性定量测定鸡蛋中多西环素残留的方法，属于兽药残留检测

技术介绍
鸡蛋富含优质蛋白质及维生素，有很高的营养价值，是深受大众喜爱的美食。我国是鸡蛋生产和消费大国，据统计，2019年禽蛋产量3309万吨，其中鸡蛋占比约90％，雄踞世界第一。因此，鸡蛋的质量安全一直备受消费者的关注。兽药残留是影响鸡蛋质量安全的重要因素。在蛋鸡的饲养过程中，不少养殖户或由于经济利益的驱使，或不懂科学用药知识，随意使用抗生素用于抗菌促生长，造成抗生素在鸡蛋中残留超标，留下食品安全隐患。多西环素(强力霉素)是在蛋鸡养殖中使用较多的一种四环素类药物，近年来，有关鸡蛋中多西环素残留超标的现象时有发生。吕冰峰等汇总了2018年鸡蛋国家食品安全监督抽检结果，结果发现抽检的1310批次鸡蛋中，检出不合格样品77批次，总体不合格率为5.88％。孙言凤等分析了2016-2018年湖北地区鸡肉和鸡蛋中四环素类抗生素残留情况，结果发现，抽检的538样品中四环素类抗生素的检出率为15.61％，其中强力霉素是鸡肉和鸡蛋样品中检出率最高且唯一超标的项目。杨欢春等2016-2017在宁夏随机抽取了8个市、县(区)市售鸡蛋和鸡肉样品共124份，结果发现鸡蛋和鸡肉中四环素类抗生素残留现状不容忽视，其中鸡蛋中强力霉素超标率为13.5％。据报道，2017年11月5日，南阳市畜牧局在开展兽药、饲料、畜产品质量安全抽检活动中发现，城乡一体化示范区新湾镇李某的养鸡场当日生产的鸡蛋检出多西环素。残留检测是发现、查处动物源性食品残留超标的重要手段，是执法机关科学执法的技术保障。目前，已有很多方法用于鸡蛋中多西环素的残留检测。王旭丹等建立了同时检测鸡蛋中土霉素、四环素、金霉素和多西环素4种四环素类药物残留的高效液相色谱法，方法的检出限为10ng/g，定量限为50ng/g，平均回收率为67.3％～81.4％。吴宁鹏等建立了鸡蛋中土霉素、四环素、金霉素、多西环素残留量测定的高效液相色谱法，方法的检出限为10μg/kg,定量限为50μg/kg，平均回收率为60％～110％。卜晓娜等综述了动物源性食品中四环素类药物残留的色谱和质谱检测技术的研究进展。从中我们可以看到，目前对四环素类残留检测的大部分集中于猪肉、鸡肉、鱼肉、蜂蜜等动物可食性组织；所检测的对象主要集中在土霉素、金霉素和四环素；用于检测鸡蛋中多西环素残留的HPLC-MS方法很少且检出限较高、准确度较低，不能满足当前对鸡蛋中多西环素残留检测的需求。因此建立简便、快速、准确、耐用、能准确定性和定量分析鸡蛋中多西环素残留量的LC-MS/MS检测方法具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种鸡蛋中多西环素残留的LC-MS/MS测定方法，旨在提高鸡蛋中多西环素残留检测的检出限和准确性，以及提高检测效率。为实现以上目的，本专利技术所采用的技术方案是：一种鸡蛋中多西环素残留的LC-MS测定方法，该方法包括以下步骤：(1)样品提取纯化取均质后的待测鸡蛋样品，加入Na2-EDTA-Mcllvaine缓冲溶液，涡旋1-5min，接着加入乙腈溶液，振荡5-10min后常温下超声提取10-30min，离心取上清液，然后将上清液过固相萃取柱，收集滤液，40-50℃水浴氮气吹干，用初始比例的流动相溶液定容，用有机系微孔滤膜过滤后得到待测样品溶液；(2)标准工作溶液的配制取空白鸡蛋样品，按步骤(1)的方法提取纯化后，加入不同量的多西环素标准液，配制成不同浓度梯度的系列标准工作液；(3)测定和结果计算将步骤(2)中的各浓度梯度的标准工作液进行LC-MS/MS测定，以标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线；在相同条件下将步骤(1)中的待测样品溶液注入LC-MS/MS进行测定，测得待测样品溶液中多西环素的色谱峰面积，代入标准工作曲线，得到待测样品溶液中多西环素含量，所述LC-MS/MS的液相色谱条件为：色谱柱为C18；进样量为5-20μL；流速为0.1-0.5mL/min；流动相A为0.05-0.5％(体积)甲酸水溶液，流动相B为乙腈溶液，梯度洗脱；所述LC-MS/MS的质谱条件为：采用ESI离子源，正离子(ES+)模式扫描，多离子反应监测(MRM)模式测定，多西环素母离子的质荷比为445.0，二级质谱检测的子离子的质荷比为154和428，相应的碰撞电压分别为37eV和29eV。步骤(3)中，所述梯度洗脱的程序为：时间/min流动相A(％)流动相B(％)090102901033070530707901089010所述质谱的工作参数为：脱溶剂温度，500℃；脱溶剂气流量，800L/hr；锥孔电压，27V；锥孔气流量，50L/hr；毛细管电压，3.50kV；源温度，150℃；二级锥孔萃取电压，3.0V；碰撞室进口电压，0.5V；碰撞室出口电压，0.5V。所述系列标准工作液的浓度梯度为：0.5、1、2、5、10μg/kg。步骤(1)中，所述离心的温度为4℃，速度为10000r/min。步骤(1)中，所述有机系微孔滤膜的孔径为0.22μm。步骤(3)中所述的进样量为10μL；流速为0.2mL/min。所述色谱柱为WatersACQUITYUPLCTMBEHC18Column(2.1×50mm，2.5μm)。步骤(3)中检测所述滤液中药物的母离子和子离子对，若其离子色谱峰保留时间与标准工作溶液一致；且滤液(样品)中目标化合物的两个子离子的相对丰度与浓度相当的空白基质标准溶液的离子相对丰度偏差不超过30％时，则判断该样品中存在该种兽药；若上述两个条件不能同时满足，则判断不含该种兽药。本专利技术的有益效果在于：本专利技术成功建立了鸡蛋中多西环素定性确证和定量检测LC-MS/MS方法，该方法平均回收率为78.51％～108.82％，平均相对标准偏差(RSD)为5.96％～11.07％，检出限仅为0.5μg/kg，定量限仅为0.5μg/kg，该方法具有操作简便、快速、准确、灵敏度高及重复性好的优点，能有效避免样品中基质干扰，在鸡蛋食品安全检测中具有重要意义。附图说明图1为添加在空白鸡蛋基质中的10.0ng/mL多西环素标液的LC-MS/MS多反应监测色谱图。图2为不含多西环素的鸡蛋空白样品的LC-MS/MS多反应监测色谱图。图3为以不含多西环素的鸡蛋空白样品为基质配制的多西环素标准工作曲线和标准溶液的标准曲线。具体实施方式本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鸡蛋中多西环素残留的LC-MS测定方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：/n(1)提取纯化/n取均质后的待测鸡蛋样品，加入Na

【技术特征摘要】
1.一种鸡蛋中多西环素残留的LC-MS测定方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
(1)提取纯化
取均质后的待测鸡蛋样品，加入Na2-EDTA-Mcllvaine缓冲溶液，涡旋1-5min，接着加入乙腈溶液，振荡5-10min后常温下超声提取10-30min，离心取上清液，然后将上清液过固相萃取柱，收集滤液，40-50℃水浴氮气吹干，用初始比例的流动相溶液定容，用有机系微孔滤膜过滤后得到待测样品溶液；
(2)标准工作溶液的配制
取空白鸡蛋样品，按步骤(1)的方法提取纯化后，加入不同量的多西环素标准液，配制成不同浓度梯度的系列标准工作液；
(3)测定和结果计算
将步骤(2)中的各浓度梯度的标准工作液进行LC-MS/MS测定，以标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线；在相同条件下将步骤(1)中的待测样品溶液注入LC-MS/MS进行测定，测得待测样品溶液中多西环素的色谱峰面积，代入标准工作曲线，得到待测样品溶液中多西环素含量，
所述LC-MS/MS的液相色谱条件为：色谱柱为C18；进样量为5-20μL；流速为0.1-0.5mL/min；流动相A为0.05-0.5％甲酸水溶液，流动相B为乙腈溶液，梯度洗脱；
所述LC-MS/MS的质谱条件为：采用ESI离子源，正离子(ES+)模式扫描，多离子反应监测(MRM)模式测定，多西环素母离子的质荷比为445.0，二级质谱检测的子离子的质荷比为154和428，相应的碰撞电压分别为37eV和29eV。


2.如权利要求1所述的鸡蛋中多西环素残留的LC-MS测定方法，其特征在于，所述梯度洗脱的程序为：









时间/min
流动相A(％)<...

【专利技术属性】
技术研发人员：张美，朱莉莎，徐飘飘，曾婧，向文婷，欧亚红，彭大鹏，
申请(专利权)人：武汉工控检验检测有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42