一种鸡蛋中金刚烷胺残留量的LC-MS/MS测定方法技术

本发明专利技术公开了一种鸡蛋中金刚烷胺残留量的LC‑MS/MS测定方法，该方法包括鸡蛋样品提取、净化、标准品溶液的制备和样品测定等步骤。本发明专利技术建立了简便、快速并能有效避免样品中基质干扰的样品前处理方法，将此前处理方法结合LC‑MS/MS应用于鸡蛋中金刚烷胺定性确证和定量检测，平均回收率为96.60％～100.19％，平均相对标准偏差(RSD)为0.06％～0.16％(批内)和0.03％～0.06％(批间)，检出限为0.3μg/kg，定量限为1μg/kg，具有操作简便、快速、准确、灵敏度高及重复性好的优点。

【技术实现步骤摘要】
一种鸡蛋中金刚烷胺残留量的LC-MS/MS测定方法
本专利技术涉及鸡蛋中兽药残留量的测定方法，更具体地说是采用液相色谱－串联质谱(LC-MS/MS)定性定量测定鸡蛋中残留的金刚烷胺含量的方法，属于兽药残留检测领域。
技术介绍
我国作为畜禽产品的生产和消费大国，每年所生产和消费的畜禽产品均位居世界前列。在这些畜禽产品中，鸡蛋是消费量最高的畜禽产品之一。据统计，我国在2018年城镇人均消费鸡蛋为10.8公斤。因此，鸡蛋的食品安全性越来越受到人们的广泛关注。影响鸡蛋安全性的主要因素之一是兽药残留，大量的兽用抗生素使用于禽类，势必会不同程度的导致鸡蛋中残留部分兽药，人类在摄入后，残留的兽药会以生物蓄积和生物放大的作用对人类造成危害，以及引发耐药性的产生。目前我国依然存在兽药的滥用情况，先前也报道过鸡蛋中兽药残留超标的现象，刘钦等在2019年对天津市滨海新区的畜禽产品中兽药残留超标现象进行了监测，其中禽类产品不合格率为34.15％，孙海新的研究中103份鸡肉组织样品中就有19份残留超标，为了促进我国食品安全性管理，必须解决兽药残留的问题，这里面兽药的残留检测技术就显得尤为重要。金刚烷胺是蛋鸡上较常使用的一种抗病毒药物，2005年中国农业部发布的《关于清查金刚烷胺等抗病毒药物的紧急通知》，规定列入《兽药地方标准废止目录》(农业部公告第560号)的金刚乙胺、金刚烷胺等停止使用。目前对于此类药物的检测通常有HPLC，HPLC-MS，ELISA方法等，其中HPLC-MS方法由于其灵敏度高，重现性好等优点，是最常使用的检测方法。魏秀丽等使用HPLC-MS方法对鸡肉组织中的金刚烷胺进行检测，采用三氯乙酸和乙腈提取样品中残留的金刚烷胺，SPE净化浓缩，ACQUITYUPLCTMBEHC18色谱柱为分离柱，正离子扫描上机测定。结果显示，金刚烷胺在1～20ng/mL的范围内线性关系良好，R2＝0.997；样品检出限为1ng/g，定量限为2ng/g。汤晓艳等使用HPLC-MS/MS方法检测鸡蛋中的金刚烷胺，样品用甲醇-1％三氯乙酸水溶液提取，采用液相色谱-串联质谱测定，分析采用AgilentXDB-C18色谱柱，金刚烷胺的检出限为2μg/kg。平均回收率在88％-99.6％之间。曹骞等通过乙腈提取，C18柱净化，以及经超高效液相色谱-串联质谱检测分析。结果表明，金刚烷胺在1-100μg/mL范围内线性满足要求，相关系数r2为0.998，定量限为1.0μg/kg。龚波等建立了快速测定蜂蜜中金刚烷胺药物残留的超高效液相色谱-串联质谱分析方法。样品用1％甲酸乙腈提取，浓缩后利用超高效液相色谱分离，以乙腈和0.1％甲酸水为流动相进行梯度洗脱，MRM反应监测模式检测。结果表明，金刚烷胺检测限为0.2μg/kg，定量限为0.5μg/kg，在1-20μg/kg浓度范围内平均回收率为80％-110％，精密度小于20％。仲伶俐等运用超高效液相色谱-串联质谱法测定动物源性食品(鸡肉、鸡肝和牛奶)中金刚烷胺的分析方法，方法样品用0.2％(V：V)甲酸乙腈溶液提取，经OasisPRiMEHLB小柱净化后用CapcellPakC18MGIII-H色谱柱分离，以甲醇和0.1％甲酸水溶液(V：V)作为流动相进行梯度洗脱，在多反应监测(multiplereactionmonitoring，MRM)模式下进行液相色谱-串联质谱法测定。结果金刚烷胺在1.0～50.0μg/L范围内线性关系良好。在添加水平为1.0、5.0和20.0μg/kg时的回收率为76.3％～93.5％，相对标准偏差在3.4％～8.6％之间，方法的检测限为0.2μg/kg，定量限为1.0μg/kg。可见，目前金刚烷胺的残留检测大多涉及鸡肉和组织，对于鸡蛋中的检测方法报道较少，本专利技术力求开发一种灵敏度高，重现性好，操作便捷的鸡蛋中金刚烷胺的HPLC-MS检测方法，以期为食品安全监测提供方法学资料，为金刚烷胺同类物质的检测和排查提供了方法学参考。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种鸡蛋中金刚烷胺残留量的LC-MS/MS测定方法，主要用于测定鸡蛋中金刚烷胺残留量。为实现以上目的，本专利技术所采用的技术方案是：一种鸡蛋中金刚烷胺残留量的LC-MS/MS测定方法，该方法包括以下步骤：(1)提取：将鸡蛋样品加入内标物后均质，再加入0.5-5％乙酸乙腈溶液，涡旋，离心，取上清，再加入正己烷，涡旋，离心，弃去正己烷层，收集提取液；(2)净化：将阳离子固相萃取柱用甲醇活化，水平衡，然后将提取液上柱，控制流速在2-3滴/s，依次用1-3％盐酸水溶液、甲醇淋洗，抽干后用3-8％氨水甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，氮气吹干后用初始流动相复溶，涡旋后过0.22μm滤膜，得供试样品溶液；(3)标准品溶液的制备：将适量金刚烷胺和内标物用初始流动相稀释，配制成金刚烷胺分别为1、2、5、10μg/L、内标物浓度为2μg/L的标准品溶液；(4)测定：将供试样品溶液和标准品溶液在相同条件下分别进行LC-MS/MS测定，测定条件如下：液相色谱条件：色谱柱：WatersXBridgeC18Column(2.1×150mm，3.5μm)。流动相：A相为0.1％甲酸水溶液；B相为甲醇溶液。流速：0.3mL/min。进样量：5μL。梯度洗脱：梯度洗脱程序见下表：时间/minA/％B/％0901019010510906901079010质谱条件：离子源：ESI；雾化气流速：3L/min；加热气流速：10L/min；接口温度：350℃；DL温度：250℃；加热模块温度：400℃；干燥气流速：10L/min；检测模式：多反应监测(MRM)；氩气：17kPa；定性离子对、定量离子对及锥孔电压和碰撞能量见下表：(5)计算：以标准品溶液特征离子质量色谱峰面积为纵坐标，标准品溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，采用内标法，将测得的供试样品溶液中金刚烷胺的色谱峰面积代入标准曲线，得到供试样品溶液中金刚烷胺含量，最后根据供试样品溶液的含量计算得到鸡蛋中金刚烷胺残留量。优选地，所述内标物为氘代金刚烷胺。优选地，所述阳离子固相萃取柱为混合阳离子固相萃取柱OasisMCX。优选地，所述乙酸乙腈溶液的体积浓度为1％。优选地，所述氨水甲醇溶液的体积浓度为5％。本专利技术的有益效果在于：本专利技术建立了简便、快速并能有效避免样品中基质干扰的样品前处理方法，将此前处理方法结合LC-MS/MS应用于鸡蛋中金刚烷胺定性确证和定量检测，平均回收率为96.60％～100.19％，平均相本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鸡蛋中金刚烷胺残留量的LC-MS/MS测定方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：/n(1)提取：将鸡蛋样品加入内标物后均质，再加入0.5-5％乙酸乙腈溶液，涡旋，离心，取上清，再加入正己烷，涡旋，离心，弃去正己烷层，收集提取液；/n(2)净化：将阳离子固相萃取柱用甲醇活化，水平衡，然后将提取液上柱，控制流速在2-3滴/s，依次用1-3％盐酸水溶液、甲醇淋洗，抽干后用3-8％氨水甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，氮气吹干后用初始流动相复溶，涡旋后过0.22μm滤膜，得供试样品溶液；/n(3)标准品溶液的制备：将适量金刚烷胺和内标物用初始流动相稀释，配制成金刚烷胺分别为1、2、5、10μg/L、内标物浓度为2μg/L的标准品溶液；/n(4)测定：将供试样品溶液和标准品溶液在相同条件下分别进行LC-MS/MS测定，测定条件如下：/n液相色谱条件：/n色谱柱：Waters XBridge C18 Column(2.1×150mm，3.5μm)/n流动相：A相为0.1％甲酸水溶液；B相为甲醇溶液/n流速：0.3mL/min/n进样量：5μL/n梯度洗脱：梯度洗脱程序见下表：/n

【技术特征摘要】
1.一种鸡蛋中金刚烷胺残留量的LC-MS/MS测定方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
(1)提取：将鸡蛋样品加入内标物后均质，再加入0.5-5％乙酸乙腈溶液，涡旋，离心，取上清，再加入正己烷，涡旋，离心，弃去正己烷层，收集提取液；
(2)净化：将阳离子固相萃取柱用甲醇活化，水平衡，然后将提取液上柱，控制流速在2-3滴/s，依次用1-3％盐酸水溶液、甲醇淋洗，抽干后用3-8％氨水甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，氮气吹干后用初始流动相复溶，涡旋后过0.22μm滤膜，得供试样品溶液；
(3)标准品溶液的制备：将适量金刚烷胺和内标物用初始流动相稀释，配制成金刚烷胺分别为1、2、5、10μg/L、内标物浓度为2μg/L的标准品溶液；
(4)测定：将供试样品溶液和标准品溶液在相同条件下分别进行LC-MS/MS测定，测定条件如下：
液相色谱条件：
色谱柱：WatersXBridgeC18Column(2.1×150mm，3.5μm)
流动相：A相为0.1％甲酸水溶液；B相为甲醇溶液
流速：0.3mL/min
进样量：5μL
梯度洗脱：梯度洗脱程序见下表：









时间/min
A/％
B/％


0
90
10


1
90
10


5
10
90


6
...

【专利技术属性】
技术研发人员：张美，朱莉莎，徐飘飘，曾婧，向文婷，陈玉霜，彭大鹏，
申请(专利权)人：武汉工控检验检测有限公司，华中农业大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42