一种基于单分散聚合物检测免疫球蛋白IgG的方法及其应用技术

本发明专利技术提供一种基于单分散聚合物检测免疫球蛋白IgG的方法及其应用。所述方法为：(1)将待测样品转移至固相萃取柱中，经过亲和色谱固相萃取后淋洗，而后洗脱得到洗脱液；所述固相萃取柱的填料包括：单分散聚合物微球和以共价键连接在所述单分散聚合物微球上的蛋白G；(2)使用高效液相体积排阻色谱法对洗脱液进行分析，得到待测样品中的免疫球蛋白IgG的含量。所述方法利用单分散聚合物微球作为蛋白G的结合基质，能够捕获各种亚型的IgG，不捕获样品中的其他蛋白，灵敏度和特异性较好，再采用高效液相体积排阻色谱法进行定量分析，所得色谱图的峰型较好、无分叉和拖尾，适合于食品和保健品等复杂基质样品的分析。

【技术实现步骤摘要】
一种基于单分散聚合物检测免疫球蛋白IgG的方法及其应用
本专利技术涉及样品分析测定领域，具体涉及一种基于单分散聚合物检测免疫球蛋白IgG的方法及其应用，尤其涉及一种基于单分散聚合物亲和色谱固相萃取-液相色谱法检测免疫球蛋白IgG的方法及其应用。
技术介绍
免疫球蛋白(Immunoglobulin，Ig)是一组具有抗体活性的蛋白质，包括IgG、IgA、IgM、IgD和IgE共5类，其中IgG是人体血清免疫球蛋白的主要成分。近年来，越来越多的食品和保健品都添加了以IgG为主的免疫球蛋白，使其具有调节人体代谢、增强机体免疫力、抗感染等多种功能。目前，IgG的检测方法主要包括酶联免疫吸附法、高效液相色谱法、免疫胶体金法和毛细管电泳法等，其中，高效液相色谱法检测IgG具有灵敏度高、分析速度快和检出限低等特点。高效液相色谱法中使用较多的测定免疫球蛋白的方法是通过在线的ProteinG的分析柱来进行在线分析测定含量。然而，该方法存在着以下缺陷：1、绝大多数食品的基质较为复杂，由于没有经过前处理，杂蛋白会与IgG一起出峰，导致测定的结果偏高很大本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于单分散聚合物检测免疫球蛋白IgG的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：/n(1)将待测样品转移至固相萃取柱中，经过亲和色谱固相萃取后淋洗，而后洗脱得到洗脱液；/n所述固相萃取柱的填料包括：单分散聚合物微球和以共价键连接在所述单分散聚合物微球上的蛋白G；/n(2)使用高效液相体积排阻色谱法对步骤(1)所得洗脱液进行分析，得到所述待测样品中的免疫球蛋白IgG的含量。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于单分散聚合物检测免疫球蛋白IgG的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)将待测样品转移至固相萃取柱中，经过亲和色谱固相萃取后淋洗，而后洗脱得到洗脱液；
所述固相萃取柱的填料包括：单分散聚合物微球和以共价键连接在所述单分散聚合物微球上的蛋白G；
(2)使用高效液相体积排阻色谱法对步骤(1)所得洗脱液进行分析，得到所述待测样品中的免疫球蛋白IgG的含量。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述单分散聚合物微球的粒径为10～150μm，孔径为10～150nm；
优选地，步骤(1)中所述单分散聚合物微球的材料包括聚苯乙烯、聚乙烯吡咯烷酮或聚丙烯酸酯中的任意一种或两种以上的组合；
优选地，步骤(1)中所述单分散聚合物微球的制备方法包括乳液聚合、悬浮聚合、分散聚合或种子溶胀聚合中的任意一种或至少两种的组合。


3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述待测样品在转移前经过预处理，所述预处理包括溶解、稀释和过滤；
优选地，所述过滤为使用0.45μm微孔滤膜进行过滤。


4.根据权利要求1～3任一项所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述固相萃取柱在使用前还包括活化的操作，所述活化的方法为：依次使用双蒸水和PBS缓冲液冲洗所述固相萃取柱进行活化；
优选地，所述双蒸水与固相萃取柱中填料的体积比为(4.5～5.5):1，优选为5:1；
优选地，所述PBS缓冲液与固相萃取柱中填料的体积比为(8～12):1，优选为10:1。


5.根据权利要求1～4任一项所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述待测样品与固相萃取柱中填料的体积比为(0.5～1.5):1，优选为1:1；
优选地，步骤(1)中所述淋洗使用的淋洗液为PBS缓冲溶液；
优选地，所述淋洗液的pH为5.0～7.9，优选为6.5；
优选地，所述淋洗液与固相萃取柱中填料的体积比为(3.0～6.0):1，优选为5:1。


6.根据权利要求1～5任一项所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述洗脱使用的溶液为乙酸钠-乙酸缓冲溶液；
优选地，所述乙酸钠-乙酸缓冲溶液的pH为1.0～4.0...

【专利技术属性】
技术研发人员：张勇，侯玉，
申请(专利权)人：纳谱分析技术苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32