一种微粒免疫检测法，其特征是将标本稀释成不同浓度（可用本法在反应孔中稀释），分别加入反应孔，使各浓度反应结果叠加；反应后将上清液或稀释上清液吸入另一孔对照反应显示，或在同一孔中分步反应显示，再算出沉集物的显示值，查出待测物浓度。可减少ｈｏｏｋ效应，省去洗涤。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种医用免疫检测法，特别是一种用一份标本不同浓度反应和 对照显示反应产物的微粒免疫检测法。
技术介绍
现有的微粒固相检测法的原理是以微粒为载体，在液相中捕获待测物，形 成微粒免疫复合物，再使微粒免疫复合物沉降，去掉上清液，洗涤后检测沉淀物的显 示值，算出标本中待测物浓度。现有的磁性酶联免疫夹心法用针对待测抗原的一株单 克隆抗体标记酶AKP，另外一株单克隆抗体标记荧光素FITC;检测时将待测抗原与AKP 标单抗和FITC标单抗混匀结合形成"夹心三明治"，加入包被有羊抗FITC抗体的磁 性微粒，反应后外加磁场沉淀，去掉上清液，洗涤沉淀物，加入底物显示结果。以上 两法检测高浓度标本时都有hook效应(太高浓度待测物呈假阴性)，而且都需反复洗 涤以除去未结合的标记物。
技术实现思路
本专利技术的目的是建立一种可减少hook效应和可不用常规洗涤的微粒免疫检测法。 本专利技术的目的是这样实现的，将同一待测标本稀释成不同浓度，在操作过程中分 别加入反应管或孔；反应后将部分或全部上清液(或稀释的上清液)吸入另一孔对照 反应显示，或将上清液(或稀释的上清液)和沉集物在同一反应孔中分步反应显示， 再算出沉集物的显示值，査出待测物浓度。 方案分述如下1.用微量稀释法在反应孔或管(可预先封闭蛋白结合位点)中用稀释液或试剂稀释待测标本，加入试剂I (比如标记的抗体)，反应后将未稀释标本加入该反应孔； 反应后在该孔中加入试剂II(已包被另一株单抗或抗抗体或金葡菌A蛋白等的磁性微 粒)；反应后在反应孔底侧部或侧面、上侧部外加磁场，使沉集物积于孔底或孔壁的 一侧；取部分或全部上清液(或稀释上清液)加入另一孔(孔2),去掉原孔(孔l) 上清液(或保留部分上清液在孔l)，分别加入显示底物，反应后加入终止液，测显示 值，对照孔1和孔2及空白孔显示值算出沉集物的显示值，查出待测物浓度。也可 待沉集物沉淀堆积于孔底一侧后，在磁场固定下(或离心固定)，去掉部分或全部上清液，将洗稀液和/或底物液加入该孔，反应一定时间后，测显示值；然后去掉磁场， 使沉淀物重悬混匀，再反应一定时间后，再使沉集物沉淀于孔底一侧，再测上、膚液显 示值，算出待测物浓度。2. 微量稀释法在反应孔(可预先封闭蛋白结合位点)中先加入稀释液或试剂; 用一尖头物(比如微量加样器的吸嘴)置入待稀释的标本中，使尖头外面蘸湿(或将 液体吸入再打出，使尖头里外面都蘸湿)；移出尖头，在管壁接触片刻或一纸垫上轻 点一下，除去多余液体；将尖头置入反应孔的液体中，使尖头所蘸标本微量进入液体 中，再移出尖头，由此达到高倍数直接稀释的目的。以上方案中也可将标本稀释成多种浓度分多步加入；标记用的荧光素也可用其他 适合标记的物质(比如地高辛、生物素等)替代；磁性微粒也可用血球、胶乳或聚乙 二醇等可用于分离的试剂替代；标记用的酶也可用荧光素、发光物、同位素、稀土元素等替代。分配上清液时，可以1比1或其他比例分配。也可标记抗原，检测相应抗 体。方案特点1.试剂I、试剂II和标本的适当比例可使标本的各浓度得以充分反应显示，显示 值可以叠加，使高浓度标本的显示值大于某一阈值，提示应作进一步稀释定量，从而 减少或排除hook效应。取上清液另孔对照测定或原孔对照测定，可算出沉集物的显 示值，故可省去常规洗涤。2微量稀释法可直接在反应孔中作高倍数稀释，简便节省。3. 磁性分离时在反应孔底侧部或侧面、上侧部放置磁体，可使沉集物积于孔壁一 侧，故可直接在该孔比色。4. 预先封闭反应孔蛋白结合位点可减少塑料孔对蛋白的吸附，可先加试剂后加 标本。以上特点可分别组合使用或与别的方法组合使用。 具体实施例方式实施例(一)差异夹心法(两孔)检测甲胎蛋白(AFP)取3 50W稀释液加入反应孔中，用一微量加样器取一干燥洁净吸嘴，将吸嘴置 入标本中，使吸嘴尖头外面被标本蘸湿，移出吸嘴，在管壁接触片刻，再插入反应孔 的稀释液中，再移出吸嘴；加入试剂I (5 50W酶AKP标记单抗、5 5Cmi荧光素FITC标记单抗)，混匀，37'C反应后将未稀释标本加入该孔，混匀，37'C反应后加入 试剂II (已包被抗FITC抗体的磁性微粒)10 100W，混匀，37'C反应后在孔底侧部 外加磁场，使沉集物堆于孔底的一侧。在磁场中固定沉淀物，去掉原孔(孔1)中全 部上清液，加入洗稀液，再将孔l中洗稀液移入孔2;去掉磁场，在孔1和孔2中分 别加入适量显示底物，混匀反应后分别加入适量终止液，测吸光度A值，对照两孔A 值及空白孔A值算出沉淀物的显示值，从标准曲线查出AFP浓度。 实施例(二)差异夹心法(单孔)检测C肽取试剂I (10 50W酶HRP标记单抗、10 50W荧光素FITC标记单抗)加入反 应孔(已预封闭)；用一微量加样器取一干燥洁净吸嘴，将吸嘴置入标本中，使吸嘴 尖头外面被标本蘸湿，移出吸嘴，在管壁接触片刻，再插入反应孔的试剂I中并移出 吸嘴，混匀，37'C反应后加入试剂n (己包被抗FITC抗体的磁性微粒)20 100W， 混匀，37'C反应后在孔底侧部外加磁场，使沉集物沉淀于孔底的一侧。在磁场中固定 沉淀物，去掉孔中上清液，加入底物液，37'C反应后，测吸光度A值；然后去掉磁场， 使沉淀物重悬混匀，反应一定时间后，再使之沉淀于孔底一侧，再测上清液吸光度A 值，计算A值差并校正沉淀物对上清液A值的影响，査出C肽浓度。实施例(三)差异竞争法检测促甲状腺素(TSH)取5 50W标本加入反应孔中，加入试剂K5 50W抗TSH抗体(兔抗人)和5 酶标记TSH抗原)，混匀，37i:反应后加入试剂n (已包被羊抗兔抗体的磁性微 粒)10 10Cmi，混匀，37'C反应后在孔底侧部外加磁场，使沉集物堆于孔底的一侧。 在磁场中固定沉淀物，去掉原孔(孔l)中全部上清液，加入洗稀液，再将孔l中洗 稀液移入孔2;在孔1和孔2中分别加入适量显示底物，混匀反应后分别加入适量终 止液，测吸光度A值，对照两孔A值及空白孔A值算出沉淀物的显示值，从标准曲线 査出TSH浓度。权利要求1一种微粒免疫检测法，其特征是将同一待测标本稀释成不同浓度，分别加入反应孔；反应后将上清液(或稀释上清液)吸入另一孔对照反应显示，或将上清液(或稀释上清液)和沉集物在同一孔中分步反应显示，再算出沉集物的显示值，查出待测物浓度。2.根据权利要求1所述检测法，用磁性分离时在反应孔底侧部或侧面、上侧部放 置磁体，使沉集物沉积于孔底或孔壁的一侧。3.根据权利要求1所述检测法，微量稀释法是用一尖头物蘸取微量标本，置入反 应孔的液体中，使尖头上标本微量进入液中。4.根据权利要求1所述检测法，预先封闭反应孔蛋白结合位点后，可先加试剂后 加标本。全文摘要一种微粒免疫检测法，其特征是将标本稀释成不同浓度(可用本法在反应孔中稀释)，分别加入反应孔，使各浓度反应结果叠加；反应后将上清液或稀释上清液吸入另一孔对照反应显示，或在同一孔中分步反应显示，再算出沉集物的显示值，查出待测物浓度。可减少hook效应，省去洗涤。文档编号G01N33/543GK101408543SQ20071018032公开日2009年4月15日 申请日期2007年10月13日 优先权日2007年10月13日专利技术者陈纯美 申请人:陈纯美本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种微粒免疫检测法，其特征是将同一待测标本稀释成不同浓度，分别加入反应孔；反应后将上清液（或稀释上清液）吸入另一孔对照反应显示，或将上清液（或稀释上清液）和沉集物在同一孔中分步反应显示，再算出沉集物的显示值，查出待测物浓度。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：陈纯美，
申请(专利权)人：陈纯美，
类型：发明
国别省市：35[中国|福建]
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。