检测人TERT启动子突变的引物和探针、试剂盒和装置制造方法及图纸

本申请涉及基因突变检测领域，具体讲，涉及一种检测人TERT启动子突变的引物和探针、试剂盒和装置。该试剂盒检测复杂背景下的靶标序列灵敏度可达0.001％，即突变基因组DNA达到总DNA的0.001％即可检出。

Primers, probes, kits and devices for detection of human TERT promoter mutations

【技术实现步骤摘要】
检测人TERT启动子突变的引物和探针、试剂盒和装置
本申请涉及基因突变检测领域，具体讲，涉及一种检测人TERT启动子突变的引物和探针、试剂盒和装置。
技术介绍
端粒酶逆转录酶(telomerasereversetranscriptase，TERT)是端粒酶的催化亚单位，定位于5号染色体短臂的最末端(5p15.33)，为1个单拷贝基因，长度为40kb，由16个外显子和15个内含子组成，其中核心启动子区为330bp。端粒酶重新激活是细胞癌变的一个重要细胞生物学异常事件，是细胞永生化及肿瘤发生的关键步骤。TERT启动子突变有两种类型，分别发生在TERT转录起始位点上游-124和-146bp处，命名为C228T和C250T。TERT启动子检测对胶质瘤的诊断具有重要意义。近年来，微滴式数字聚合酶链反应(DropletDigitalPCR，ddPCR)由于实现了超灵敏检测和绝对定量而受到越来越多的关注。微滴式数字PCR系统在传统的PCR扩增前对样品进行微滴化处理，其中每个微滴或不含待检核酸靶分子，或者含有一个至数个待检核酸靶分子。经PCR扩增后，对本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测人TERT启动子突变的微滴PCR试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有TERT C228T ddPCR反应液和TERT C250T ddPCR反应液；/n所述TERT C228T ddPCR反应液中含有用于检测TERT 228号密码子突变的引物和探针：由SEQ ID NO:1所示的上游引物，由SEQ ID NO:2所示的下游引物，由SEQ ID NO:3所示的野生型探针和SEQ ID NO:4所示的突变型探针；/n所述TERT C250T ddPCR反应液中含有用于检测TERT 250号密码子突变的引物和探针：由SEQ ID NO:1所示的上游引物，由SEQ ID NO:2所示的...

【技术特征摘要】
1.一种用于检测人TERT启动子突变的微滴PCR试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有TERTC228TddPCR反应液和TERTC250TddPCR反应液；
所述TERTC228TddPCR反应液中含有用于检测TERT228号密码子突变的引物和探针：由SEQIDNO:1所示的上游引物，由SEQIDNO:2所示的下游引物，由SEQIDNO:3所示的野生型探针和SEQIDNO:4所示的突变型探针；
所述TERTC250TddPCR反应液中含有用于检测TERT250号密码子突变的引物和探针：由SEQIDNO:1所示的上游引物，由SEQIDNO:2所示的下游引物，由SEQIDNO:5所示的野生型探针和SEQIDNO:6所示的突变型探针。


2.根据权利要求1所述的微滴PCR试剂盒，其特征在于，所述探针均带有荧光基团和淬灭基团，所述野生型探针与所述突变型探针的荧光基团不同；
优选地，所述荧光基团选自FAM、VIC、HEX、Cy5和Cy3，所述淬灭基团选自MGB、BQH1、TAMARA和BHQ2；
进一步优选的，所述野生型探针的荧光基团选自VIC，所述野生型探针的淬灭基团选自MGB，所述突变型探针的荧光基团选自FAM、所述突变型探针的淬灭基团选自MGB。


3.根据权利要求1所述的微滴PCR试剂盒，其特征在于，引物和探针的浓度为0.1～5μM，优选的，引物的浓度为1.8μM，探针的浓度为0.4μM。


4.根据权利要求1所述的微滴PCR试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还含有ddPCRMIX3，所述ddPCRMIX3中的主要成分包括dNTPs、KCl、Tris-HCl、MgCl2、DTT和Taq酶。


5.根据权利要求1所述的微滴PCR试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还含有对照品，所述对照品包括阴性对照和阳性对照，所述阴性对照的主要成分为工艺用水，所述阳性对照的主要成分为由SEQIDNO:7～SEQIDNO:9所示的质粒混合液。


6.根据权利要求1所述的微滴PCR试剂盒，其特征在于，所述微滴PCR试剂盒的待测样本选自石蜡包埋组织切片、穿刺组织、胸水、全血、...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗韬，葛佳，李云航，肖晓，谢立群，
申请(专利权)人：上海睿昂基因科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31