【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子生物学，尤其涉及新冠病毒感染康复的生物标志物及筛选方法、试剂盒。
技术介绍
1、新型冠状病毒感染，世界卫生组织命名为“2019冠状病毒病”。长期covid即长新冠是一种经常使人衰弱的疾病，目前已经确定了covid-19的200多种症状，对多个器官系统有影响。据估计，全世界至少有65万人患有长期covid，且病例每天都在增加。表观遗传机制似乎是covid-19病理生理学和疾病严重程度的重要组成部分，这些机制已在sars-cov-2以及其他病毒感染中发现，如果这些机制得到证实，那么影响dna甲基化的表观遗传干预可以作为一级和/或二级预防选择。
2、早至2020年5月，就有文章报道：dna甲基化在sars-cov-2感染中发挥重要作用，dna甲基化具体包括：ace2甲基化和合胞体基因dna甲基化。病毒感染后合胞体的形成在新冠病毒感染后非常普遍，合胞体与高传染性和细胞因子风暴的形成也存在一定的关联；部分人群的ace2，syncytin 1和syncytin 2基因启动子区cpg岛出现去甲基化，导致这些基因的高表达，从而这一类人群更易感。相关文章研究发现，通过dna甲基化芯片比较分析新冠病毒感染者和未感染者，发现外周循环血dna全基因组水平的cpg甲基化并没有显著差异；病毒感染相关的dmrs 75％都位于启动子区或近启动子区；dmrs相关基因与免疫应答、病毒感染和白细胞激活等信号通路相关；发现77个dmrs可以预测covid-19的严重程度；还有研究显示，通过850k甲基化芯片差异甲基化分析，筛选出来35个“
技术实现思路
1、本专利技术的第一个方面提供了新冠病毒感染康复的生物标志物，所述生物标志物包括tac1、cdo1、hoxa9、zfp42、sox17、rassf1a、shox2。
2、本专利技术的第二个方面提供了含有新冠病毒感染康复的生物标志物的检测试剂。
3、本专利技术的第三个方面提供了新冠病毒感染康复的生物标志物的检测试剂在检测新冠病毒感染后康复程度中的应用。
4、本专利技术的第四个方面提供了含有新冠病毒感染康复的生物标志物的试剂盒，所述试剂盒包括核酸扩增试剂，阴性参考品和阳性参考品。
5、本专利技术的第五个方面提供了新冠病毒感染康复的生物标志物的试剂盒的使用方法，
6、s1.抽提游离dna；
7、s2.甲基化检测前样本处理；
8、s3.pcr荧光检测检测权利要求1所述的生物标志物的含量：荧光pcr试剂准备，pcr扩增，pcr检测；
9、s4.结果判定。
10、本专利技术的第六个方面提供了新冠病毒感染康复的生物标志物的试剂盒在检测新冠病毒感染后康复程度中的应用。
11、本专利技术的第七个方面提供了新冠病毒感染后康复程度的检测方法，所述检测方法包括：
12、s1.采样；
13、s2.dna甲基化检测权利要求1所述的生物标志物的含量；
14、s3.结果判定。
15、本专利技术的第八个方面提供了新冠病毒感染后康复程度的检测方法在检测新冠病毒感染后康复程度中的应用。
16、在一些实施方式中，所述结果判定的具体标准均为：0.1-0.4为较低；0.4-0.628为偏低；0.628-0.9为中等；0.9-0.95为偏高；0.95-1为较高。
17、游离dna生物标志物检测是通过检测肺部细胞受损伤或死亡后释放到血浆中的片段化dna，这些片段化dna携带有细胞受病毒侵染后损伤的相关信息。新冠病毒通过结合细胞表面ace2受体，经细胞内吞进入细胞后，诱发细胞多基因的异常表达包括syncytin1和syncytin2并诱导合胞体的形成，从而在短时间内释放大量的病毒颗粒，引发炎症因子风暴，招引大量免疫细胞攻击受感染细胞，进而导致细胞损伤或死亡。这些细胞死亡后就会释放携带有相关细胞表观遗传学变化信息的片段化dna。通过检测血浆游离dna的这些生物标志物，可以辅助判断新冠感染后是否造成了肺部相关细胞的损伤以及功能恢复情况。
18、许多研究已经表明，新冠病毒侵染呼吸道上皮细胞，免疫细胞在病毒侵染部位聚集攻击病毒感染细胞，并产生大量il-6，il-1，tnf，ifns等细胞因子，造成呼吸道上皮细胞的损伤甚至死亡。dna甲基化在病毒的内吞和合胞体形成过程中发挥重要作用，这些被病毒侵染的上皮细胞死亡后，携带甲基化标志物的dna片段被释放进入血液循环。游离dna检测通过提取样本血浆游离dna，采用高灵敏度的特异性多重荧光定量pcr技术对多靶标标志物进行检测，分析得出相关基因dna甲基化水平，该检测结果可以间接反应肺部呼吸道上皮细胞损伤情况，并提示康复进展。
19、所述结果判定的具体标准均为：甲基化分值0.1-0.4为较低；甲基化分值0.4-0.628为偏低；甲基化分值0.628-0.9为中等；甲基化分值0.9-0.95为偏高；甲基化分值0.95-1为较高。
20、如果检测结果是阳性，表示该血液样本检测出与相关基因的甲基化dna，提示患者在新冠病毒感染后依然存在一定的呼吸道上皮细胞的损伤，这些损伤可能会使新冠相关症状持续，如：呼吸急促、易疲劳、咳嗽、运动后胸闷胸疼等呼吸道症状。因此，建议患者要高度重视，并注意多休息，不熬夜，避免从事高强度体力劳动，增强营养摄入并均衡饮食，保持良好生活习惯。如果患者已经出现相关临床症状，如：运动后呼吸急促、易疲劳、咳嗽、胸闷、胸痛等，请及时到医院做相应的影像学检查，如：肺部ct检查等，以防患于未然。同时也建议患者在本次检测两至三周后进行本项检测的复查，以让患者能够更全面掌握身体健康恢复情况。
21、如果检测结果是阳性，表示该血液游离dna样本中未检测出相关基因的dna甲基化，提示患者在新冠病毒感染后呼吸道上皮损伤程度较低或恢复良好，或者相关病变还未发展到足以在血浆游离dna样本中检测到的程度，而不足以在血浆游离dna中检测到相关dna甲基化标志物。建议患者保持良好的生活习惯和饮食结构，每3-6个月筛查一次，以让患者能够更全面掌握身体健康状况。
22、由于dna甲基化是一种表观遗传学修饰，受多因素影响，如：药物治疗、酗酒、抽烟、睡眠不足、病毒感染、肺部微小结节等其他基础疾病，都有可能诱发体内有关细胞出现异常的dna甲基化。因此，本专利技术的检测结果仅供辅助参考，不作为临床诊断依据。
23、与现有技术相比，本发本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.新冠病毒感染康复的生物标志物，其特征在于，所述生物标志物包括TAC1、CDO1、HOXA9、ZFP42、SOX17、RASSF1A、SHOX2。
2.含有权利要求1所述的新冠病毒感染康复的生物标志物的检测试剂。
3.权利要求2所述的新冠病毒感染康复的生物标志物的检测试剂在检测新冠病毒感染后康复程度中的应用。
4.含有权利要求1所述的新冠病毒感染康复的生物标志物的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括核酸扩增试剂，阴性参考品和阳性参考品。
5.权利要求4所述的新冠病毒感染康复的生物标志物的试剂盒的使用方法，其特征在于，
6.权利要求4所述的新冠病毒感染康复的生物标志物的试剂盒在检测新冠病毒感染后康复程度中的应用。
7.新冠病毒感染后康复程度的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括：
8.权利要求7所述的检测方法在检测新冠病毒感染后康复程度中的应用。
9.根据权利要求5所述的使用方法或权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述结果判定的具体标准均为：甲基化分值0.1-0.4为较低；甲基化分
10.根据权利要求5所述的使用方法或权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述结果判定的具体标准均为：甲基化分值0.628-0.9为中等；甲基化分值0.9-0.95为偏高；甲基化分值0.95-1为较高。
...【技术特征摘要】
1.新冠病毒感染康复的生物标志物，其特征在于，所述生物标志物包括tac1、cdo1、hoxa9、zfp42、sox17、rassf1a、shox2。
2.含有权利要求1所述的新冠病毒感染康复的生物标志物的检测试剂。
3.权利要求2所述的新冠病毒感染康复的生物标志物的检测试剂在检测新冠病毒感染后康复程度中的应用。
4.含有权利要求1所述的新冠病毒感染康复的生物标志物的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括核酸扩增试剂，阴性参考品和阳性参考品。
5.权利要求4所述的新冠病毒感染康复的生物标志物的试剂盒的使用方法，其特征在于，
6.权利要求4所述的新冠病毒感染康复...
【专利技术属性】
技术研发人员：柯中和，熊慧，肖晓，李亚洲，李西艳，何俊彦，谢立群，
申请(专利权)人：上海睿昂基因科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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