线粒体在制备治疗新冠肺炎药物中的应用制造技术

本发明专利技术属于生物医药领域，特别涉及线粒体在制备治疗新冠肺炎药物中的应用，为给新冠肺炎的综合治疗寻找一种新的免疫治疗方案，本发明专利技术对活动期新冠肺炎患者外周血淋巴细胞中的线粒体进行研究发现，线粒体在新冠肺炎患者的淋巴细胞内的膜通透性出现异常，触发下游相关凋亡信号通路的激活，导致免疫调控相关特异性细胞的过度凋亡，提示线粒体相关触发凋亡信号通路的干预有望应用于新冠肺炎的综合治疗中，制备治疗新冠肺炎药物的形式，以减轻新冠肺炎患者病情程度及降低死亡率，最终达到细胞免疫治疗的目的。

Application of mitochondria in novel coronavirus pneumonia preparation

【技术实现步骤摘要】
线粒体在制备治疗新冠肺炎药物中的应用
本专利技术涉及细胞治疗
，更具体地，涉及线粒体在制备治疗新冠肺炎药物中的应用。
技术介绍
冠状病毒病2019(COVID-19)是由急性呼吸综合症冠状病毒2(SARS-CoV-2)引起的一种呼吸系统疾病，已成为大流行病。大多数COVID-19患者表现出轻度至中度症状，但约15％进展为严重的肺炎，约5％最终发展为急性呼吸窘迫综合征(ARDS)，败血性休克和/或多器官功能衰竭。临床治疗的主要内容包括对症管理和氧气治疗，并为呼吸衰竭患者提供机械通气。尽管正在积极测试包括核苷酸类似物remdesivir在内的几种抗病毒药物对抗COVID-19的效果，但尚未存在治疗COVID-19的有效药。除了直接针对病毒或阻断病毒进入的疫苗开发和方法外，解决感染的免疫病理学问题的治疗也成为主要关注点。SARS-CoV-2感染可激活先天性和适应性免疫反应。但是，不受控制的炎性先天反应和受损的适应性免疫反应可能导致局部和全身有害的组织损伤。前期的临床数据表明：在严重COVID-19的患者中，淋巴细胞减少症是一个常见特征，T细胞数量急剧减少，中性粒细胞计数和中性粒细胞与淋巴细胞之比的增加通常表明疾病严重程度较高，临床预后较差。在康复或恢复期的患者中，T细胞数量正常化。这些提示干预COVID-19患者T细胞有助于减轻病情和提高存活率，现有技术缺乏新冠肺炎的T淋巴细胞干预治疗的有效方法。
技术实现思路
为了克服上述现有技术的不足，本专利技术的首要目的是一种治疗或者辅助治疗新冠肺炎的药物。本专利技术的目的是通过以下方案实现：一种用于治疗或者辅助治疗新冠肺炎的药物，所述药物的活性成分能够干预线粒体介导的T淋巴细胞过度凋亡。线粒体不仅具有重要的细胞代谢调控功能，也是介导细胞凋亡中重要途径之一。本专利技术通过对新冠肺炎成年患者进行研究发现，COVID-19成年患者外周血T淋巴细胞存在过度凋亡，线粒体凋亡信号在新冠肺炎患者的T淋巴细胞内明显增强，而外源性介导的凋亡途径变化不明显，提示抑制线粒体介导细胞凋亡有望应用于新冠肺炎的综合治疗中。具体地，所述药物是通过抑制机体感染SARS-CoV-2后淋巴细胞过度凋亡、促进体内病毒清除来治疗新冠肺炎。优选的，所述线粒体是从细胞或者组织中分离的线粒体，更优选的，所述线粒体为人体淋巴细胞线粒体。进一步地，本专利技术上述用于治疗新冠肺炎的药物，还包括药学上可以接受的辅剂，通过与药学上可以接受的辅剂配合使用，能够保证治疗效果的同时，还能够提高药物的安全性，有效性和稳定性。进一步地，本专利技术上述药物的剂型为注射给药剂型或者经胃肠道给药剂型，以增加药物的适用范围；具体地，经胃肠道给给药剂型包括常用的散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、滴剂、混悬剂等；注射给药剂型包括常用的针剂(例如静脉注射剂、肌内注射剂、皮下注射剂、皮内注射剂)。更进一步地，当所述药物的剂型为注射给药剂型时，使用时将药物与生理盐水混合制成溶液。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术对活动期新冠肺炎患者淋巴细胞中的线粒体进行研究发现，线粒体在新冠肺炎患者的淋巴细胞内的膜通透性出现异常，触发下游相关凋亡信号通路的激活，导致免疫调控相关特异性细胞的过度凋亡，线粒体在新冠肺炎患者的淋巴细胞上的介导细胞凋亡相关指征增强——膜电势下降和细胞色素c泄漏增加等，提示抑制线粒体介导的淋巴细胞过度凋亡有望应用于新冠肺炎的综合治疗中，制备成治疗新冠肺炎药物的形式，以减轻新冠肺炎炎症，促进SARS-CoV-2的清除，最终达到细胞免疫治疗的目的。附图说明图1为COVID-19患者外周血淋巴细胞计数统计情况；提示COVID-19患者外周血淋巴细胞计数下降，且与病情相关；图中缩写：HC：HealthyControl；NSP：Non-severepatients；SP：Severepatients(*，p<0.05，**，p<0.01)；图2为COVID-19患者淋巴细胞凋亡情况；其中，图2A为流式细胞分析图；图2B淋巴细胞凋亡数目统计图；缩写：HC：HealthyControl；NSP：Non-severepatients；SP：Severepatients(**，p<0.01，***，p<0.001)；图3为COVID-19患者外周血淋巴细胞凋亡指示图(**，p<0.01，***，p<0.001)；图3A为流式细胞分析图，图3B为高线粒体膜电位淋巴细胞亚群占比分析图，图3C为淋巴细胞JC-1平均荧光强度分析图；图4为COVID-19患者外周血淋巴细胞内细胞色素c泄露情况分析图(**，p<0.01，***，p<0.001)。具体实施方式下面对本专利技术的具体实施方式作进一步说明。在此需要说明的是，对于这些实施方式的说明用于帮助理解本专利技术，但并不构成对本专利技术的限定。此外，下面所描述的本专利技术各个实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。下述实验例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。实施例1COVID-19患者的淋巴细胞的凋亡情况检测1、检测样品的收集：收集受试对象外周血：活动期COVID-19患者(记为NSP和SP)和健康人(记为HC)。2、检测方法，具体包括如下步骤：(1)3mL人外周静脉全血与生理盐水1：1比例混合稀释，稀释后全血缓慢加入到2mlFicoll淋巴细胞分离液液面上。(2)1800rpm，离心30min，得到单个核细胞层(PBMC所在的白膜层)。(3)吸取白膜层细胞，1％BSA缓冲液封闭后，进行流式染色标记淋巴细胞上Annexin-V/PI(Annexin-V-FITC，PI-PE，CD3-700，在常温下染色25min，上机检测，凋亡情况以Annexin-V+PI-CD3+Cells和Annexin-V+PI+CD3+Cells的百分数统计)。3、实验结果：如图1的结果所示，与HC组相比，COVID-19患者外周血淋巴细胞的Annexin-V和PI占比较高，表明：COVID-19患者的淋巴细胞凋亡指征明显增加，说明COVID-19患者外周血淋巴细胞存在过度凋亡。实施例2COVID-19患者的淋巴细胞线粒体膜电势检测试验1、检测样品的收集：收集受试对象外周血：活动期COVID-19患者(记为NSP和SP)和健康人(记为HC)。2、检测方法，具体包括如下步骤：(1)3mL人外周静脉全血与生理盐水1：1比例混合稀释，稀释后全血缓慢加入到2mlFicoll淋巴细胞分离液液面上。(2)1800rpm，离心30min，得到单个核细胞层(PBMC所在的白膜层)。(3)吸取白膜层细胞，进行流式染色标记淋巴细胞上JC-1染色(JC-1-F本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于治疗或者辅助治疗新冠肺炎的药物，其特征在于，所述药物的活性成分能够干预线粒体介导的T淋巴细胞过度凋亡。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于治疗或者辅助治疗新冠肺炎的药物，其特征在于，所述药物的活性成分能够干预线粒体介导的T淋巴细胞过度凋亡。


2.根据权利要求1所述的用于治疗或者辅助治疗新冠肺炎的药物，其特征在于，所述线粒体是从细胞或者组织中分离的线粒体。


3.根据权利要求2所述的用于治疗或者辅助治疗新冠肺炎的药物，其特征在于，所述线粒体为人...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄曦，杨扬，
申请(专利权)人：中山大学附属第五医院，
类型：发明
国别省市：广东;44