防止或减轻rtPA用药后出血转化的方法和药物技术

本申请涉及药物的应用，其通过干预外周血免疫细胞来减轻与rtPA治疗脑梗死相关的出血转化。更具体地，本申请应用能减少外周血免疫细胞迁移的CCL抑制剂和整合素α4抑制剂，来减少与rtPA用药相关的出血转化。

Methods and drugs to prevent or reduce bleeding transformation after rtPA administration

【技术实现步骤摘要】
防止或减轻rtPA用药后出血转化的方法和药物
本专利技术涉及防止或减轻重组组织型纤溶酶原激活物(rtPA)用药后出血转化的方法和药物。
技术介绍
组织型纤溶酶原激活物(tPA)是人体内正常存在的分子，除了如名称所示能促进纤溶酶原的激活之外，还有多种其他活性，例如可作为细胞因子，促进内皮细胞表达促炎分子和促血脑屏障渗漏分子(如基质金属蛋白酶，简称MMP)。rtPA是迄今唯一获批用于脑梗死的静脉溶栓的药物(商品名阿替普酶，由Boehringer供应中国市场)。但rtPA用药有严重副作用，例如出血转化，这可明显加重病人临床症状，甚至导致死亡。目前临床对于rtPA治疗脑梗死患者相关的出血转化尚无预防措施，只能在发现出血转化之后采取支持疗法，包括减少使用改善循环的药物、脱水降颅压等，但疗效不确切。一般认为，rtPA导致脑梗死患者出血转化的机制是，rtPA作用于脑内血管结构，导致血脑屏障完整性的降低和血管外基质(ECM)的溶解。在本申请之前，没有人认识到，rtPA对外周免疫细胞有直接作用，而这种直接作用对出血转化有影响。本申请人发现了这种直接作用，明确了免疫细胞参与脑梗死后出血转化病理损害的事实，并找到了能减轻与rtPA用药相关的出血转化的方法和药物。
技术实现思路
本申请涉及减轻rtPA用药后出血转化的方法和药物。本文中，“出血转化”是指rtPA用药后继发的出血，例如脑实质出血。本申请人发现，脑梗死后进行静脉rtPA溶栓治疗，可以引起外周血免疫细胞的快速反应，通过向中枢神经系统的迁移加重了血脑屏障的破坏和出血转化，因此rtPA对外周免疫细胞的活化可以作为减少rtPA治疗脑梗死相关出血转化的一个新靶点。为此，本申请涉及通过干预外周免疫细胞来减轻与rtPA用药相关的出血转化的方法。优选地，所述干预是抑制外周血免疫细胞的迁移。本文中，“免疫细胞”是指一般意义上的属于免疫系统的细胞。优选地，本申请的免疫细胞是在脑梗死部位及其周围血管中可见或增多的免疫细胞，或者是在出血转化区域可见或增多的免疫细胞。相应地，本申请涉及免疫细胞迁移抑制剂在制备预防rtPA用药后出血转化的药物中的用途。优选地，所述rtPA用药是为了治疗脑梗死。本文中，“免疫细胞迁移抑制剂”简称“迁移抑制剂”，是指减少或阻止外周血免疫细胞迁移的化合物或组合物。单独一种迁移抑制剂可以特异性抑制一种外周血免疫细胞的迁移，但更优选抑制不止一种外周血免疫细胞的迁移，例如抑制两种或两种以上、三种或三种以上、或者四种或四种以上外周血免疫细胞的迁移。另一方面，本申请还涉及免疫细胞迁移抑制剂与rtPA的药物组合，是用于脑梗死且预防出血转化的药物组合。又一方面，本申请涉及免疫细胞迁移抑制剂与rtPA联合用药，用于脑梗死病人且预防出血转化。还有一方面，本申请涉及防止或减少出血转化的方法，是先给药免疫细胞迁移抑制剂再给药rtPA，或同时给药。本申请免疫细胞迁移抑制剂的例子有，趋化因子抑制剂和整合素α4抑制剂。本申请的趋化因子抑制剂通过结合趋化因子或抑制趋化因子活性，使原本要受趋化因子驱动而迁移的免疫细胞不发生或少发生迁移。优选地，趋化因子抑制剂是CCL抑制剂。CCL是具有CC结构的趋化因子，其氨基端的头两个半胱氨酸(C)彼此相连、未间隔其它氨基酸。这种CC结构区别于CXC和CX3C结构，后两者是其N端头两个C之间分别插有一个或三个其它氨基酸。本申请的CCL抑制剂能结合CCL或抑制CCL的趋化活性。现已知的CCL趋化因子超过20种以上，它们分别能趋化不同的免疫细胞，并且单独一种CCL能趋化一种或一种以上的免疫细胞。例如，CCL2可趋化单核/巨噬细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞，CCL3和CCL7可趋化单核/巨噬细胞、嗜酸性粒细胞，CCL8可趋化单核/巨噬细胞，等等。相应地，单独一种CCL抑制剂可以抑制一种或一种以上CCL，例如抑制两种或两种以上、三种或三种以上、或者四种或四种以上CCL的作用。例如，Bindarit作为一种CCL抑制剂，能抑制CCL2、CCL7、CCL8三者。本申请的整合素α4抑制剂简称“α4抑制剂”，是指与α4整合素(即含α4亚基的整合素)结合或抑制α4整合素的化合物或组合物。整合素属于细胞表面粘附分子家族的一员，主要由α亚基和β亚基非共价结合成异二聚体多肽。目前已发现的α、β亚基各有超过10种以上。例如，α4亚基可以与多种β亚基结合，故本文的“α4整合素”或“含α4亚基的整合素”包括α4亚基与不同β亚基结合而成的整合素，常见的例如α4β1整合素、α4β7整合素。α4β1在所有的循环白细胞表面表达，可介导单核细胞和嗜酸性粒细胞与内皮细胞的粘附及其穿越内皮的迁移行为。故，对整合素的α4亚基进行阻断，可减少免疫细胞向病灶组织的浸润。α4β7在T细胞、B细胞、自然杀伤细胞和嗜酸性粒细胞上表达，可参与肠相关淋巴组织中的白细胞聚集。本申请α4抑制剂的例子有，抗α4整合素的抗体或可溶型α4配体等。在一个优选方面，本申请的抗α4整合素抗体是特异性抗α4亚基的抗体。例如，所述抗体与α4整合素的α4亚基结合、和/或至少部分地抑制α4整合素的活性(尤其结合活性或信号转导活性)，如抑制α4整合素与VCAM-1或与纤连蛋白的结合。抗α4亚基的抗体的一个实例是抗α4单克隆抗体。在另一优选方面，本申请的抗α4整合素抗体可以特异性针对一种α4整合素，也可以同时针对一种以上α4整合素，例如同时抗α4β1和α4β7的抗体。优选地，不管能抗几种α4整合素，本申请的抗α4整合素抗体都能有效抑制含α4亚基的整合素与其配体的结合。本申请的可溶型α4配体包括可溶性VCAM-1、其活性片段、或VCAM-1融合蛋白，例如双功能VCAM-1/Ig融合蛋白。例如，可溶型α4配体优先竞争细胞表面的α4整合素结合位点，引起与施用抗α4整合素抗体等效的作用。本申请的α4抑制剂还包括能结合α4配体但不激发α4整合素依赖性信号传递的可溶性α4整合素变体，它可作为野生型α4整合素的竞争抑制剂。本申请的α4抑制剂还包括抗α4整合素的抗体或可溶型α4配体与其它分子的融合体，所述其它分子例如免疫球蛋白(Ig)分子、Fc片段、免疫球蛋白重链C末端结构域、聚亚烷基二醇聚合物例如PEG，等等。本申请人取大鼠血液经体外处理制成血栓，再通过外科手术将该血栓导入大鼠大脑中动脉，建立了血栓栓塞性大鼠脑梗死模型。在造模后3小时之时，先是注射本申请的迁移抑制剂，不间隔地接着注射rtPA进行溶栓。在rtPA注射前以及注射后不同时点，分别从大鼠尾静脉和脑组织取样，分析多种免疫细胞亚群的数量(图1和3)，还用CD69来标记血样中活化的淋巴细胞的数量(图2)。已知CD69是最快响应免疫细胞活化信号的一种跨膜糖蛋白分子，因此，CD69+细胞数的变化反映了相应细胞亚群的活化状态。另外，用流式细胞术分析血样中外周血免疫细胞表达rtPA结合受体的情况(图4)。在手术后24小时之时，通过核磁扫描得出脑梗死体积本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.免疫细胞迁移抑制剂在制备预防rtPA用药后出血转化的药物中的用途。/n

【技术特征摘要】
1.免疫细胞迁移抑制剂在制备预防rtPA用药后出血转化的药物中的用途。


2.权利要求1的用途，其中的抑制剂是α4抑制剂。


3.权利要求2的用途，其中的抑制剂是抗α4整合素的抗体。


4.权利要求2的用途，其中的抑制剂是特异性针对整合素的α4亚基的抗体。


5.权利要求2的用途，其中的抑制剂是抗α4单克隆抗体。


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【专利技术属性】
技术研发人员：施福东，史凯斌，刘强，王晓英，贾冬梅，邹明，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京天坛医院，
类型：发明
国别省市：北京;11