一种绵羊肺炎支原体间接血凝检测方法的建立方法技术

本发明专利技术公开了一种绵羊肺炎支原体间接血凝检测方法的建立方法。该方法以对绵羊肺炎支原体黏附素基因P113的C端进行克隆表达得到的重组蛋白作为抗原，利用该重组蛋白抗原致敏健康绵羊红细胞，通过对同一批血清的IHA效价筛选其最佳的致敏浓度，最佳反应条件，建立了特异性强、敏感性以及符合率高并且操作简便的绵羊肺炎支原体间接血凝检测方法。可应用于兽医领域绵羊肺炎支原体的快速检测，为疾病预防、诊断和防控提供有力工具。

【技术实现步骤摘要】
一种绵羊肺炎支原体间接血凝检测方法的建立方法
本专利技术属于兽用生物制品检测
，具体地说，涉及一种绵羊肺炎支原体间接血凝检测方法的建立方法。
技术介绍
绵羊肺炎支原体(Mycoplasmaovipneumoniae)是一种重要的引起呼吸道疾病的病原，可导致山羊及绵羊的非典型性肺炎,绵羊肺炎支原体最早于1963年分离得到，此后在其他多个国家和地区相继发现，目前其在全球范围内分布广泛。由绵羊肺炎支原体引起的绵羊支原体肺炎在全球绵羊产业中造成非常大的经济损失。它能够与气管上皮细胞的纤毛结合并引起纤毛功能障碍，导致纤毛清除受损。此外，羊只感染绵羊肺炎支原体后，对其他如多杀性巴氏杆菌、溶血曼氏杆菌以及流感病毒等病原的易感性明显增加。绵羊支原体肺炎在我国流行同样十分广泛，危害十分严重。要想有效控制绵羊肺炎支原体的感染，需要采取综合性防治措施。其中，特异的诊断技术是综合防控的关键环节之一，对于发现传染源、开展流行病学调查以及动物检疫等都具有重要的作用。血清学诊断技术，对绵羊肺炎支原体的检测一直缺乏有效的血清学技术，国内赵萍等([1]赵萍,储岳峰本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种绵羊肺炎支原体间接血凝检测方法的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1)制备绵羊肺炎支原体抗原；/n2)制备绵羊红细胞并进行致敏处理；/n3)使用不同重组蛋白稀释浓度的绵羊肺炎支原体抗原致敏红细胞测定同一批血清的IHA血清效价，并确定最高血清效价所对应的抗原稀释度；/n4)利用步骤3)中稀释度确定间接血凝检测方法的反应条件和反应体系，建立绵羊肺炎支原体的间接血凝检测方法。/n

【技术特征摘要】
1.一种绵羊肺炎支原体间接血凝检测方法的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)制备绵羊肺炎支原体抗原；
2)制备绵羊红细胞并进行致敏处理；
3)使用不同重组蛋白稀释浓度的绵羊肺炎支原体抗原致敏红细胞测定同一批血清的IHA血清效价，并确定最高血清效价所对应的抗原稀释度；
4)利用步骤3)中稀释度确定间接血凝检测方法的反应条件和反应体系，建立绵羊肺炎支原体的间接血凝检测方法。


2.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，步骤1)中的制备绵羊肺炎支原体抗原具体为：诱导表达纯化绵羊肺炎支原体黏附素基因p113的C端重组蛋白工程菌，作为抗原，所述抗原的蛋白浓度为164μg/ml。


3.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，所述步骤2)中的制备绵羊红细胞具体为：无菌采取健康绵羊颈静脉血等体积加入灭菌的阿氏液，置于4℃冰箱静置，之后用纱布过滤，3000rmp\min离心10imn，弃去上清，反复洗涤5次，配制成5％的红细胞悬液；将5％红细胞悬液于磁力搅拌器上以低转速进行搅拌，并且逐滴加入1/5体积的2.5％的戊二醛,醛化5个小时。取1：20000鞣酸加入到等体积的5％的醛化红细胞悬液中震荡混匀，37℃孵育30m...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨发龙，王远微，刀筱芳，
申请(专利权)人：西南民族大学，
类型：发明
国别省市：四川;51