一种从芝麻蛋白中获得的具有降血压与降血糖活性的多肽制造技术

本发明专利技术属于农产品深加工技术领域，具体涉及一种芝麻活性多肽，该多肽由5个氨基酸组成，其序列为：His‑Pro‑Ser‑Pro‑Arg(HPSPR)。本发明专利技术芝麻多肽既能通过酶解芝麻蛋白分离纯化后获得，也可以采用化学固相合成方法人工合成。通过测定ACE抑制活力与DPP‑IV抑制活力发现：该多肽具有降血压与降血糖活性，可以作为功能成分用于制备药物、保健品、食品、日化用品等领域，具有广阔的市场前景。

【技术实现步骤摘要】
一种从芝麻蛋白中获得的具有降血压与降血糖活性的多肽
本专利技术属于植物蛋白深加工
，具体涉及一种来源于芝麻11S蛋白前体2的活性多肽HPSPR、制备方法以及其具有的抗氧化与降血糖活性应用。
技术介绍
目前，非传染慢性疾病（高血压、高血脂、糖尿病等）成为亟待解决的全球公共卫生问题。我国是高血压与糖尿病的高发国家。高血压与糖尿病及其它们的并发症，具有病程长、难以治愈、后遗症重等特点，不但加重国家卫生与家庭经济负担，也严重影响患者的生活质量。为治疗高血压与糖尿病，人类开发多种药物，这些药物虽然具有起效快等优点，但均有一定的副作用，长期服用对人体有一定的危害。为了减少或替换某些人工合成药物的使用，科研人员从水解食源蛋白中发现具有降血压肽、降糖肽（DPP-IV抑制肽），这些活性肽具有作用平缓、安全性高等优点。然而上述多肽多只针对某一靶点，如人体血管紧张素转换酶（ACE）或二肽激肽酶-IV（DPP-IV），而糖尿病与高血压往往呈现并发现象，因此，只针对某一靶点的活性肽，难以有效的预防与减缓高血压或糖尿病的发生发展。有科研人员从鸵鸟蛋蛋白、扁豆蛋白的水解液中发现多活性肽存在，如扁豆蛋白水解物具有降血压与抗氧化活性。因此，可以推测自然界中存在具有降血压与降血糖的多活性肽。将上述多肽应用于预防或辅助治疗高血压与糖尿病具有积极的社会价值与光明的市场价值。芝麻是我国居民喜爱的日常食物之一，年消费芝麻在150万吨左右。传统与现代医学认为芝麻具有营养保健功能，其营养保健功能除了芝麻素的贡献以外，作为芝麻的主要成分——芝麻蛋白也有贡献，其酶解物中发现抗氧化肽、降血压肽、螯合金属肽。为推动芝麻资源的充分利用，提高芝麻蛋白加工附加值，满足居民健康生活的需求，有必要开发具有降血压与降血糖的芝麻双活性肽。
技术实现思路
为满足人民健康生活的需求、替代人工合成的有毒副作用的降血压药与降血糖药，本专利技术目的在于提供一种来自芝麻蛋白的同时具有降血压和降血糖活性的多肽，该芝麻多肽具有活性高、制备工艺成熟，成本可控等优点，具有广阔的市场前景。本专利技术还提供了上述芝麻多肽的制备方法，以及其在制备具有降血压和/或降血糖药物方面的应用。为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：一种从芝麻蛋白中获得的具有降血压与降血糖活性的多肽，该多肽由5个氨基酸组成，其序列为：His-Pro-Ser-Pro-Arg（HPSPR，HR-5），源自芝麻11S蛋白前体2（11Sglobulinseedstorageprotein2precursor，11S_SESIN）。具体的，HPSPR源自芝麻11S蛋白前体2的88-92处，即SLPNYHPSPRLVYIE88-92。本专利技术公开了一种上述多肽的制备方法，其可以通过人工化学合成制备，如采用固相合成法按照本领域常规工艺制备多肽。本专利技术还公开了一种从芝麻蛋白中提取上述多肽的方法，其通过蛋白酶解、分离纯化等步骤制得；具体包括下述步骤：1）芝麻蛋白提取：将除杂后的芝麻粉碎、脱脂，加入蒸馏水，调节pH到10-12，离心后，收集上清液，调节pH到4-5，离心，收集沉淀，水洗，冷冻干燥，获得芝麻蛋白；2）蛋白酶解：将步骤1）所得芝麻蛋白，按1g:10-30mL（w/v）加入蒸馏水获得芝麻蛋白溶液，90-100℃加热15-40min，冷却至室温，将pH值调至1.5-2.5，加入芝麻蛋白质量0.5-2.5%(w/w)的胃蛋白酶，于30-50℃搅拌酶解2-6h，随后调节pH至7.5-9.0，加入芝麻蛋白质量0.5-2.5%(w/w)胰糜蛋白酶，于30-50℃酶解2-8h，调节pH至4.0-4.5，8000-10000r/min离心取上清液，4-10℃低温备用；3）分离纯化：将步骤2）所得上清液调节pH到7.0，采用两级超滤处理，透过液采用纳滤进行脱盐浓缩，然后采用葡聚糖凝胶柱层析法分离纯化，收集保留时间在275-330min的组分，冷冻真空干燥即得。将冷冻干燥获得的多肽样品，通过Nano-LC-ESI-MS/MS进行分析鉴定，鉴定具有降血压与降血糖活性的多肽的氨基酸序列为：His-Pro-Ser-Pro-Arg（HPSPR）。HPSPR源自芝麻11S蛋白前体2（11S_SESIN）88-92处，即SLPNYHPSPRLVYIE88-92。具体的，步骤2）中所述胰糜蛋白酶由酶活之比为6:1的胰蛋白酶与胰凝乳蛋白酶组成。具体的，步骤3）中所述的两级超滤中，一级超滤所采用的超滤膜截留分子量为3000-10000Da,二级超滤所采用的超滤膜截留分子量为1000Da，一级超滤的透过液进行二级超滤，其中一级超滤的操作压力为1Mpa-3Mpa，二级超滤的操作压力为1.5MPa-3.5MPa。具体的，步骤3）中葡聚糖凝胶柱层析法分离纯化条件：层析柱100×1.8cm，流动相为蒸馏水，流速1.5mL/min，上样量为5mL，检测波长为280nm，收集峰III(时间275-330min)。进一步优选的，步骤3）中选用的是葡聚糖G-10，粒径40-120µm。具体的，步骤1）中芝麻脱脂采用溶剂萃取法或亚临界萃取法，溶剂萃取时，采用石油醚、正已烷或乙醚进行脱脂；亚临界萃取时，采用丁烷、丙烷脱脂。提取蛋白时，按照料液比（w/v）为1g：6-30mL加入蒸馏水。采用氢氧化钠将pH调节为10-12，室温搅拌30-90min。离心条件为：3500-5000r/min离心20-40min；采用盐酸将上清液的pH调至4-5。本专利技术还提供了上述多肽作为主要功能成分在制备降血压和/或降血糖药物、保健品、食品、日化用品等领域中的应用。与现有技术相比，本专利技术具有如下优点：1）本专利技术所用的原料为芝麻或低温芝麻饼粕，来源广泛，有成本优势且不影响其他芝麻组分利用，同时，产品附加值高，具有开发利用价值；2）本专利技术提供的芝麻活性多肽，安全性高（见附表2），且具有降血压和/或降血糖活性功效；3）本专利技术提供的芝麻多肽活性显著，不仅可以作为食品添加剂，也可以作为功能性成分应用于药物、保健品及日化用品中。附图说明图1为实施例1葡聚糖柱层析的谱图；图2为实施例1提取所得芝麻多肽样品在Nano-LC-ESI-MS/MS中的二级质谱图；图3为实施例2中人工合成活性多肽的HPLC图；图4为实施例2中人工合成活性多肽的质谱图；图5为芝麻多肽HPSPR与人体血管紧张素酶的对接图；图6为芝麻多肽HPSPR与人体DPP-IV的对接图。具体实施方式以下结合实施例和附图，对本专利技术的技术方案作进一步地详细介绍，但本专利技术的保护范围并不局限于此。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员未做出创造性劳动前提下所获得的其他实施例，都属于本专利技术的保护范围。实施例1一种从芝麻蛋白中提取芝麻多肽的方法，其具体包括如下步骤：1）芝麻蛋白提取：取2kg无杂质和霉粒的芝本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从芝麻蛋白中获得的具有降血压与降血糖活性的多肽，其特征在于，该多肽由5个氨基酸组成，其序列为：His-Pro-Ser-Pro-Arg。/n

【技术特征摘要】
1.一种从芝麻蛋白中获得的具有降血压与降血糖活性的多肽，其特征在于，该多肽由5个氨基酸组成，其序列为：His-Pro-Ser-Pro-Arg。


2.一种权利要求1所述多肽的制备方法，其特征在于，采用固相合成法制备多肽。


3.一种从芝麻蛋白中提取权利要求1所述多肽的方法，其特征在于，包括下述步骤：
1）芝麻蛋白提取：
将除杂后的芝麻粉碎、脱脂，加入蒸馏水，调节pH到10-12，离心后，收集上清液，调节pH到4-5，离心，收集沉淀，水洗，冷冻干燥，获得芝麻蛋白；
2）蛋白酶解：
将步骤1）所得芝麻蛋白，按1g:10-30mL加入蒸馏水，90-100℃加热15-40min，冷却至室温，将pH值调至1.5-2.5，加入芝麻蛋白质量0.5-2.5%的胃蛋白酶，于30-50℃搅拌酶解2-6h，随后调节pH至7.5-9.0，加入芝麻蛋白质量0.5-2.5%胰糜蛋白酶，于30-50℃酶解2-8h，调节pH至4.0-4.5，离心取上清液，4-10℃低温备用；
3）分离纯化：
将步骤2）所得上清液调节pH到7.0，采用...

【专利技术属性】
技术研发人员：芦鑫，贾聪，孙强，高锦鸿，王瑞丹，张丽霞，宋国辉，黄纪念，
申请(专利权)人：河南省农业科学院，
类型：发明
国别省市：河南;41