达玛烷皂苷元和齐墩果烷皂苷元衍生物及其制备和应用制造技术

本发明专利技术属于医药技术领域，涉及达玛烷皂苷元和齐墩果烷皂苷元衍生物及其制备方法和应用。本发明专利技术通过将植物来源的达玛烷皂苷的酸水解产物或分离后的皂苷元灌胃给予SD大鼠，收集7周的生物样本，并采用乙酸乙酯进行样本物的提取，而后对提取所得浸膏进行分离纯化后，依赖于化学和光谱实验精确鉴定其结构，并探讨其生物合成途径的推导过程。本发明专利技术对该衍生物进行抗癌生物活性评价及机制研究，结果表明，本发明专利技术制备的达玛烷皂苷元和齐墩果烷皂苷元衍生物具有明显的抗癌作用。可以用于制备治疗癌症的药物。

【技术实现步骤摘要】
达玛烷皂苷元和齐墩果烷皂苷元衍生物及其制备和应用
：本专利技术属于医药
，涉及达玛烷皂苷元和齐墩果烷皂苷元衍生物及其制备方法和应用，具体涉及达玛烷皂苷元体内生物转化的一系列具有新代谢位点的达玛烷皂苷元和齐墩果烷皂苷元衍生物及其制备方法和在制备抗癌药物中的应用。
技术介绍
：达玛烷皂苷元通过其母核构架主要可分为达玛烷型，奥克梯隆型，齐墩果烷型以及其他类。齐墩果烷型皂苷为五环三萜达玛烷皂苷元，但是在目前的研究中，发现了Ro，Ri这两种达玛烷皂苷元为齐墩果烷型母核。达玛烷型皂苷则主要为四环三萜类结构。习惯性按其母核上羟基数量划分为二醇型(如Ra1，Ra2，Rb1，Rb2，Rb3，Rc，Rd，Rg3和Rh等)和三醇型(如Re，Rg2，Rf和Rh)，其区别在于：二醇型为C-3，C-12，C-20位各含有一个羟基位。而三醇型则是在C-3，C-6，C-12，C-20位各含有一个羟基。人参、西洋参、三七等为五加科人参属植物，现代科学研究，从人参、西洋参、三七等植物中发现的大量达玛烷皂苷元类成分是本属植物中的主要功能物质。在本属植物的地上部分(茎叶)的研究中也发现了结构相同和相似的达玛烷皂苷元类衍生物。目前，国内的一类抗癌新药“参一胶囊”已经于2003年上市，新药的主要成分为人参中发现的二醇组双糖苷—达玛烷皂苷元Rg3。这为人参属植物的充分利用和开发成药用资源提供了重要机遇和依据。本课题组大量的前期研究已证明，来自人参属植物的人参，西洋参和三七茎叶中的达玛烷皂苷元及其衍生物具有抗肿瘤活性。尤其对本课题组发现的20(R)-25-甲氧基-原人参二醇和20(R)-25-羟基-原人参二醇及其同系物的系列研究，首次发现了达玛烷皂苷元侧链结构变化产生的新构效关系成为达玛烷型衍生物结构修饰过合成研究的热点课题。达玛烷类化合物在人参属植物中大量存在。现代药理学研究表明，达玛烷皂苷元具有显著的抗肿瘤、免疫调节和提高生命质量等多种生物活性，低剂量达玛烷皂苷元就可以促进肿瘤细胞向正常方向分化。因此，该成分在肿瘤防治中的研究和应用已经成为国际肿瘤治疗界的研究热点之一。在达玛烷型皂苷元的分类中，基于它们的糖苷配基，将它们分类为(20S)-原人参二醇和(20S)-原人参三醇基团。人参总皂苷及单体化合物对于促进癌细胞凋亡，促进分化，提高癌细胞对化疗药的敏感性，同时在提高机体的免疫力等方面有重要的作用，可用于多种癌症的预防阶段和治疗阶段。针对其抗肿瘤活性，本课题组以及其他的课题组进行了一系列的研究。郭玉梅等研究发现达玛烷皂苷元和低糖链的皂苷具有显著的抗肿瘤作用。在本课题组的研究中，25-甲氧基-原人参二醇(25-OCH3-PPD，AD-1)，是人参酸水解产物分离出来的有潜力的抗癌天然化合物。它表现出对多种癌细胞的活性，如乳腺癌，前列腺，肺癌，胃癌和胰腺癌。与已在中国被批准为癌症治疗药物的Rg3相比，该化合物对几种癌细胞系的生长具有10-100倍的细胞毒活性。经体内25-OCH3-PPD的药代动力学研究发现，在血浆中它可以代谢产生25-OH-PPD。到目前为止，关于25-OCH3-PPD代谢的研究数量有限。仅检测了哺乳动物肝微粒体中的代谢，为了获得更多关于其代谢的信息以改善其临床应用，25-OCH3-PPD的代谢命运是必须理解的。本专利技术通过口服给予大鼠25-OCH3-PPD后，从收集的粪便中发现了新的达玛烷皂苷元和齐墩果烷皂苷元衍生物，同时也发现一种齐墩果烷皂苷元具有优异的抗肿瘤活性。所以本专利技术旨在发现活性更好的先导化合物，从而开发新的癌症抑制剂。
技术实现思路
：本专利技术的目的是提供一种达玛烷皂苷元体内生物转化衍生物，包括达玛烷皂苷元和齐墩果烷皂苷元衍生物，该系列衍生物具有生物合成途径可追溯的代谢规律和特征，代谢位点具有新颖性，扩环产物不仅代谢率高且具有更高的抗癌作用，本专利技术还提供了该类衍生物的制备方法。本专利技术的技术方案如下：本专利技术提供了经体内生物转化后制备得到的达玛烷皂苷元和齐墩果烷皂苷元衍生物及其盐和异构体：其中：R为H、C1-C4烷基、羟基、C1-C4羧基、羟基取代的C1-C4烷基、C1-C4醛基；所述的衍生物及其盐和异构体可以为：本专利技术优选如下达玛烷皂苷元和齐墩果烷皂苷元衍生物及其盐和异构体：式A中，R为H、C1-C4烷基、羟基取代的C1-C4烷基、C1-C4羧基；式B中，R为H、C1-C4烷基、羟基、C1-C4醛基、羟基取代的C1-C4烷基、C1-C4羧基；式C中，R为H、C1-C4烷基；式D中，R为H、C1-C4烷基；式E中，R为H、C1-C4烷基；式F中，R为H、C1-C4烷基；式G中，R为H、C1-C4烷基；本专利技术优选如下达玛烷皂苷元和齐墩果烷皂苷元衍生物及其盐和异构体：本专利技术以大鼠灌胃给予母药：20(R)-25-甲氧基-原人参二醇，得到确定代谢位点和代谢规律，进行代谢谱和生物合成途径推测：20(R)-25-甲氧基-原人参二醇所述的达玛烷皂苷元来自于五加科植物人参、西洋参、三七等及葫芦科植物绞股蓝中总皂苷酸水解产物。本专利技术提供了上述达玛烷皂苷元和齐墩果烷皂苷元衍生物的制备方法，包括以下步骤：步骤1：灌胃药液的配制；步骤2：大鼠灌胃，制备血液、尿液、粪便和胆汁的生物样品；步骤3：步骤2得到的各生物样本浸膏进行柱层析分离，得到不同的达玛烷皂苷元和齐墩果烷皂苷元衍生物1a,2a,4a,7a,1b,3b-7b,1c,5c,6d,1e,7e,5f,5g；步骤4：根据步骤3得到的达玛烷皂苷元和齐墩果烷皂苷元的结构，进行代谢谱和生物合成途径推测，根据本专利技术得到的确定代谢位点和代谢规律预测得到生物合成途径上可接受的达玛烷皂苷元和齐墩果烷皂苷元衍生物3a,5a,6a,8a-12a,2b,8b-12b,2c-4c,6c-12c,1d-5d,7d-12d,2e-6e,8e-12e,1f-4f,6f,1g-4g,6g；具体地，本专利技术包括如下步骤：步骤1：将五加科植物人参、西洋参、三七等及葫芦科植物绞股蓝中的皂苷酸水解产物或分离后的皂苷元，置于锥形瓶中，用尽量少的乙醇超声溶解，然后慢慢加入丙二醇，同时不断用玻璃棒搅拌，最后逐滴加蒸馏水，得到澄清透明无药品析出的灌胃药液；步骤2：将步骤1得到的灌胃药液，根据大鼠重量给药(1mL/100g)，收集24h的生物样本(包括血液、尿液、粪便和胆汁)，经离心、过滤等处理后，置于冰箱中冻存。此过程持续7周后，将所得所有生物样本混合，进行超声提取、减压浓缩后，得到各生物样本浸膏；步骤3：将步骤2得到的各生物样本浸膏进行柱层析分离，得到不同的达玛烷皂苷元和齐墩果烷皂苷元衍生物1a,2a,4a,7a,1b,3b-7b,1c,5c,6d,1e,7e,5f,5g；步骤4：根据步骤3得到的不同的达玛烷皂苷元和齐墩果烷皂苷元的结构，进行代谢谱和生物合成途径推测本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.具有A、B、C、D、E、F或G结构所示的达玛烷皂苷元和齐墩果烷皂苷元衍生物：/n

【技术特征摘要】
1.具有A、B、C、D、E、F或G结构所示的达玛烷皂苷元和齐墩果烷皂苷元衍生物：



其中，R为H、C1-C4烷基、羟基、C1-C4羧基、羟基取代的C1-C4烷基、C1-C4醛基。


2.权利要求1所述的具有A、B、C、D、E、F或G结构所示的达玛烷皂苷元和齐墩果烷皂苷元衍生物，选自：











3.权利要求1所述的具有A、B、C、D、E、F或G结构所示的达玛烷皂苷元和齐墩果烷皂苷元衍生物，
其中，
式A中，R为H、C1-C4烷基、羟基取代的C1-C4烷基、C1-C4羧基；
式B中，R为H、C1-C4烷基、羟基、C1-C4醛基、羟基取代的C1-C4烷基、C1-C4羧基；
式C中，R为H、C1-C4烷基；
式D中，R为H、C1-C4烷基；
式E中，R为H、C1-C4烷基；
式F中，R为H、C1-C4烷基；
式G中，R为H、C1-C4烷基。


4.权利要求1-3任何一项所述的具有A、B、C、D、E、F或G结构所示的达玛烷皂苷元和齐墩果烷皂苷元衍生物，选自：





5.一种药物组合物，包含权利要求1-4中任何一项所述的具有A、B、C、D、E、F或G结构所示的达玛烷皂苷元和齐墩果烷皂苷元衍生物中的一种或几种和药学上可接受的载体。


6.如权利要求2所述的达玛烷皂苷元和齐墩果烷皂苷元衍生物的制备方法，其特征在于，
步骤1：灌胃药液的配制；
步骤2：大鼠灌胃，制备血液、尿液、粪便和胆汁的生物样品；
步骤3：步骤2得到的各生物样本浸膏进行柱层析分离，得到不同的达玛烷皂苷元和齐墩果烷皂苷元衍生物1a,2a,4a,7a,1b,3b-7b,1c,5c,6d,1e,7e,5f,5g；
步骤4：根据步骤3得到的达玛烷皂苷元和齐墩果烷皂苷元的结构，进行代谢谱和生物合成途径推测，根据本发明得到的确定代谢位点和代谢规律预测得到生物合成途径上可接受的达玛烷皂苷元和齐墩果烷皂苷元衍生物3a,5a,6a,8a-12a,2b,8b-12b,2c-4c,6c-12c,1d-5d,7d-12d,2e-6e,8e-12e,1f-4f,6f,1g-4g,6g。


7.如权利要求6所述的达玛烷皂苷元和齐墩果烷皂苷元衍生物的制备方法，其特征在于，
步骤3中，采用分段分离的方式，首先进行粗分离，常压冲柱，分别使用石油醚：乙酸乙酯＝10～20:1，3～8:1，1～2:1，1:2～5洗脱，分别得混合馏分1-10；
混...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵余庆，丁萌，王旭德，张雨蒙，徐磊，
申请(专利权)人：辽宁新中现代医药有限公司，
类型：发明
国别省市：辽宁;21