早老性痴呆的检测方法技术

本发明专利技术公开了对早老性痴呆实验对象的诊断和预测方法。该方法包括测定实验对象是否存在阿朴脂蛋白Ｅ４型（ＡＰＯＥ４）同型物或对ＡＰＯＥ４编码的ＤＮＡ。ＡＰＯＥ４的存在表明实验对象患有早老性痴呆或处于发展为早老性痴呆的危险中。（*该技术在2013年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及诊断和预测早老性痴呆(AD)的方法。老年斑和亲刚果红型(congophilic)血管病是畸型细胞外结构，该结构被发现大量存在于患早老性痴呆病人的大脑中。对这些结构的生化组成已有广泛的研究，以更好地认识这种痴呆病发病和机理的可能规律。成熟的老年斑是一种混合结构，包括由淀粉样原纤维组成的中心核，它由营养不良的轴索、轴索末端和树突、小神经胶质的纤维性的星形细胞包围，见D.SelkoeNeuron6.487-498(1991)导致congophilic血管病的血管周围的老年斑的淀粉样蛋白核，是含39到43个氨基酸的肽，即所谓β-淀粉样蛋白(Aβ)肽，见G、GlennerandC.Wong，Biochem.Biophys.Res.Comm.120，885-890(1984)。Aβ肽在早老性痴呆、唐氏综合症、Dutch类遗传性大脑出血和老年大脑中被发现，见K.KosikScience256，780-783(1992).Aβ是由更大的蛋白，即淀粉样蛋白前体(APP)非正常蛋白分解产生的。见K，BeyreutherandC.Masters，BrainPath.1，241-251(1991)。老年斑和congophilic血管病所含蛋白还包括βA肽。通过使用抗体对前体蛋白的氨基端和羧基端的识别进行组织化学研究已确认了老年斑中的APP本身。见F.Tagliavineetal.，Neurosci.Lett.128，117-120(1991);C.Joachimetal.，Amer.Jour.Path.138，373-384(1991);这些蛋白在细胞外空间聚积与老年斑和congophilic血管病相联系的机理还不清楚。对早老性痴呆机理大量研究的同时，还需要继续寻找新途径研究和制止这种疾病。本专利技术公开了诊断或预测早老性痴呆的方法，本专利技术的一个实施方案包括检测在实验对象中是否存在或将阿朴脂蛋白E4型(ApoE4)同型物(isoform)编码的DNA.另一个实施方案包括检测是否存在或缺少ApoE4isoform。存在ApoE4isoform或对ApoE4isoform编码的DNA表明实验对象患有早老性痴呆或处于发展为早老性痴呆的危险中。本专利技术前述和其它目的以及本专利技术各方面情况由附图详细解释并在下面进行说明。附图简要说明附图说明图1顶端的一组调查对象，表示与固定βA肽和潜伏期后的控制肽(“偶氢肽”、或“E.H.”)结合的脑脊髓液中蛋白和;用磷酸盐缓冲的盐溶液洗脱，柱1;用5%十二烷基硫酸钠洗脱，柱2;用4摩尔浓度尿素洗脱，柱3;或用6摩尔浓度胍盐酸盐洗脱，柱4。用免疫组织化学染色对底部一组调查对象的着色表示结合的阿朴脂蛋白E。图2.顶端的一组调查对象，表示脑脊髓液中蛋白与不同固定肽的结合。对阿朴脂蛋白E的结合。也通过免疫组织化学染色对底部一组调查对象的着色表示。图3.表示从实验对象与ApoE4等位基因0、1和2开始反应开始的时间。每条曲线都被ApoE4等位基因号标记。“大”号表示在短时间间隔内的多次诊断。开始反应曲线通过Kaplan-Meier产物极限分布进行估算并可清楚地区分(Logrank卡方＝53.8，自由度2，P＜0.0001)。如上所述，本专利技术提供一种对实验对象患早老性痴呆进行普查(例如，诊断或预测)的方法。该方法包括检测实验对象是否出现或缺少ApoE4isoform或对ApoE4编码的DNA。如出现这种isoform或DNA则表示实验对象患有早老性痴呆或有发展成早老性痴呆的危险。合适的实验对象包括早期没有被诊断为患早老性痴呆者，早期被确定有发展为早老性痴呆危险者，以及被诊断为患早老性痴呆而想要确诊者。例如，被诊断或确定患有痴呆的病人，特别是早期临床表现正常但确定为患有痴呆发展趋向的病人，都是合适的实验对象。因此，本专利技术可用于检测家族性早老痴呆(晚期发作和早期发作)以及偶发性早老性痴呆。检测ApoE4或对ApoE4编码的DNA可通过任何合适的方法直接或间接地实现。各种技术是本领域技术人员公知的。一般都包括从实验对象收集含DNA或ApoE4的生物样品，然后从该样品检测实验对象是否存在ApoE4或存在对该isoform编码的DNA。例如，检测步骤可以通过从实验对象收集ApoE样品(例如，从脑背髓液或任何其它含ApoE的体液或组织)、然后确定在ApoE样品中是否存在或缺少ApoE4isoform(例如，用等电聚积或免疫测定方法)。另外，检测步骤可以通过从实验对象收集含DNA的生物样品、然后确定该生物样品中是否存在或缺少对ApoE4isoform编码的DNA来实现。该实验对象含DNA的任何生物样品都可使用，包括组织样品和血液样品，其中血细胞是十分方便的来源。要确定对ApoE4isoform编码的DNA是否存在，可通过由合适检测基因标记的寡核苷酸探针来进行，或通过如聚合酶链反应或连接酶链反应这样的放大作用来进行(放大作用的产物可以用标记过的寡核苷酸探针检测)。进一步来说，检测步骤可以包括检测实验对象对将ApoE4isoform编码的基因是杂合子的还是纯合子的。已知多种不同寡核苷酸探针检验可以实现本专利技术。见，例如，美国专利号4，302，204Wahl等;美国专利号4，358，535，Falkow等;美国专利号4，563，419，Ranki等;以及美国专利号4，994，373，Stavrianopoulos等。(申请人特别想把这里所列的所有已公开的美国专利作为参考资料)。选择的核酸顺序或目标核酸顺序的放大可以通过任何合适的方法实现。见generallyD.Kwohand7.Kwoh，Am.Biotechnol.Lab.8，14-25(1990)。合适的放大技术的例子包括但不限于，聚合酶链反应，连接酶链反应，线置换放大(见generallyG.Walkeretal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA89，392-396(1992);G.Walkeretal.NucleicAcidsRes.20，1691-1696(1992)，转录碱基放大(见D.Kwohetal.，ProcNatl.AcadSci.USA86，1173-1177(1989)，自持顺序复制(or“3SR”)(见J.Guatellietal.Proc.Natl.Acad.Sci.USA87，1874-1878(1990)，QB复制酶体系(见P.Lizardietal.，BioTechnology6，1197-1202(1988))，核酸序列一碱基放大(or“NASBA”)(见R.Lewis，GeneticEngineeringNews12(9)，1(1992))，修复链反应(or“RCR”)(见R.Lewis，Supra)，boomerangDNA放大(or“BDA”)(见R.Lewis，Supra).聚合酶链反应是当前的优选方法。通常，如前文一样DNA放大技术包括使用一个探针、一对探针或两对探针，它们专门与对ApoE4编码的DNA相结合，但在相同杂化条件下不与将ApoE2或ApoE3编码的DNA结合，这些探针作为ApoE4DNA放大的一个或多个引物或作为放大作用的一部分(同样，也可以使用专门与对ApoE2编码的DNA结合的一个本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种诊断和预测实验对象患早老性痴呆的方法，其中出现阿朴脂蛋白Ｅ４型同型物（ＡｐｏＥ４）说明该实验对象患早老性痴呆或和处于发展成早老性痴呆的危险中，所说的方法包括：测定所说的实验对象是否存在ＡｐｏＥ４。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：AD罗斯，WJ斯特里特马特，GS塞尔温森，J恩格黑尔德，DE施梅凯尔，
申请(专利权)人：杜克大学，
类型：发明
国别省市：US[美国]