一种超高效液相色谱测定酒石酸美托洛尔及片杂质的方法技术

本发明专利技术属于分析化学领域，具体涉及一种超高效液相色谱测定酒石酸美托洛尔及片杂质的方法，该方法是采用Waters超高效液相色谱仪，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，流动相以混合缓冲溶液和乙腈的体积比为97：3为流动相A，以混合缓冲溶液和乙腈的体积比为30：70为流动相B，进行梯度洗脱。该方法不仅能同时完全分离检测各药典中收载的11个已知杂质，且利用本发明专利技术的方法还能分离检测酒石酸美托洛尔及片剂的其他杂质，特别是杂质Q及麦芽酚，能更简便，高效，准确的确保酒石酸美托洛尔及片的质量可控，并最终确定产品的安全。

【技术实现步骤摘要】
一种超高效液相色谱测定酒石酸美托洛尔及片杂质的方法
本专利技术属于分析化学领域，具体涉及用超高效液相色谱测定酒石酸美托洛尔及片杂质的方法。
技术介绍
酒石酸美托洛尔(MetoprololTartrate)，化学名为(±)-1-异丙氨基-3-[4-(2-甲氧乙基)苯氧基]-2-丙醇L(+)-酒石酸盐，其分子式为(C15H25NO3)2·C4H6O6，分子量为684.82，CAS号为56392-17-7，其结构式见下式(a)化合物。酒石酸美托洛尔是一种选择性β-1肾上腺素受体阻断剂。1975年4月18日，酒石酸美托洛尔片由阿斯利康公司在瑞典上市，商品名为Seloken，规格为50mg和100mg。主要用于治疗高血压、心绞痛、心肌梗死等疾病。在酒石酸美托洛尔的合成过程中，会产生一些相关的工艺杂质或降解杂质，这些杂质可能会由于去除不完全而影响原料的纯度和质量，而相关的降解杂质会影响酒石酸美托洛尔片的质量和稳定性，目前已知的工艺及降解杂质共13个，故需将这13个杂质在酒石酸美托洛尔原料药及制剂中进行质量控制，因此，实现酒石酸美托洛尔及片杂质的分离和测定对酒石酸美托洛尔原料及制剂的生产和贮存具有重要的意义，这13个杂质的结构式如下：目前对于酒石酸美托洛尔有关物质的分析检测方法在中国药典，美国药典，欧洲药典及英国药典中均有收载，均采用高效液相色谱法。其中中国药典采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，醋酸盐缓冲液(取醋酸铵3.9g，加水810ml溶解，加三乙胺2.0ml，冰醋酸10.0ml，磷酸3.0ml，摇匀)-乙腈＝824：146为流动相进行等度洗脱，流速为2ml/min，柱温为30℃，检测波长为280nm，进样体积为20μl，检测时间为主峰保留时间的3倍，采用加校正因子的自身对照法进行杂质的检测；欧洲药典与英国药典相同，均采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以醋酸铵3.9g，加水810ml溶解，加三乙胺2.0ml，磷酸3.0ml，冰醋酸10.0ml，溶解，加入乙腈146ml混匀作为流动相进行等度洗脱，流速为1ml/min，检测波长为280nm，进样体积为20μl，检测时间为主峰保留时间的3倍，采用加校正因子的自身对照法进行杂质的检测；美国药典采用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6mm×150mm；5μm)，1.3g/L十二烷基硫酸钠(含0.1％(w/v)磷酸)：乙腈＝600：400为流动相进行等度洗脱，流速为1ml/min，柱温为30℃，检测波长为223nm，进样体积为10μl，采用外标法进行杂质的检测；但是以上方法均不能同时将上述描述的13个杂质同时分离并检出。另外，酒石酸美托洛尔片有关物质的分析检测方法在中国药典，美国药典及英国药典中均有收载，其中中国药典的检测方法同酒石酸美托洛尔项下，英国药典的检测方法与酒石酸美托洛尔项下基本相同，美国药典采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6mm×150mm；5μm)，以醋酸铵3.9g，加水810ml溶解，加三乙胺2.0ml，磷酸3.0ml，冰醋酸10.0ml(调pH为3.7)为流动相A，以乙腈：流动相A＝70：30为流动相B进行梯度洗脱，梯度洗脱方法为：0分钟维持流动相A为90％，流动相B为10％；0分钟至15分钟，流动相A线性减少至80％，流动相B线性增加至20％；15分钟至30分钟，流动相A线性减少至40％，流动相B线性增加至60％；30分钟至40分钟，流动相A维持40％，流动相B维持60％；40分钟至40.1分钟，流动相A线性增加至90％，流动相B线性减少至10％；40.1分钟至45分钟，流动相A维持90％，流动相B维持10％。流速为1ml/min，检测波长为275nm，进样体积为20μl，采用外标法进行杂质的检测；但以上三种方法均不能同时将上述描述的13个杂质同时分离并检出。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种超高效液相色谱测定酒石酸美托洛尔及片杂质的方法，该方法通过加校正因子的酒石酸美托洛尔对照品外标法能同时达到上述13种杂质的分离和含量检测，大大提供工作的效率，节约时间成本。为实现上述目的，本专利技术的技术方案为：一种超高效液相色谱测定酒石酸美托洛尔及片杂质的方法，所述超高效液相色谱法分析过程中采用的色谱柱是以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相以混合缓冲溶液和乙腈的体积比为97：3为流动相A，以混合缓冲溶液和乙腈的体积比为30：70为流动相B进行梯度洗脱，所述梯度洗脱方法为：0分钟至3分钟，流动相A为100％，流动相B为0％；3分钟至12分钟，流动相A线性减少至85％，流动相B线性增加至15％；12分钟至15分钟，流动相A维持85％，流动相B维持15％；15分钟至25分钟，流动相A线性减少至50％，流动相B线性增加至50％；25分钟至30分钟，流动相A线性减少至0％，流动相B线性增加至100％；30分钟至35分钟，流动相A维持0％，流动相B维持100％；35分钟至37分钟，流动相A线性增加至100％，流动相B线性减少至0％；37分钟至40分钟，流动相A维持100％，流动相B维持0％。本专利技术所述的方法适用于上述的13种杂质的分离和检测，可用于单独检测某一种杂质，也可同时分离和检测这13种杂质，与现有技术相比，本专利技术的方法更快捷，提高了效率，具有显著的进步性。本专利技术所述的超高效液相色谱法为反相液相色谱法，采用的色谱柱是以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，所述的十八烷基硅烷键合硅胶颗粒粒径为1.7μmμm，色谱柱柱长为100mm，内径为2.1mm，优选WatersACQUITYBEHC18色谱柱。采用所述的色谱柱进行分离时，色谱柱适用的柱温范围为30-40℃，优选35℃。上述的方法中，所述的混合缓冲溶液为磷酸盐与冰醋酸的混合水溶液，pH为5.3-5.7，优选5.5。上述的方法中，所述的磷酸盐为磷酸二氢钾，磷酸二氢钠，磷酸二氢铵，磷酸氢二钾，磷酸氢二钠和磷酸氢二铵中的一种或多种，优选为磷酸二氢钠。上述的方法中，所述混合缓冲溶液中磷酸盐的浓度为0.015-0.025mol/L，优选为0.02mol/L；冰醋酸的体积百分浓度为1.8％-2.2％，优选为2％。上述的方法中，本专利技术所述的一种超高效液相色谱测定酒石酸美托洛尔及片杂质的方法，当采用所述的超高效液相色谱法，所述的流动相进行洗脱时，流动相的流速为0.38-0.42ml/min，优选为0.4ml/min。上述方法中，进样量为1-5μl，优选2μl。洗脱后采用DAD检测器进行检测，紫外检测器也适用，检测波长为273-277nm，优选275nm。本专利技术的具体步骤为：分别配制系统适用液，对照溶液，灵敏度试液和原料及片剂供试品溶液并进样，通过加校正因子的酒石酸美托洛尔对照品外标法计算供试品中各杂质的含量。上述系统适用液为：分别取上述13种杂质对照品约12.5mg，精密称定，置25ml量瓶中，加溶剂适量使溶解并定容至刻度，摇匀，作为杂质贮备液，上述各杂质贮备液分别量取0.本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.超高效液相色谱测定酒石酸美托洛尔及其片剂杂质的方法，其特征在于，采用超高效液相色谱法，DAD检测器或紫外检测器，色谱柱是以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相以混合缓冲溶液和乙腈的体积比为97：3为流动相A，以混合缓冲溶液和乙腈的体积比为30：70为流动相B，检测波长为273-277nm，柱温30-40℃，流速为0.38-0.42ml/min，进样量为1-5μl，进行梯度洗脱；/n所述混合缓冲溶液为磷酸盐与冰醋酸的混合水溶液，pH为5.3-5.7，所述梯度洗脱方法为：0分钟至3分钟，流动相A为100％，流动相B为0％；3分钟至12分钟，流动相A线性减少至85％，流动相B线性增加至15％；12分钟至15分钟，流动相A维持85％，流动相B维持15％；15分钟至25分钟，流动相A线性减少至50％，流动相B线性增加至50％；25分钟至30分钟，流动相A线性减少至0％，流动相B线性增加至100％；30分钟至35分钟，流动相A维持0％，流动相B维持100％；35分钟至37分钟，流动相A线性增加至100％，流动相B线性减少至0％；37分钟至40分钟，流动相A维持100％，流动相B维持0％；/n所述杂质为：/n...

【技术特征摘要】
1.超高效液相色谱测定酒石酸美托洛尔及其片剂杂质的方法，其特征在于，采用超高效液相色谱法，DAD检测器或紫外检测器，色谱柱是以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相以混合缓冲溶液和乙腈的体积比为97：3为流动相A，以混合缓冲溶液和乙腈的体积比为30：70为流动相B，检测波长为273-277nm，柱温30-40℃，流速为0.38-0.42ml/min，进样量为1-5μl，进行梯度洗脱；
所述混合缓冲溶液为磷酸盐与冰醋酸的混合水溶液，pH为5.3-5.7，所述梯度洗脱方法为：0分钟至3分钟，流动相A为100％，流动相B为0％；3分钟至12分钟，流动相A线性减少至85％，流动相B线性增加至15％；12分钟至15分钟，流动相A维持85％，流动相B维持15％；15分钟至25分钟，流动相A线性减少至50％，流动相B线性增加至50％；25分钟至30分钟，流动相A线性减少至0％，流动相B线性增加至100％；30分钟至35分钟，流动相A维持0％，流动相B维持100％；35分钟至37分钟，流动相A线性增加至100％，流动相B线性减少至0％；37分钟至40分钟，流动相A维持100％，流动相B维持0％；
所述杂质为：





2.根据权利要求1所述的超高效液相色谱测定酒石酸美托洛尔及其片剂杂质的方法，其特征在于，色谱柱填充剂的颗粒粒径为1.7μmμm，色谱柱柱长为100mm，内径为2.1mm。


3.根据权利要求1-2任一项所述的超高效液相色谱测定酒石酸美托洛尔及其片剂杂质的方法，其特征在于，色谱柱为WatersACQUITYBEHC18色谱柱。


4.根据权利要求2所述的超高效液相色谱测定酒石酸美托洛尔及其片剂杂质的方法，其特征在于，磷酸盐与冰醋酸混合水溶液的pH为5.5。


5.根据权利要求4所述的超高效液相色谱测定酒石酸美托洛尔及其片剂杂质的方法，其特征在于，磷酸盐为磷酸二氢钾，磷酸二氢钠，磷酸二氢铵，磷酸氢二钾，磷酸氢二钠和磷酸氢二铵中的一种或多种。


6.根据权利要求5所述的超高效液相色谱测定酒石酸美托洛尔及其片剂杂质的方法，其特征在于，磷酸盐为磷酸二氢钠。

【专利技术属性】
技术研发人员：杨琪，刘燕，王静，刘彩霞，王丽丽，刘延新，杨帅，刘亚芳，国璐路，
申请(专利权)人：山东省药学科学院，
类型：发明
国别省市：山东;37