一种人参属中药中皂苷成分的分离方法技术

本发明专利技术实施例提供了一种人参属中药中皂苷成分的分离方法，包括：将待测品溶液依次经离子交换色谱‑亲水相互作用色谱‑反相色谱进行分离。采用本申请的分离方法，可以实现将人参属中药中的皂苷成分进行更系统地分离；进一步地，通过质谱检测，可以获得更全面的皂苷成分鉴定结果、发现更多微量皂苷。

【技术实现步骤摘要】
一种人参属中药中皂苷成分的分离方法
本专利技术涉及中药成分分离
，特别是涉及一种人参属中药中皂苷成分的分离方法。
技术介绍
五加科人参属植物多数对机体具有补益作用，其中以人参(Panaxginseng)、西洋参(P.quinquefolius)和三七(P.notoginseng)最为著名。这三种植物的根、茎叶、花均可作药用或保健品的原料，应用广泛。系统植化研究表明，人参、西洋参、三七的地上和地下部分，包括根、茎叶和花，均含有丰富的人参皂苷，为主要活性成分。例如，人参花具有提高免疫力、抗衰老、降低血糖与血压等功效；西洋参花具有提高免疫力和记忆力、抗溃疡、安神补脑等功效；三七花具有抗炎、抗氧化、抗癌、镇静安神、保护神经、提高免疫力等功效。然而，由于现有分析技术的局限，难以对人参属中药中的皂苷进行全面、精细的分离，继而影响了后续对皂苷成分的全面、准确的检测与鉴定，因此亟需一种分析方法，以对皂苷成分进行更全面并且有效的分离。
技术实现思路
本专利技术实施例的目的在于提供一种人参属中药中皂苷成分的分离方法，以实现人参属中药中皂苷成分的更系统、更精细的分离。具体技术方案如下：本申请提供了一种人参属中药中皂苷成分的分离方法，包括：以体积分数为60-80％的甲醇水溶液为溶剂，配制浓度为500-1000mg/mL的待测品溶液；(1)将所述待测品溶液经离子交换色谱进行第一维分离，获得第一分段样品组；其中，离子交换色谱分离条件包括：固定相：强阴离子交换色谱柱；>流动相：A相为含有体积分数为0.05-0.15％冰醋酸的9.5-10.5mM醋酸铵水溶液，B相为甲醇；采用15-25％A相，75-85％B相进行等度洗脱；柱温30-40℃；流速0.5-0.7mL/min；(2)将所述第一分段样品组中的各样品，经亲水相互作用色谱进行第二维分离，获得第二分段样品组；其中，亲水相互作用色谱分离条件包括：固定相：酰胺基键合亚乙基杂化硅胶色谱柱；流动相：A相为0.01-1％甲酸水溶液，B相为乙腈；采用10-50％A相，50-90％B相进行梯度洗脱；柱温30-40℃；流速0.5-1.5mL/min；(3)将所述第二分段样品组中的各样品，经反相色谱进行第三维分离；其中，反相色谱分离条件包括：固定相：极性修饰十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相：A相为0.01-1％甲酸水溶液，B相为乙腈；采用5-85％A相，15-95％B相进行梯度洗脱；柱温30-40℃；流速0.2-0.4mL/min；经反相色谱分离后的样品通过质谱检测，获得人参属中药中皂苷成分的质谱图。本申请中，专利技术人出人预料地发现通过离子交换色谱-亲水相互作用色谱-反相色谱三种不同机制色谱构建的离线全三维色谱能够对皂苷成分全面、精细地进行分离。不限于理论，专利技术人认为第一维离子交换色谱实现酸性皂苷、中性皂苷的初步分离；第二维亲水相互作用色谱按照极性差异，实现酸性皂苷与中性皂苷进一步分离；第三维反相色谱按照分配机制实现皂苷成分的色谱分离。本申请在全三维色谱分离后采用质谱对分离后的皂苷成分进行鉴定，本领域技术人员可根据实际需要选择合适的质谱条件和数据处理方法。在本申请的一些实施方式中，所述第一维分段样品组中包括两个分段样品，其中0-9分钟的分段样品为中性皂苷分段样品，9-50分钟的分段样品为酸性皂苷分段样品。在本申请的一些实施方式中，第一维分离时可以采用多次进样的方式，将不同批次分离得到的中性皂苷分段样品和酸性皂苷分段样品分别混合、浓缩，作为第一分段样品组，用于第二维分离。在本申请的一些实施方式中，所述亲水相互作用色谱分离条件中，梯度洗脱具体包括：0-12分钟，90-83％B；12-14分钟，83-81％B；14-24分钟，81-74％B；24-25分钟，74-50％B；25-30分钟，50％B；30-31分钟，50-90％B；31-37分钟，90％B。在本申请的一些实施方式中，所述反相色谱分离条件中，梯度洗脱具体包括：0-5分钟，15％-23％B；5-15分钟，23-28％B；15-22分钟，28-29％B；22-33分钟，29-36％B；33-33.5分钟，36-55％B；33.5-37分钟，55-95％B；37-40分钟，95％B。在本申请的一些实施方式中，为了有效获得分离后的化合物的分子离子峰以及特征碎片，以便于与色谱分离的保留时间相结合，以获得更准确的皂苷成分的鉴定结果，所述质谱优选为四极杆-静电场轨道阱质谱，质谱条件包括：采用ESI离子源，在负离子模式下，采用FullMS/dd-MS2扫描方法，参数设置如下：FullMS全扫描范围m/z250-1500，分辨率为70,000；MS2扫描分辨率为13,500；动态排除时间为8.0s，分离宽度为6.0m/z。在本申请的一些实施方式中，所述ESI离子源的参数设置包括：喷雾电压值：2.5-3.5kV，毛细管温度：300-400℃，辅助气温度：350-450℃，碰撞能量：20/30/40V，鞘气：30-40arb，辅助气：5-15arb，吹扫气：0-5arb；其中鞘气、辅助气和吹扫气均为氮气。在本申请的一些实施方式中，人参属中药中皂苷成分的分离方法还包括：将获得的化合物的保留时间、质谱图与已知皂苷成分的保留时间、质谱图进行比对，确定人参属中药中的皂苷成分。本领域技术人员可以根据本申请的方法分离的化合物的保留时间、以及质谱结果中的母离子、二级碎片的质荷比，与商业数据库、已发表的文章中已公开的皂苷成分的保留时间、母离子、二级碎片的质荷比等信息进行比对，或者通过将已知的皂苷标准品采用与待测品溶液相同的方法进行分离和鉴定，获得的皂苷标准品的保留时间、母离子、二级碎片的质荷比等信息，与分离的化合物的信息进行比对，以确定待测品溶液中的皂苷成分，此为本领域常用的技术手段，本领域技术人员可根据实际需要选择比对的方式，本申请在此不做限制。本专利技术实施例采用全三维色谱分离人参属中药中皂苷成分的方法，即以离子交换色谱-亲水相互作用色谱-反相色谱三种不同机制色谱构建离线全三维色谱，可以实现将人参属中药中的皂苷成分通过酸碱度、极性与分配系数等性质，进行更系统、更细致地分离；进一步地，通过质谱检测，可以获得更全面的皂苷成分鉴定结果。专利技术人于研发时，共筛选过多种不同填料的色谱柱，不同比例的有机相，不同浓度的水相添加剂，以及不同的柱温，综合评价了选择性、分离度、重现性等因素，获得了以上优选方案。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单的介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1A和图1B为74个皂苷标准品的化学结构式；图2为基于固定变异本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人参属中药中皂苷成分的分离方法，包括：/n以体积分数为60-80％的甲醇水溶液为溶剂，配制浓度为500-1000mg/mL的待测品溶液；/n(1)将所述待测品溶液经离子交换色谱进行第一维分离，获得第一分段样品组；/n其中，离子交换色谱分离条件包括：/n固定相：强阴离子交换色谱柱；/n流动相：A相为含有体积分数为0.05-0.15％冰醋酸的9.5-10.5mM醋酸铵水溶液，B相为甲醇；/n采用15-25％A相，75-85％B相进行等度洗脱；柱温30-40℃；流速0.5-0.7mL/min；/n(2)将所述第一分段样品组中的各样品，经亲水相互作用色谱进行第二维分离，获得第二分段样品组；/n其中，亲水相互作用色谱分离条件包括：/n固定相：酰胺基键合亚乙基杂化硅胶色谱柱；/n流动相：A相为0.01-1％甲酸水溶液，B相为乙腈；采用10-50％A相，50-90％B相进行梯度洗脱；柱温30-40℃；流速0.5-1.5mL/min；/n(3)将所述第二分段样品组中的各样品，经反相色谱进行第三维分离；/n其中，反相色谱分离条件包括：/n固定相：极性修饰十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；/n流动相：A相为0.01-1％甲酸水溶液，B相为乙腈；采用5-85％A相，15-95％B相进行梯度洗脱；柱温30-40℃；流速0.2-0.4mL/min；/n经反相色谱分离后的样品通过质谱检测，获得人参属中药中皂苷成分的质谱图。/n...

【技术特征摘要】
1.一种人参属中药中皂苷成分的分离方法，包括：
以体积分数为60-80％的甲醇水溶液为溶剂，配制浓度为500-1000mg/mL的待测品溶液；
(1)将所述待测品溶液经离子交换色谱进行第一维分离，获得第一分段样品组；
其中，离子交换色谱分离条件包括：
固定相：强阴离子交换色谱柱；
流动相：A相为含有体积分数为0.05-0.15％冰醋酸的9.5-10.5mM醋酸铵水溶液，B相为甲醇；
采用15-25％A相，75-85％B相进行等度洗脱；柱温30-40℃；流速0.5-0.7mL/min；
(2)将所述第一分段样品组中的各样品，经亲水相互作用色谱进行第二维分离，获得第二分段样品组；
其中，亲水相互作用色谱分离条件包括：
固定相：酰胺基键合亚乙基杂化硅胶色谱柱；
流动相：A相为0.01-1％甲酸水溶液，B相为乙腈；采用10-50％A相，50-90％B相进行梯度洗脱；柱温30-40℃；流速0.5-1.5mL/min；
(3)将所述第二分段样品组中的各样品，经反相色谱进行第三维分离；
其中，反相色谱分离条件包括：
固定相：极性修饰十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；
流动相：A相为0.01-1％甲酸水溶液，B相为乙腈；采用5-85％A相，15-95％B相进行梯度洗脱；柱温30-40℃；流速0.2-0.4mL/min；
经反相色谱分离后的样品通过质谱检测，获得人参属中药中皂苷成分的质谱图。


2.根据权利要求1所述的分离方法，其中，所述第一分段样品组中包括两个分段样品，其中0-9分钟的分段样品为中性皂苷分段样品，9-50分钟的分段样品为酸性皂苷分段样品。


3.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨文志，李雪，胡莹，贾丽，高秀梅，
申请(专利权)人：天津中医药大学，
类型：发明
国别省市：天津;12