快速检测有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂的组合物及检测方法技术

本发明专利技术涉及一种快速检测有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂的组合物及检测方法。组合物组成包括α－ＮＡ、β－ＮＡ、固兰Ｂ、ＫＨ↓［２］ＰＯ↓［４］、Ｎａ↓［２］ＨＰＯ↓［４］、Ｍａ↓［２］Ｓ↓［２］Ｏ↓［３］及酶。检测方法，检测方法包括将按上述配比混合制成粉剂分装在医用胶囊中保存的α－ＮＡ、β－ＮＡ、固兰Ｂ、ＫＨ↓［２］ＰＯ↓［４］、Ｎａ↓［２］ＨＰＯ↓［４］、Ｍａ↓［２］Ｓ↓［２］Ｏ↓［３］组合物用水溶解于试管中，再将溶液分成两部分，一管做参比，一管加杀虫剂，按特殊要求或相应浓度将用上述酶的固定化酶滤纸裁成１×３ｃｍ长条，分别浸入试管中，５ｍｉｎ后在室内进行显色对比。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及组合物，特别涉及一种。有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂杀虫剂是第二次世界大战后开始发展起来的，并是发展速度最快的一类杀虫药剂，仅有机磷类杀虫剂全世界已有300-400种原药，其广泛使用的基本品种近10种，占整个杀虫剂基本品种的70％，国内至今也有数十个品种投入生产，由于这类杀虫剂具有品种多、药效高、用途广等优点，因此在目前使用的杀虫剂中占有重要的地位。在我国市场供应品种的农药杀虫剂中，50％以上属于有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂，但其生产的总吨数远大于其他杀虫剂品种，使用量占总量的70％以上，这类杀虫剂因价格低、产生抗药性的速度和程度均低于拟除虫菊酯类杀虫剂，颇受农民欢迎，但因此，假货劣货也比较多。近年来伪劣农药坑害农事件的报道多见报端，已造成严重的损失和极坏的影响。管理好农资产品的生产和流通，实数当务之急，对于农药类的质量，虽已有必要的检测方法和手段，但多局限于在特定的实验室内进行，技术监督部门乃至用户缺少快速、便捷的检测方法及时对农药的真伪作出判断，目前尚未发现国内外有关农药快速检验技术研究的报道，更未见到市场上有此类商品出售，北京市商委和农办都要求我局提供农药快速定性检测的手段，为此专利技术者开展这方面的研究工作，其目的在于为技术监督部门、农资流通领域的有关单位，乃至农业生产用户提供一种快速便捷的鉴别真假伪劣的定性检测方法和实用手段。目前现有技术中用酶抑制法判别农药有效成分已有一些研究，但并未实用化。没有进入实用的原因主要是生物酶灵敏度高但稳定性差，难以长时间保存。因此，本专利技术的主要目的是为了提供一种能够减少实验室内仪器分析的工作量，在短时间内对大量有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂进行筛选的手段，通过该手段可检测出的少量不合格的产品，然后再进行仪器分析；另一方面，该手段也可以作为农药经营部门或使用部门甚至农民对有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂进行初步检验的方法。具体的本专利技术的目的体现在提供提取容易、成本较低、灵敏度较高而且可以长时间保存的酶；提供最佳的底物和显色剂；提供快速检测有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂的组合物，提供快速检测有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂检测方法。本专利技术主要研究能对有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂杀虫剂的进行现场快速定性检验方法及其使用的组合物，其中方法如试纸法，其为技术监督部门乃至用户提供一种便捷的现场检验方法和手段，及时对此类农药杀虫剂的真伪作出定性判断，保证农业生产免受损失。其中，本专利技术所提供的酶包括种子酶或生物酶，如面粉羧酸酯酶、马血清丁酰胆碱酯酶、家蝇乙酰胆碱酯酶或家蝇羧酸酯酶，其中，各种酶的制备及、固化、测定、选择方法在以下有详细叙述。其中，本专利技术所提供的底物包括按一定比例组合的α-NA和β-NA，显色剂为固兰B，其中α-NA和β-NA的最佳配比为2∶1。因此，本专利技术所提供的组合物的组成包括α-NA、β-NA、固兰B、KH2PO4、Na2HPO4、Ma2S2O3及酶。本专利技术所提供的组合物的组成配比(重量份数表示)为组份 配比α-NA0-200；β-NA0-200；固兰B0.1-1000；KH2PO40-1000；Na2HPO40-1000；Ma2S2O30-1000；酶 0.001-1。本专利技术所提供的组合物的组成的优选配比(重量份数表示)为组份 配比α-NA 0.18；β-NA 0.09；固兰B 50；KH2PO481.2；Na2HPO49.47；Ma2S2O31.43；酶 0.05。本专利技术所提供的快速检测有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂检测方法为将按上述配比混合制成粉剂分装在医用胶囊中保存的α-NA、β-NA、固兰B、KH2PO4、Na2HPO4、Ma2S2O组合物130mg-150mg用10ml水溶解于试管中，再将溶液分成两部分各5ml，一管做参比，一管加农药配成1000mg/L，按特殊要求或相应浓度将用上述酶的固定化酶滤纸裁成1×3cm长条，分别浸入试管中，5min后在室内进行进行显色对比。其中酶滤纸的制备方法为将定性或定量滤纸在酶液中浸泡1min，取出后放于玻璃板上，在置于小型通风橱中阴干，酶即被吸附在滤纸上。醋酸纤维素薄膜的处理方法与滤纸相同；其中面粉羧酸酯酶液的制备方法为按面粉水为1∶1-1∶3.0的比例混合均匀后，用磁力搅拌器搅拌20min，然后在3500-4500g离心5min，取上清液装入塑料管，置-20℃保存备用；其中家蝇AchE和羧酸酯酶液的制备方法为将家蝇头、胸和腹部用剪刀剪断，分别进行匀浆，匀浆液在3500-4500g离心5min，上清液置-20℃保存备用，头部以AchE为主，腹部以羧酸酯酶为主；其中马血清丁酰胆碱酯酶液购自北京生物制品研究所；本专利技术的研究过程包括用离体法筛选合适的酶、筛选合适的底物和显色剂、研究现场快速检测劣假农药杀虫剂的定性方法、研究长期保存的方法。本专利技术所提供的有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂的组合物及检测方法的检验原理是基于有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂属于神经毒剂，其共同的毒性机制是抑制生物体内的乙酰胆碱酯酶(AchE)活性，造成乙酰胆碱(Ach)的积累，影响正常的神经传导，使昆虫致死。AchE属于以丝氨酸残基为活性中心的酶类，羧酸酯酶与AchE类似，同样以丝氨酸残基作为活性中心，因此对AchE有抑制作用的有机磷和氨基甲酸酯类药剂同样对羧酸酯酶有抑制作用。因此，依据样本对AchE或羧酸酯抑制作用的有无或大小，即可判断有机磷或氨基甲酸酯类药剂的有机或含量多少。其检测原理如下样本+酶→酶活性被抑制→底物不被水解→不变色→含有机磷或氨基甲酸酯药剂样本+酶→酶活性部分被抑制→底物水解量减少→溶液或滤纸有一定红色(比对照浅)→含量不够样本+酶→酶活性正常→底物被水解→溶液或滤纸变红→不含有机磷或氨基甲酸酯药剂本专利技术所提供的酶源包括面粉羧酸酯酶、马血清丁酰胆碱酯酶、家蝇乙酰胆碱酯酶和家蝇羧酸酯酶；所涉及的其它组份包括α或β-乙酸萘酯(α-NA或β-NA)，上海试剂一厂产品；固蓝B盐或固蓝RR盐，Fluka公司产品；KH2PO4、Na2HPO4、Ma2S2O3均为分析纯或化学纯。酶及底物显色剂的筛选方案如下本专利技术中涉及的酶的制备与固定化的方法包括其中面粉羧酸酯酶的制备方法为按面粉∶水为1∶2.5的比例混合均匀后，用磁力搅拌器搅拌20min，然后在3500-4500g离心5min，取上清液装入塑料管，置-20℃保存备用；其中家蝇AchE和羧酸酯酶的制备方法为将家蝇头、胸和腹部用剪刀剪断，分别进行匀浆，匀浆液在3500-4500g离心5min，上清液置-20℃保存备用，头部以AchE为主，腹部以羧酸酯酶为主；其中马血清丁酰胆碱酯酶购自北京生物制品研究所；其中酶的固定化方法为将定性或定量滤纸在酶液中浸泡1min，取出后放于玻璃板上，在置于小型通风橱中阴干，酶即被吸附在滤纸上。醋酸纤维素薄膜的处理方法与滤纸相同；其中羧酸酯酶的测定方法为羧酸酯酶的测定主要以α-NA和β-NA为底物，以固蓝B盐作显色剂，在600nm或555nm测定光吸收值。本专利技术中所涉及的酶源的选择结果为分别以家蝇、面粉和马血清作酶源测定了常用有机磷和氨基甲酸酯灯杀虫剂的抑制能力。表1至表12显示出常见药剂对家绳、面粉和马血清来源的酯酶的抑制中浓度(I50)和抑制90％(I90)值。表本文档来自技高网...

【技术保护点】
快速检测有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂的组合物，其中组成包括α－ＮＡ、β－ＮＡ、固兰Ｂ、ＫＨ↓［２］ＰＯ↓［４］、Ｎａ↓［２］ＨＰＯ↓［４］、Ｍａ↓［２］Ｓ↓［２］Ｏ↓［３］及酶。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李林，
申请(专利权)人：北京市计量科学研究所，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]