检测HIV抗体的方法及该方法中使用的抗原技术

本发明专利技术涉及利用免疫测定法检测抗ＨＩＶ的抗体的方法，其中使用了至少一种ＨＩＶ１－Ｄ亚型分离物的ｅｎｖ基因产物ｇｐ４１的抗原，和至少一种衍生自ＨＩＶ１Ｍ组不同亚型的ｇｐ４１的抗原，和／或使用了至少一种ＨＩＶ１－Ｅ亚型分离物的ｇｐ４１的抗原，和至少一种衍生自ＨＩＶ１Ｍ组不同亚型的ｇｐ４１的抗原。本发明专利技术还涉及分别含有衍生自ＨＩＶ１－Ｄ亚型分离物的ｇｐ４１和ＨＩＶ１－Ｅ亚型分离物的ｇｐ４１的组分的抗原和抗原混合物，及其用于检测ＨＩＶ抗体和用作试剂盒的用途。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及利用免疫测定法检测抗HIV的HIV抗体的方法，其中使用了至少一种衍生自HIV1-D亚型分离物的gp41，尤其是共有区-D序列的氨基酸(AA)518-533的表位区域(＝表位区域II)的抗原，和至少一种衍生自HIV1 M组不同亚型分离物的gp41相应区域的抗原，和/或使用了至少一种衍生自HIV1-E亚型分离物的gp41，尤其是共有区-E序列的AA 551-565的表位区域(＝表位区域I)的抗原，和至少一种衍生自HIV1 M组不同亚型分离物的gp41相应区域的抗原。本专利技术还涉及分别含有衍生自HIV1-D亚型的env-基因产物gp41和HIV1-E亚型的gp41的组分的抗原和抗原混合物，及其用于检测HIV抗体和用作试剂盒的用途。AIDS(获得性免疫缺损综合征)是由HIV病毒引起的获得性免疫缺损疾病。目前已知的病原体是HIV1和HIV2，这两个病毒株在形态学，细胞嗜性，与T细胞CD4受体的相互作用，在体外对CD4细胞的致细胞病变效应，大体的基因组结构和导致疾病AIDS的能力方面是相似的(Clavel，1987，AIDS 1，135-140)。然而，它们的免疫学相关程度很低，以致于HIV1特异性抗体一般不与HIV2发生任何交叉反应。除了最常见的HIV1-M组亚型外，还发现了另一个HIV1亚型，即O亚型(Myers等，LosAlamos数据库，1994；Sharp等，AIDS增刊8，p27-42，1994)，然而，HIV1-M组的感染占优势。除了基本的关联外，单个HIV M组亚型的一些基因组区域表现出相当大的序列差异，部分导致蛋白质水平的不均一性。因此，可能会发生诸如此类的情况，即包括检测组分和/或能与HIV1-A亚型特异性反应的抗原的HIV抗体检测不能与HIV1-B亚型样品反应。这会导致错误的阴性试验结果，而从患者的利益出发，无论如何应避免这种情况的发生。现有技术已知可使用衍生自HIV env区域的肽来检测抗HIV的抗体。因此，EP-A-0 326 490中描述了用于检测HIV抗体的合成肽，该肽分别衍生自HIV1的gp41区域和HIV2的gp36区域(被称为gp42)。用这些肽不可能完全测定抗不同HIV1亚型，尤其是占优势的HIV1 M组亚型的抗体。在WO 95/33206中，公开了同时检测抗gp41，gp36和gag-p24的抗体的免疫学方法。该方法遵照的是如EP-A-0 280 211所述的桥试验原理，其中两个抗原将需检测的抗体连接起来，其中一个抗原与固相结合，通过另一个抗原携带的标记物可检测连接抗体。在WO 95/33206公开的方法中，用作抗原的肽分别衍生自gp41(HIV1)和gp36(HIV2)和衍生自HIV1 gag-p24。所公开的gp41肽序列衍生自HIV1 O和B亚型。用此方法不可能进一步检测亚型以确保能可靠地和足够灵敏地检测出HIV M组的其它亚型。Apetrei等(AIDS 1996，vol.10，pp.F57-F60)描述了这样一个问题，即当使用目前已知的可商购试验时，因HIV1-M组中的血清学不均一性，会得到错误的阴性结果。目前市售的用于诊断HIV检测的筛选试验能检测HIV1 B亚型，但非B亚型类，如A，E或G亚型不能被检测或仅呈微弱的阳性。因此，现有技术已知的免疫学检测方法具有相当多的缺点。在法国专利申请FR-A1-2 730 493中，描述了得自HIV1 MAD株的糖蛋白gp120和gp41多肽。HIV1 MAD株可能属于M组的D亚型。此申请提到因HIV的高度可变性所致的错误的阴性检测反应是检测HIV感染的问题所在，但该申请中未公开解决此问题的任何方法。因此，本专利技术的目的是提供检测抗HIV，尤其是抗HIV1亚型的抗体的改良方法。该改良方法应能确保特异性地、清楚地检测到广泛分布的M组亚型。利用免疫测定法检测抗HIV的抗体的方法达到了此目的，其中(a)使用了至少一种衍生自HIV1-D亚型分离物的gp41，优选衍生自表位区域II＝共有区-D序列的AA 518-533的抗原，和至少一种衍生自HIV1 M组不同亚型分离物的gp41相应区域的抗原，和/或(b)使用了至少一种衍生自HIV1-E亚型分离物的gp41，优选衍生自表位区域I＝共有区-E序列的AA 551-565的抗原，和至少一种衍生自HIV1 M组不同亚型分离物的gp41相应区域的抗原。借助于本专利技术的方法，能基本克服现有技术的缺点，这意味着能更可靠地检测被HIV1 M组亚型感染的患者样品。令人惊奇地是，使用衍生自env基因产物gp41，尤其是衍生自不同HIV1亚型的gp41的表位区域I和II的序列的抗原，可更可靠地检测M组亚型和O亚型所致的HIV感染。本专利技术的方法中使用至少一种衍生自D亚型分离物的gp41(表位区域II＝共有区D序列的AA 518-533)的抗原，和/或至少一种衍生自E亚型分离物的gp41(表位区域I＝共有区E序列的AA 551-565)的抗原，可确保更可靠地检测含有抗M组亚型蛋白质的抗体的样品。而且，用此试验也可非常好地检测低抗体浓度的样品中不同的HIV亚型。本专利技术的方法能使错误的阴性诊断结果的危险大大降低。对本专利技术的方法而言，优选以不同抗原的混合物形式使用抗原。这可以降低抗体浓度高的样品中Hook效应的危险，因为混合物一般含有高亲和性的抗原以及低亲和性的抗原。本专利技术的方法也可以使用确定的抗原序列。可在本领域技术人员已知的所有方法的范围内使用本专利技术的方法，用于免疫学检测HIV感染，尤其是检测HIV抗体。所述方法包括例如均相的和非均相的免疫测定法。当使用均相的方法时，反应后，即抗体和分析物结合之后无需将固相和液相分开。在均相免疫测定法中，当分析物的存在导致抗体和抗原交联时会出现浊度，通过浊度常常能分辨出分析物的检测。基于浊度测定法的这些方法也被称为比浊法。在本专利技术的方法中，所用抗原可以是例如与浓度成比例地被样品中存在的抗体交联的多聚体抗原(聚半抗原)。然而，优选的是非均相的方法。例如，根据桥试验和夹心原理的方法是非均相的方法。在桥试验中，待检测的抗体与结合于固相的具有标记抗原的抗原连接。免疫学反应之后，将固相与液相分开，测定其中一相中的标记物。信号水平为分析物(此时为抗体)的量或浓度的测定值。在夹心试验中，与固相结合的抗体捕获分析物。第二个经标记的抗体也与分析物结合。按与桥试验类似的方法进行固相和液相的分离以及标记物的检测。所述方法应不会限制本专利技术的免疫学检测法，相反还会阐明之。特别优选根据桥试验原理进行本专利技术的方法，也特别优选同时使用检测特异性抗体的桥试验和检测特异性抗原的夹心试验的联合检测法(称为联合试验)。在本专利技术中，借助于本专利技术的抗原和抗原混合物可检测特异性的HIV抗体。当使用特异于一个或几个HIV抗原的抗体时，夹心法可同时检测这些抗原。德国专利申请DE 197 09 762.6描述了能同时检测HIV抗原和抗体的联合试验。在这种联合试验中，优选使用本专利技术的检测法。专利申请DE 197 09 762.6的主题是使用受体R1至R6检测HIV感染的免疫学方法，优选为非均相的方法。此方法中使用的受体R1和R2特异性地与待测的HIV1-p24和/或HIV2-p26抗原结合。所用受体R3本文档来自技高网...

【技术保护点】
利用免疫测定法检测抗ＨＩＶ的抗体的方法，其中（ａ）使用了至少一种ＨＩＶ１－Ｄ亚型分离物的ｇｐ２４抗原，和至少一种衍生自ＨＩＶ１ Ｍ组不同亚型的ｇｐ４１的抗原，和／或（ｂ）使用了至少一种ＨＩＶ１－Ｅ亚型分离物的ｇｐ２４抗原，和至少一种 衍生自ＨＩＶ１ Ｍ组不同亚型的ｇｐ４１的抗原。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：F多尼，E法兹，E霍尔斯，
申请(专利权)人：罗赫诊断器材股份有限公司，
类型：发明
国别省市：DE[德国]