一种新的多肽--人含TFIIS特征性序列片段的锌指蛋白51和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－人含ＴＦⅡＳ特征性序列片段的锌指蛋白５１，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如恶性肿瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病和各类炎症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人含ＴＦⅡＳ特征性序列片段的锌指蛋白５１的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——人含TFIIS特征性序列片段的锌指蛋白51，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。真核基因的转录调控对于基因的正常表达及发挥生物学功能是十分重要的，通常由转录调控因子来完成这一过程。转录调控因子在生物体内参与决定基因在何种组织及何种发育阶段开始转录，编码这类蛋白的基因如发生突变，不但该基因自身不能正常表达，而且受其调节的许多基因也不能正常的进行转录与表达。转录因子对基因表达的调控主要通过转录因子与特定的DNA序列结合、转录因子间的相互作用及转录因子与常规转录机构的相互作用在完成。根据结构基序的不同，已知的DNA结合蛋白可主要分为两类含有螺旋-转角-螺旋基序的蛋白及锌指蛋白。锌指蛋白为编码锌离子介导的核苷酸结合蛋白多基因家族中的成员，锌指蛋白按其结构特征又可分为各种不同的类型，如C2H2型、C3HC4型、CCHC型及CCCH型等。人们已从酵母、果蝇、鼠及人等多种生物体中分离得到了各种类型的锌指蛋白。果蝇Kruppel相似的锌指蛋白为C2H2型锌指蛋白中分布最为广泛的，其在生物体内有着重要的生物学功能。这些基因均含有C2H2型锌指蛋白的特征性连续重复的C2-H2锌指结构域。研究发现，这些蛋白与基因的转录活化及抑制有关，这些蛋白的表达异常将引发各种发育紊乱性疾病、各种肿瘤的发生、各种遗传性疾病及免疫系统疾病。所有的C2H2型锌指蛋白Kruppel家族的成员均含有28-30个氨基酸长的保守的指重复序列(F/Y)XCXXCXXXFXXXXXLXXHXXXHTGEKP，其中一些特定的氨基酸残基位点为高度保守的。这一序列在很多不同的锌指蛋白中均含有多个拷贝，其拷贝数不同(锌指个数不同)则功能也不同。锌指蛋白与不同长度的DNA的结合依赖于指结构的数量，多指结构可能与复合物的结合稳定性有关，而复合物是RNA聚合酶转录的作用位点。研究发现，许多锌指蛋白的锌指结构域相互连接区域也是高度保守的，这一区域通常含有下列序列His-Thr-Gly-Gly-Lys-Pro-(Tyr,Phe)-X-Cys，其中组氨酸与半胱氨酸为金属离子的结合位点，而X为可变氨基酸残基。这一区域对于锌指结构的形成是必需的，指结构的数量将直接影响锌指蛋白与不同长度的DNA结合，且多指结构与复合物的结合稳定性有关。转录因子S-Ⅱ(TFIIS)即是一种真核蛋白，对于RNA多聚酶Ⅱ的转录延长是必需的。该转录因子只有在RNA聚合酶Ⅱ存在时才显示与DNA的结合活性。TFIIS约由300个氨基酸残基组成，且在哺乳动物、果蝇、酵母中均高度保守。该转录因子家族的成员均含有一高度保守的区域，这一保守区域含有四个半胱氨酸残基与锌离子结合并折叠成一锌带状结构。除半胱氨酸外，这一保守区域还含有其它保守的氨基酸残基，该保守区域由如下所示的一致性序列片段组成C-X(2)-C-X(9)------X----X(6)-C-X(2,5)-C-X(3)-；其中四个半胱氨酸残基为锌配键形成的位点。所有该蛋白家族的成员均含有这一保守的序列片段。该序列片段可能是蛋白与核苷酸序列结合的识别位点，其特殊位点的突变将导致蛋白不能正常的与DNA结合，从而影响相关基因在体内的表达。研究发现，该蛋白家族的成员该转录因子家族的成员在生物体内调控着RNA聚合酶Ⅱ延伸复合物的转录活性，而其作用位点主要是其高度保守的序列片段，该序列片段在体内通过调节蛋白与DNA的结合，来调节RNA聚合酶Ⅱ的转录延伸。这一序列片段与生物体内一些原癌基因及病毒的表达，包括人免疫缺陷型病毒HIV-1的表达密切相关。而其突变将导致蛋白的表达异常，从而导致一些基因在体内的异常增殖，其通常与生物体内一些免疫缺陷型疾病、各种肿瘤及癌症等疾病的发生相关。本专利技术的新的人含TFIIS特征性序列片段的锌指蛋白同时含有C2H2型锌指蛋白Kruppel家族特征性结构域及转录因子TFIIS家族的特征性序列片段，该两个结构域在蛋白作用过程中协同作用，调控着生物体内各种组织基因及一些原癌基因、病毒的表达，该新蛋白与各种固体肿瘤及一些发育紊乱性疾病的发生有关，可用于诊断及治疗各种相关的恶性肿瘤、癌症及发育、代谢紊乱症等。由于如上所述人含TFIIS特征性序列片段的锌指蛋白51蛋白在机体内重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人含TFIIS特征性序列片段的锌指蛋白51蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人含TFIIS特征性序列片段的锌指蛋白51蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——人含TFIIS特征性序列片段的锌指蛋白51以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人含TFIIS特征性序列片段的锌指蛋白51的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人含TFIIS特征性序列片段的锌指蛋白51的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人含TFIIS特征性序列片段的锌指蛋白51的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——人含TFIIS特征性序列片段的锌指蛋白51的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——人含TFIIS特征性序列片段的锌指蛋白51的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与人含TFIIS特征性序列片段的锌指蛋白51异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO:1中158-1564位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-2460位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人含TFIIS特征性序列片段的锌指蛋白51蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与人含TFIIS特征性序列片段的锌指蛋白51蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人含ＴＦＩＩＳ特征性序列片段的锌指蛋白５１，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博道基因技术有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]