唐氏综合症一步快速免疫诊断检测盒或检测条制造技术

本发明专利技术系利用半定量一步法诊断法，检测与唐氏综合症相关抗原指标的血液浓度，可早期预测唐氏综合症。本法仅需数滴血液或血清，于特定时间内将试验区（Ｔ）色带深浅与对照区（一个或数个）比较，即可决定待测指标的浓度范围。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种免疫诊断检测盒或检测条及其诊断方法，尤是针对“唐氏综合症”血液中的相关抗原作出快速检测的检测盒或检测条及其诊断方法。“唐氏综合症”Down’s Syndrom(缩写DS)即第21对染色体为3倍体，是一种常见先天性遗传性的智力发育障碍，新生儿含有不同程度痴呆，呈现精神呆滞，其发病率为千分之1.3。故在妊娠期早期诊断是优生的十分重要的一环。现有的早期诊断方法是母体妊娠期诊断，用羊膜穿刺或绒毛膜取样，这种方法具有损伤性，可诱发流产，其发生率为0.5-1.5％。本专利技术目的在于提供一种能一步快速安全检测唐氏综合症免疫诊断检测盒或检测条及其诊断方法。本专利技术是通过检测孕妇血液中与“唐氏综合症”相关的指标，如绒毛膜促性腺激素(hCG)及其β-亚单位绒毛膜促性腺激素(β-hCG)，甲胎蛋白(α-FP)，妊娠相关血浆蛋白A(Pregnancy-Associated PlasmaProtein A，缩写PAPP-A)。本专利技术是在先申请的“半定量一步法免疫诊断法”申请号98122892.5的应用。基于抗原、抗体、可见颗粒标记以及固相层析的原理。可见颗粒标记包括象金标、硒标、碳标等。用半定量检测与“唐氏综合症”相关抗原在血液中浓度。本专利技术的唐氏综合症一步快速免疫诊断检测盒或检测条，由标记抗体固相区；固相膜层析区；对照区；试验区；吸水纸分贴在一个平面板上组成。固相膜层析区的层析膜为涂固有抗体的层析膜，标记抗体固相区的标记抗体为可见颗粒标记抗体如象金标、硒标、碳标等。检测盒用于检测绒毛膜促性腺激素(hCG)时，所述的标记抗体固相区的标记抗体由抗绒毛膜促性腺激素单克隆抗体和胶体金溶液、复合化学组分组成。当检测盒或检测条用于检测绒毛膜促性腺激素(hCG)时，所述的包被抗体含有另一配对的抗绒毛膜促性腺激素单克隆抗体。当检测盒或检测条用于检测甲胎蛋白(α-FP)时，标记抗体固相区的标记抗体由作用于抗原不同位点上的抗α-FP单克隆抗体和胶体金溶液，复合化学组分组成。当检测盒或检测条用于检测甲胎蛋白(α-FP)时，所述的包被抗体含有另一配对的抗α-FP单克隆抗体。本专利技术是在检测与唐氏综合症相关的血液指标中的指标如绒毛膜促性腺激素(hCG)及其β-亚单位绒毛膜促性腺激素(β-hCG)、甲胎蛋白(α-FP)、妊娠相关血浆蛋白A(Pregnancy-Associated Plasma ProteinA，缩写PAPP-A)中应用。本专利技术的检测盒或检测条含有或不含有待测物质抗原阻断剂。本专利技术的唐氏综合症一步快速免疫诊断方法，包括有以下步骤(1)唐氏综合症一步快速免疫诊断检测盒或检测条；(2)待测物质为唐氏综合症相关的抗原血液浓度；(3)设定试验区和对照区，对照区颜色深浅程度代表待测物质的某一特定浓度即临界值，待测物质于检测盒或检测条的试验区所形成的色带与检测盒或检测条的对照区的色带颜色进行对比，以半定量方式决定待测物质抗原的浓度水平再以此判断唐氏综合症的可能性。其待测物质为绒毛膜促性腺激素(hCG)及其β-亚单位绒毛膜促性腺激素(β-hCG)、甲胎蛋白(α-FP)、妊娠相关血浆蛋白A(Pregnancy-Associated Plasma Protein A，缩写PAPP-A)。检测的血液中与唐氏综合症相关的指标是通过检测盒或检测条进行检测，检测盒或检测条的固相膜上设有试验区(T)和对照区(一个对照区C，或二个对照区C1/C2)。对照区色带深浅相当于某特定浓度待测指标称临界值。比较试验区和对照区色带，可判断待测抗原浓度范围。如待测浓度高于(或低于)临界值，予示胎儿有较大可能性为“唐氏综合症”患者，需进一步随访确诊。检测盒或检测条包括一条层析吸收膜和一对能选择性鉴别待测样品血中相关抗原的单克隆抗体。层析膜的试验带上涂有相关单克隆抗体，而对照带上则涂有羊抗鼠抗体，其共分7个区，第1区是玻璃纤维膜，为样品吸收区，第2区为标记抗体固相区，第3区为固相膜层析区，第4区为对照区C1，是低临界值区，第5区为试验区T，第6区为对照区C2，是高临界值，第7区为吸水纸片，待测样滴加于第一区的玻璃纤维膜，展开剂以毛细管原理溶解第2区标记抗体、沿第3区层析膜上行。这时待测抗原成分与标记抗体形成紫色抗原抗体复合物。展开剂继续上行时，在第4、5、6区分别形成沉淀线。对照区“4、6”沉淀线颜色相当于“高”和“低”两个临界值(某些诊断只需一个临界值即检测盒或检测条只有一个对照区)。实验区“5”，即“T”的色带深浅与待测抗原含量成正比。抗原含量愈高色带愈深。在测试设定时间，约5-10分钟时，将“T”区的色带深浅与“C”区颜色比较，以决定抗原浓度范围。检测盒或检测条的制备方法1、标记抗体的制备将所需抗体加入所需量胶体金溶液，搅拌10分钟后，加入1/10体积的1％小牛血清蛋白液作稳定剂，高速离心，取得红色沉淀物，即标记抗体。2、将上述沉淀物溶解于缓冲剂F中，加之适量阻断剂，铺于玻璃纸上，真空抽干。3、包被抗体制备将与标记抗体相对应之另一抗体溶液用喷雾方法划线于硝基纤维膜上，于37℃烘干20分钟。4、装配将上述各组分贴在有胶面的塑料薄板上，上下两端再贴上吸水纸。切割成条，再装入塑壳之中。 附图说明如图1所示一步快速免疫诊断法的检测盒的结构示意图。1—第1区样品吸收区2—第2区标记抗体固相区3—第3区固相膜层析区4—第4区对照区C15—第5区试验区T6—第6区对照区C27—第7区吸水纸片由于孕期不同，血中相关抗原的含量也不同，按孕妇的周龄不同，检测盒共有四种，如表1所示。表1.不同孕龄的检测盒试验编号 用于测试孕妇的周龄14 1415 1516 1617 17实施例1DS-HCG测试1、材料单抗鼠抗体hCG标准品、吸水纸片、包被抗体是抗α-hCG单克隆抗体，标记抗体是抗β-hCG单克隆抗体、胶体金、硝基纤维膜、玻璃纤维膜、阻断剂、缓冲剂F。2、方法(1)标记抗体将所需量的抗β-hCG抗体加入相应量胶体金溶液，搅拌10分钟后，加1/10体积的1％小牛血清蛋白作稳定剂，高速离心，取得红色沉淀物即为标记抗体。(2)将上述沉淀物溶解于缓冲剂F，加之适量阻断剂，铺于玻璃纤维膜上，真空抽干。(3)包被抗体，将抗α-hCG单克隆抗体溶液用喷雾方法划线于硝基纤维膜上，于37℃烘干20分钟。(4)将上述各组分贴在有胶面的塑料薄板上，上下两端再贴上吸水纸，切割成条，制得本专利技术检测盒。孕妇血液中hCG浓度与孕周有关。唐氏综合症孕妇血中hCG的水平为正常值的1.94倍，具体数据如表2。表2正常与患者孕妇血液hCG水平 如某孕妇血液中hCG高于正常水平1.94倍，其婴儿患“唐氏综合”的可能性为65-75％。用于测定14周孕妇血样的检测盒，其第6区“C2”相当于hCG 64IU/ml水平，第4区“C1”相当于33IU/ml。测试时取14周孕妇血样，于加样后10分钟时，比较试验区“T”带与“C1带和C2”带的颜色深浅，如T＞C2，其婴儿患“唐氏综合症”的可能性为65-75％。以此类推其它孕周测试盒。3.操作方法如图1所示首先将14周孕妇血样滴加至第一区玻璃纤维膜1上，展开剂以毛细管原理溶解于第2区标记抗体固相区2中、沿第3区固相膜层析区3上行，约数分钟，第5本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种唐氏综合症一步快速免疫诊断检测盒或检测条，其特征在于由标记抗体固相区；固相膜层析区；对照区；试验区；吸水纸分贴在一个平面板上组成。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：卢惟钊，卢儆翊，顾芝萍，曹霖，
申请(专利权)人：卢氏实验公司，中国科学院上海药物研究所，
类型：发明
国别省市：US[美国]